蜂蜜中链霉素和双氢链霉素检测方案(旋涡混合器)

订购信息 蜂蜜中链霉素和双氢链霉素的测定 (Copure"HLB) 链霉素和双氢链霉素属于氨基糖苷类抗生素，对革兰氏阴性菌具有抑菌活性，可以预防多种动物疾病。在养蜂行业中，链霉素和双氢链霉素能够有效地治疗蜜蜂的腐蛆病，但由于管理和使用的不科学，常造成蜂产品中该类物质的残留。本实验参考国标 BJS 202103，对样品前处理进行优化后，建立了一个稳定可靠，回收率高，且适合动物源性蜂蜜中链霉素和双氢链霉素残留量测定的 SPE-UPLC-MS/MS 方法。 一、样品提取 准确称取 5 g试样于 50 mL离心管中，加入10 mL 提取液(含2%三氯乙酸的磷酸盐缓冲溶液)，涡旋混匀 1 min， 超声提取10 min， 再加入10 mL 提取液并定容至25mL，涡旋混匀 1 min 后超声提取 5 min， 在10000 r/min 离心5 min， 待净化。 二、 样品净化(Copure@HLB，60 mg/3mL) 活化：依次用3mL甲醇， 3mL水活化 Copure HLB 固相萃取小柱； 上样：取5 mL 待净化液至已活化好的固相萃取小柱； 淋洗：用2mL水淋洗固相萃取小柱两次，抽干小柱； 洗脱：用1mL 甲酸-乙腈-水(2：10：88，， v：v：v)溶液洗脱，收集洗脱液，用2%氨化乙腈1mL定容至2mL，涡漩，过滤膜，上机测试。 三、标曲配制 选同类型空白样品，依次加入适量混合标准中间溶液，按照样品提取和净化的步骤进行操作，配制成上机浓度分别为 2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL 的标准曲线。 四、仪器条件 (Thermo Fisher TSQ Endura) 液相部分： 色谱柱： Hilic (2.1 mmx100 mm，2.7 pm) 流动相： A： 5 mmol/L 乙酸铵溶液(含0.3%甲酸) B：乙腈(含0.3%甲酸) 流速：0.3mL/min 柱温：35℃ 进样量：10pL 洗脱程序：梯度洗脱表1 表1梯度洗脱程序 时间/min A/% B/% 0.0 10 90 0.5 10 90 2.5 90 10 4.0 90 10 4.1 10 90 5.0 10 90 质谱条件： 表2组分名称、保留时间及特征离子一览表(*为定量离子) 名称 母离子 子离子 链霉素 582.2 246.2，263.2* 双氢链霉素 584.2 246.0，263.0* 五、实验结果 5.1测试数据 表3加标回收率结果 化合物 5.00 pg/kg 10.0 ug/kg 20.0ug/kg 回收率% RSD%(n=3) 回收率% RSD%(n=3) 回收率% RSD%(n=3) 链霉素 81.6 6. 12 86.1 5.25 93.8 4.41 双氢链霉素 83.5 5.94 90.8 5.11 101 3.89 5.2测试色谱图 图1蜂蜜加标样品总离子流图(20.0 ug/kg) 货号 描述 包装 COHLB360 CopureHLB， 60 mg/3mL 50支/盒 SDC-3000-D biocomma@多管涡旋混匀仪 1台/箱 SF130-22-NL 尼龙针式过滤器，直径13mm，孔径0.22 um，有机系 100个/盒 BN24 智能水浴氮吹仪 1台/箱 SC2-1 2 mL 蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫， 9-425 100个/盒 V2-AL 2mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm， 9-425 100个/盒 一、样品提取  准确称取5 g试样于50 mL离心管中，加入10 mL 提取液（含2 %三氯乙酸的磷酸盐缓冲溶液），涡旋混匀1 min，超声提取10 min，再加入10 mL提取液并定容至25 mL，涡旋混匀1 min后超声提取5 min，在10000 r/min离心5 min，待净化。二、 样品净化（Copure® HLB,60 mg/3mL ）活化：依次用3 mL甲醇，3 mL水活化Copure® HLB固相萃取小柱；上样：取5 mL待净化液至已活化好的固相萃取小柱；淋洗：用2mL水淋洗固相萃取小柱两次，抽干小柱；洗脱：用1 mL 甲酸-乙腈-水（2:10:88，v:v:v）溶液洗脱，收集洗脱液，用2 %氨化乙腈1 mL定容至2 mL，涡漩，过滤膜，上机测试。三、标曲配制选同类型空白样品，依次加入适量混合标准中间溶液，按照样品提取和净化的步骤进行操作，配制成上机浓度分别为2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL的标准曲线。四、仪器条件（Thermo Fisher TSQ Endura）液相部分：色谱柱： Hilic (2.1 mm×100 mm,2.7 μm)流动相：A：5 mmol/L乙酸铵溶液（含0.3 %甲酸）  B：乙腈（含0.3 %甲酸）流速：0.3 mL/min   柱温：35℃   进样量：10 μL洗脱程序：梯度洗脱表1表1 梯度洗脱程序时间/minA/%B/%0.010900.510902.590104.090104.110905.01090质谱条件：离子源：HESI           电喷雾电压：3500 V            鞘气压力：40 arb  辅气压力：10 arb         离子传输管：350 ℃           辅气温度：375 ℃表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）名称母离子子离子链霉素582.2246.2，263.2*双氢链霉素584.2246.0，263.0*五、实验结果5.1测试数据表3 加标回收率结果化合物5.00 μg/kg10.0 μg/kg20.0 μg/kg回收率%RSD%（n=3）回收率%RSD%（n=3）回收率%RSD%（n=3）链霉素81.66.1286.15.2593.84.41双氢链霉素83.55.9490.85.111013.895.2测试色谱图        图1蜂蜜加标样品总离子流图（20.0 μg/kg）订购信息货号描述包装COHLB360Copure® HLB，60 mg/3mL 50支/盒   SDC-3000-Dbiocomma®多管涡旋混匀仪1台/箱SF130-22-NL尼龙针式过滤器，直径13 mm，孔径0.22 μm，有机系100个/盒BN24智能水浴氮吹仪1台/箱SC2-12 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425100个/盒V2-AL2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425100个/盒