食品中赭曲霉毒素 A检测方案(旋涡混合器)

真菌毒素 食品中赭曲霉毒素A含量检测的免疫亲和柱法 (Copure赭曲霉毒素A免疫亲和柱) 本方法适用于食品中赭曲霉毒素A含量的检测 一、样品提取 1、大米 称取粉碎后的大米5.00g(精确到0.01 g) 食品到50 mL离心管，加25mL 70%甲醇水溶液，振荡30 min， 4000 r/min下离心5 min， 取上清液5 mL于15 mL离心管中，加10 mL磷酸缓冲液，混匀待净化。 2、食用油 称取5.00 g(精确到0.01g)食用油到50 mL离心管，加1 g NaCl， 20 mL 70%甲醇水溶液，振荡30 min， 4000 r/min下离心5 min，取上清液1mL，加入4mL水，混匀待净化。 3、酱油 称取5.00 g(精确到0.01g) 酱油到50mL离心管，加70%甲醇水定容至20mL，超声5 min， 振荡10 min， 取上清液1mL， 加入4mL水，混匀待净化。 4、葡萄干 称取搅碎5.00g(精确到0.01 g) 葡萄干到50 mL离心管，加提取液(称取150.0g氯化钠、20.0g碳酸氢钠溶于约950mL水中，加水定容至1L)20 mL， 超声5 min， 振荡5 min，4000 r/min离心5 min， 取上清液1mL到4mL磷酸缓冲溶液，混匀待净化。 5、白酒 取白酒5.00g(精确到0.01 g) 到50mL离心管，加碳酸氢钠内液(10 g/L)定容至20 mL， 振荡15 min， 取上清液1mL至4mL磷酸缓冲溶液，混匀待净化。 磷酸缓冲冲液：称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾溶解于约990 mL水中，用浓盐酸调节 pH=7.0，用水稀释至1L。 二、免疫亲和柱净化(Copure°赭曲霉毒素A免疫亲和柱，3mL) 上样：取待净化样品2mL过柱，弃掉流出的液体。 淋洗和洗脱：加入20mL水淋洗柱子，分两次淋洗，弃掉流 出的液体，抽干小柱；加入2mL甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速约为2-3秒/滴。 重新溶解：40℃下氮吹至近干，加1mL初始流动相复溶，0.22Hm滤膜过滤，供 HPLC分析。 三、仪器条件 设备： Waters Alliance 2695 色谱柱： Inertsustain-C18 (4.6 mm×250 mm， 5 Hm) 检测测： Waters 2475 荧光检测器 检测波长：激发波长：333 nm 发射波长：447nm 流动相：A：乙腈 B： 2%乙酸水溶液 洗脱方式：等度洗脱， A： B=49.5： 50.5 流速：1mL/min 进样体积：20 四、实验结果 表125.0 ng/kg 食品中赭曲霉毒素A的添加回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 大米 111.2 109.4 111.6 110.7 1.1 食用油 85.5 85.3 86.4 85.7 0.7 酱油 99.4 100.1 104.1 101.2 2.5 葡萄干 95.0 89.0 92.0 92.0 3.3 白酒 92.2 95.8 89.2 92.4 3.6 图1添加水平为25.0 pg/kg赭曲霉毒素A检测的液相色谱图 订购信息 货号 描述 包装 COAFOCH103 CopureB 赭曲霉毒素A免疫亲和柱，3mL 20支/盒 MF047-45-MCE MCE/中47 mm/0.45 Hm/水系 200片/盒 MF047-45-PTFE PTFE/中47 mm/0.45 Hm/有机系 200片/盒 SC2-5 2mL 蓝色聚丙烯盖，预开口， 9-425 100个/盒 V2-AL 2 mL棕色短螺纹广口样品瓶，带书写处 100个/盒 SPEMF12G 12位固相萃取负压装置，玻璃缸体 1个/盒 一、样品提取 1、大米 称取粉碎后的大米 5.00 g（精确到 0.01 g）食品到 50 mL 离 心管，加 25 mL 70% 甲醇水溶液，振荡 30 min，4000 r/min 下离心 5 min，取上清液 5 mL 于 15 mL 离心管中，加 10 mL 磷酸缓冲液，混匀待净化。 2、食用油 称取 5.00 g（精确到 0.01g）食用油到 50 mL 离心管，加 1 g NaCl，20 mL 70% 甲醇水溶液，振荡 30 min，4000 r/ min 下离心 5 min，取上清液 1 mL，加入 4 mL 水，混匀待 净化。 3、酱油 称取 5.00 g（精确到 0.01 g）酱油到 50 mL 离心管，加 70% 甲醇水定容至 20 mL，超声 5 min，振荡 10 min，取上清液 1  mL，加入 4 mL 水，混匀待净化。 4、葡萄干 称取搅碎 5.00 g（精确到 0.01 g）葡萄干到 50 mL 离心管， 加提取液（称取 150.0 g 氯化钠、20.0 g 碳酸氢钠溶于约 950  mL 水中 , 加水定容至 1 L）20 mL，超声 5 min，振荡 5 min， 4000 r/min 离心 5 min，取上清液 1 mL 到 4 mL 磷酸缓冲溶液， 混匀待净化。 5、白酒 取白酒 5.00 g（精确到 0.01 g）到 50 mL 离心管，加碳酸氢 钠溶液（10 g/L）定容至 20 mL，振荡 15 min，取上清液 1 mL 到 4 mL 磷酸缓冲溶液，混匀待净化。 磷酸缓冲溶液：称取 8.0 g氯化钠、1.2 g磷酸氢钠、0.2 g磷酸二氢钾、0.2  g 氯化钾溶解于约 990 mL 水中 , 用浓盐酸调节 pH=7.0，用水稀释至 1 L。 二、免疫亲和柱净化（Copure® 赭曲霉毒素 A 免疫亲 和柱，3 mL） 上样：取待净化样品 2 mL 过柱，弃掉流出的液体。淋洗和洗脱：加入 20 mL 水淋洗柱子，分两次淋洗，弃掉流 出的液体，抽干小柱；加入 2 mL 甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速 约为 2-3 秒 / 滴。 重新溶解：40℃下氮吹至近干，加 1 mL 初始流动相复溶，0.22  µm 滤膜过滤，供 HPLC 分析。 三、仪器条件设备：Waters Alliance 2695 色谱柱：Inertsustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器：Waters 2475 荧光检测器 检测波长：激发波长 : 333 nm  发射波长 : 447 nm 流动相：A：乙腈   B：2% 乙酸水溶液 洗脱方式：等度洗脱，A：B=49.5：50.5 流速：1 mL/min 进样体积：20 µL 四、实验结果 表 1 25.0 μg/kg 食品中赭曲霉毒素 A 的添加回收结果