食品中合成着色剂检测方案(旋涡混合器)

食品添加剂/污染物 食品中合成着色剂的测(Copure专用柱) 本法适用于饮料、果冻、冰淇淋、肉松、面包及卤肉等基质的着色剂检测。 一、样品提取 损取液配制： 1)乙醇-乙腈溶液：取100mL 乙醇和50mL乙腈， 混匀； 2)取上述配制的乙醇-乙腈溶液140 mL，然后加入60 mL水和2mL氨水，混匀即可。 果冻：准确称取1.0g样品，加入10mL水，超声提取15min， 5000 r/min 离心5 min， 将上清液转移另一至50mL离心管中，残渣再加入10mL水，重复提取一次，合并两次上清液，混匀待净化。 肉松：准确确取1.0g样品，加入10mL提取液，涡旋10min， 5000 r/min 离心5 min， 将上清液转移至另一50mL离心管中，残渣再加入10 mL 提取液按上述步骤重复提取一次，合并两次上清液，加5mL石油醚，涡旋2 min， 5000 r/min离心5 min， 移除上层石油醚，剩余溶液于40℃氮吹浓缩至约15mL， 加入250用甲酸混匀待净化。 卤肉：准确称取样品1.0 g， 加入10 mL提取液，涡旋10min， 5000 r/min 离心5 min， 转移上清液；残渣再加入10 mL提取液按上述步骤重复提取一次，合并两次上清液；然后加5mL石油醚，涡旋2 min， 5000 r/min 离心5 min， 移除上层石油醚，，下层溶液夜40℃氮吹至约15 mL， 加入250甲酸混匀待净化。 饮料：确称角10.0g样品， 5000 r/min 离心5 min， 上清液待净化，如果没有明显残渣，可不用离心。 冰淇淋：准确称取经均质的样品1.0 g， 加入10 mL提取液，涡旋10 min， 5000 r/min 离心5 min， 将上清液转移至另一50 mL离心管中，残渣再加入10 mL提取液，按上述步骤重复提取一次，合并两次上清液，于40℃氮吹至约15mL， 加入250儿L甲酸混匀待净化。 面包：准确称取样品1.0 g， 加入10 mL提取液，涡旋10min， 5000 r/min 离心5 min， 转移上清液；残渣再加入10mL提取液按上述步骤重复提取一次，合并两次上清液；然后加5mL石油醚， 涡旋2 min， 5000 r/min 离心5 min， 移除上层石油醚，，下层溶液于40℃氮吹至约15 mL， 加入250甲酸混匀待净化。 二、样品净化 (Copure@CPC 着色剂专用柱， 500mg/6mL) 活化：小柱依次用5mL甲醇活化， 5mL水平衡。 上样和洗脱：将上述待净化液过柱，弃去流出液；然后依次加入5mL 0.1%甲酸水溶液，5 mL水淋洗、小柱，弃去流出液；抽干小柱，再加入8 mL 15%氨水甲醇溶液进行洗脱，收集洗脱液。 重新溶解：将上述洗脱液于45℃氮吹至约1mL，加水定容至2mL， 涡旋混匀，过0.45 Hm PTFE 滤膜供上机测定。 注：建议使用PTFE 亲水材质滤膜过滤，避免其他材质滤膜对色素有吸附造成回收率偏低现象。 三、仪器条件 仪器： Waters Alliance 2695 色谱柱：CommaSil@ ODS(4.6 mm×250 mm， 5 Hm) 检测器： Waters 2996 DAD 检测器 流动相：A：甲醇 B： 0.02 mol/L乙酸铵缓冲液 洗脱方式：梯度洗脱，洗脱程序见表1 流速：1.0 mL/min 检测波长：400 nm-800 nm， 取最大值图 进样体积：10儿 表1梯度洗脱程序 时间/min A% B% 0 5 95 4.0 35 65 12.0 70 30 17.0 100 0 20.0 5 95 25.0 5 95 四、实验结果 4.1饮料中6种着色剂加标回收实验结果(0.4 mg/kg) 目标物 回收率(%) 平均回收率 RSD 1 2 3 4 (%) 柠檬黄 103.2 108.7 105.1 106.2 105.8 2.2 苋菜红 97.3 104.0 100.2 108.3 102.4 4.7 胭脂红 90.1 104.0 98.7 104.3 99.3 6.7 日落黄 91.3 102.5 106.2 109.3 102.3 7.7 诱惑红 90.3 100.3 102.5 108.5 100.4 7.5 亮蓝 94.0 98.4 103.7 96.1 98.0 4.3 4.2果冻中6种着色剂加标回收实验结果(4.0mg/kg) 目标物 回收率(%) 平均回收 RSD 1 2 3 4 率(%) 柠檬黄 102.3 97.5 103.0 95.5 99.6 3.7 苋菜红 89.0 73.2 87.1 93.5 85.7 10.2 胭脂红 99.0 98.2 103.6 93.0 98.4 4.4 日落黄 110.4 105.9 110.4 96.9 105.9 6.0 订购信息 诱惑红 101.1 93.1 103.1 94.3 97.9 