豆芽中4 种植物生长素检测方案(旋涡混合器)

食品添加剂/污染物18www.biocomma.cn—固相萃取产品应用手册(6版) indd 1182021/1/2715：05：35 豆芽中4种植物生长素的UPLC/MS/MS测定 (QuEChERS) 《BJS 201703豆芽中植物生长激素的测定》 一、样品提取 准确称取10.0 g经粉碎的豆芽置于50 mL离心管中，加入20mL含1%甲酸乙腈溶液，2500 rpm涡旋混匀5 min； 然后加入QuEChERS 萃取盐包(4g无水硫酸镁和1g无水醋酸钠)，立即手动振摇30 s， 涡旋2 min； 再以5000 r/min 离心5 min，使乙腈和水分层，上层乙腈层待净化。 二、样品净化 精密量取上层乙腈层5 mL 置于 QuEChERS 15 mL净化管(300mg 无水硫酸镁、100 mg C18)中，2500 rpm 涡旋混匀2 min，以5000 r/min 离心5 min， 移取上层清液4mL于另一 15 mL离心管中，45℃水浴氮吹至干，用甲醇定容至1mL， 过0.22Hm尼龙滤膜供上机测试。 三、标曲配制 称取空白豆芽样品10.0g按照上述一、二步骤操作，作为空白基质提取液； 分别精密量取一定量的混合标准液加入到空白基质提取液中，用甲醇定容至1mL，配制成适当浓度的基质混合标准工作溶液。 四、仪器条件 色谱条件 仪器： UPLC-MS/MS (Thermo Fisher TQS Endura) 色谱柱： CommaSil@ ODS (2.1 mm×50 mm， 1.8 Hm) 流动相： A： 5mmol/L乙酸铵 B：甲醇(0.1%甲酸) 洗脱方式：梯度洗脱，见表1 表1梯度洗脱程序 时间/min A/% B/% 0 95 5 2.0 70 30 3.5 10 90 4.0 10 90 4.1 95 5 5.0 95 5 流速：0.3 mL/min 柱温：35℃ 进样量：5儿 质谱条件 离子源：HESI 电喷雾电压：3500V 鞘气压力：35 arb 辅气压力：3 arb 离子传输管：380℃ 辅气温度：420℃ 表2组分名称、保留时间及特征离子一览表(*为定量离子) 名称 保留时间/min 母离子 子离子 赤霉素 3.22 344.9 133.0*，106.0 6-苄基腺嘌呤 3.97 224.2 142.5*，238.9 4-氯苯氧乙酸 3.45 184.8 161.0*，125.1 2，4-二氯苯氧乙酸 3.86 218.9 126.7*，110.7 五、实验结果 表3豆芽中4种植物生长激素加标回收结果(25.0pg/kg) 目标物 回收率(%) 平均回收 RSD 1 2 3 4 率(%) (%) 赤霉素 96.96 88.74 96.19 91.44 93.3 4.2 6-苄基腺票呤 83.47 86.42 90.84 83.81 86.1 3.9 4-氯苯氧乙酸 93.66 87.35 89.32 86.91 89.3 3.4 2，4-二氯苯氧乙酸 78.48 77.82 78.50 75.41 77.6 1.9 豆芽中植物生长激素检测色谱图如下： Tmeiming 从上至下出峰顺序依次为：4-氯苯氧乙酸、2，4-二氯苯氧乙酸、6-苄基腺嘌呤、赤霉素。 注意事项： 1. 该实验采用 UPLC/MS/MS 检测，对部分目标物有基质抑制效应，如6-苄基腺嘌呤，建议配制基质混合标准工作液进行定量，校正回收率。 2.在标准《BJS 201703》中，只取4mL提取液进行净化，离心后取全部净化液氮吹复溶，但在实际操作中，离心后实际氮吹复溶的净化液体积不到4mL，会造成检测结果偏低，建议取5mL提取液净化，再精密量取4mL净化液氮吹复溶。 货号 描述 包装 COQ050025H 4g硫酸镁、1g无水醋酸钠，50mL离心管 50支/盒 COQ015014H 300 mg硫酸镁、100 mg C18， 15 mL离心管 50支/盒 CS2150180DS CommaSil@ ODS 色谱柱，2.1mm×50 mm， 1.8 Hm 1根/盒 BC-1000 biocomma@ 多管涡旋混匀仪 1台/箱 SF130-22-NL 尼龙/中13 mm/0.22 pm/有机系 100个/盒 MF047-22-MCE MCE/中47 mm/0.45pm/水系 200片/盒 MF047-22-NL NL滤膜， 直径47 mm， 孔径0.22Hm，水系 200片/盒 SC2-5 2 mL蓝色聚丙烯盖，预开口，9-425 100个/盒 V2-AL 2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm， 9-425 100个/盒 一、样品提取 准确称取 10.0 g 经粉碎的豆芽置于 50 mL 离心管中，加入 20  mL 含 1% 甲酸乙腈溶液，2500 rpm 涡旋混匀 5 min；然后加入 QuEChERS 萃取盐包（4 g 无水硫酸镁和 1 g 无水醋酸钠），立 即手动振摇 30 s，涡旋 2 min；再以 5000 r/min 离心 5 min， 使乙腈和水分层，上层乙腈层待净化。 二、样品净化 精密量取上层乙腈层 5 mL 置于 QuEChERS 15 mL 净化管（300  mg 无水硫酸镁、100 mg C18）中，2500 rpm 涡旋混匀 2 min， 以 5000 r/min 离心 5 min，移取上层清液 4 mL 于另一 15 mL 离心管中，45℃水浴氮吹至干，用甲醇定容至 1 mL，过 0.22  µm 尼龙滤膜供上机测试。 三、标曲配制 称取空白豆芽样品 10.0 g 按照上述一、二步骤操作，作为空 白基质提取液； 分别精密量取一定量的混合标准液加入到空白基质提取液中， 用甲醇定容至1 mL，配制成适当浓度的基质混合标准工作溶液。 四、仪器条件 色谱条件 仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura） 色谱柱：CommaSil® ODS (2.1 mm×50 mm, 1.8 µm) 流动相：A：5 mmol/L 乙酸铵   B：甲醇（0.1% 甲酸） 洗脱方式：梯度洗脱，见表 1 表 1 梯度洗脱程序注意事项： 该实验采用 UPLC/MS/MS 检测，对部分目标物有基质抑制效应， 如 6- 苄基腺嘌呤，建议配制基质混合标准工作液进行定量，校正 回收率。 在标准《BJS 201703》中，只取 4 mL 提取液进行净化，离心后 取全部净化液氮吹复溶，但在实际操作中，离心后实际氮吹复溶 的净化液体积不到 4 mL，会造成检测结果偏低，建议取 5 mL 提取 液净化，再精密量取 4 mL 净化液氮吹复溶。