5.1 亮蓝 102.3 102.5 101.5 92.0 99.6 5.1 4.3冰淇淋中6种着色剂加标回收实验结果(4.0mg/kg) 目标物 回收率(%) 平均回收率 RSD 1 2 3 4 (%) 柠檬黄 99.2 98.0 93.8 89.8 95.2 4.5 苋菜红 96.1 93.9 91.7 85.4 91.7 5.0 胭脂红 98.2 101.7 95.7 88.1 95.9 6.0 日落黄 100.0 101.8 97.1 91.2 97.5 4.7 诱惑红 101.1 93.1 103.1 94.3 97.9 5.1 亮蓝 100.6 102.2 97.7 100.5 100.2 1.9 4.4面包中6种着色剂加标回收实验结果(4.0 mg/kg) 回收率(%) 平均回收率 RSD 目标物 1 2 3 4 (%) 柠檬黄 93.9 88.9 92.4 92.6 91.9 2.4 苋菜红 88.8 86.5 83.7 102.6 90.4 9.3 胭脂红 91.8 88.8 86.5 98.4 91.4 5.6 日落黄 98.4 81.3 94.1 95.8 92.4 8.3 诱惑红 85.3 89.2 84.6 100.1 89.8 8.0 亮蓝 91.0 81.0 94.8 96.6 90.8 7.7 4.5肉松中6种着色剂加标回收实验结果(4.0 mg/kg) 目标物 回收率(%) 平均回收 率(%) RSD 1 2 3 4 柠檬黄 98.0 105.3 108.0 108.8 105.0 4.7 苋菜红 88.2 95.6 106.2 97.8 97.0 7.6 胭脂红 97.1 104.1 110.2 106.0 104.3 5.2 日落黄 94.2 102.2 101.8 108.8 101.8 5.9 诱惑红 109.6 109.9 107.3 104.8 107.9 2.2 亮蓝 91.0 97.1 101.6 103.3 98.2 5.6 4.6卤肉中5种着色剂加标回收实验结果(4.0mg/kg) 目标物 1 回收率(%) 2 3 率(%) RSD 柠檬黄 96.2 88.9 93.2 92.8 3.9 苋菜红 87.5 81.4 76.1 81.7 7.0 胭脂红 84.0 91.2 75.9 83.7 9.2 日落黄 93.0 93.6 104.3 96.9 6.6 亮蓝 96.3 95.4 81.7 88.5 9.2 2.00 4.006.008.00010.0012.0014.0016.0018.00 20.0022.00 24.00 分 图1添加水平为2.0 mg/L的6种合成着色剂标准色谱图 从左至右出峰顺序依次为：柠檬黄(6.791)，苋菜红(7.248)，胭脂红(8.567)，日落黄(10.021)，诱惑红(11.499)， 亮蓝(13.310) 货号 描述 包装 COCPC6500 Copure@合成着色剂专用柱， 500 mg/6 mL 30支/盒 CS46250DS CommaSil@ ODS 色谱柱，4.6 mm×250 mm， 5 Hm 1根/盒 BC-1000 biocomma@ 多管涡旋混匀仪 1台/箱 SF130-45-PTFE-HL 聚四氟乙烯针式过滤器， 中13 mm/0.45 pm/水系100个/盒 100个/盒 MF047-22-MCE MCE/巾47 mm/0.45 pm/水系 200片/盒 MF047-22-NL NL滤膜， 直径47 mm， 孔径0.22 Hm， 有机系 200片/盒 SC2-5 2mL蓝色聚丙烯盖，预开口，9-425 100个/盒 V2-TL 2mL螺纹透明样品瓶，带书写处11.6*32 mm， 9-425 100个/盒 二、样品净化（Copure® CPC 着色剂专用柱，500 mg/6 mL） 活化：小柱依次用 5 mL 甲醇活化，5 mL 水平衡。 上样和洗脱：将上述待净化液过柱，弃去流出液；然后依次 加入 5 mL 0.1% 甲酸水溶液，5 mL 水淋洗、小柱，弃去流出液； 抽干小柱，再加入 8 mL 15% 氨水甲醇溶液进行洗脱，收集洗 脱液。 重新溶解：将上述洗脱液于 45℃氮吹至约 1 mL，加水定容至 2 mL，涡旋混匀，过 0.45 µm PTFE 滤膜供上机测定。 注：建议使用 PTFE 亲水材质滤膜过滤，避免其他材质滤膜 对色素有吸附造成回收率偏低现象。 三、仪器条件仪器：Waters Alliance 2695 色谱柱：CommaSil® ODS(4.6 mm×250 mm，5 µm) 检测器：Waters 2996 DAD 检测器 流动相：A: 甲醇   B: 0.02 mol/L 乙酸铵缓冲液 洗脱方式：梯度洗脱，洗脱程序见表 1 流速：1.0 mL/min 检测波长：400 nm-800 nm，取最大值图 进样体积：10 µL 表 1 梯度洗脱程序订购信息：