猪肉中受体激动剂检测方案(样品前处理)

兽残篇65www.biocomma.cn (固相萃取产品应用手册(6版) indd 652021/1/2715：04：58 猪肉中β-受体激动剂检测的固相萃取方法 (Copure@ MCX) 《GB/T 21313-2007动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法》 一、样品提取 称取均质猪肉试样10.00g试样(精确至0.01 g)，加入15mL pH=5.2的乙酸-乙酸铵缓冲溶液，1000 r/min 匀浆1min， 再加入β-葡萄糖醛酸苷肽酶/芳香磺酸酯酶溶液100L，于37℃±1℃振荡酶解过夜。取出冷却后，10℃ 9500r/min 离心10 min。取全部上清液。待净化。 二、SPE柱净化 (Copure@ MCX， 200mg/6mL) 活化：加入6mL甲醇、6mL水、6 mL 0.1 mmol/L高氯酸(pH=4.0)溶液活化。 上样和洗脱：当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，过柱，弃去滤液，用2mL甲醇、2mL 2%甲醇水溶液淋洗，最后用7mL 5%氨化甲醇洗脱。 重新溶解：洗脱液缓慢氮气流条件下吹至近干，用甲醇-0.1%甲酸水溶液溶解定容至1.0mL， 涡旋混匀1 min， 用于LC-MS/MS 测定。 三、仪器条件 质谱仪： API 4000 色谱柱： Venusil ASB C18 (2.1 mm×150 mm， 5 Hm) 流动相： A： 0.1%甲酸水溶液 B：甲醇 洗脱方式：梯度洗脱，见表1 表1流动相梯度洗脱程序 时间/min A(%) B(%) 95.0 5.0 4.0 50.0 50.0 6.0 90.0 10.0 8.0 5.0 95.0 8.1 95.0 5.0 12.0 95.0 5.0 流速 ： 0 . 2 m L / mi n 柱温：40℃ 进样体积：2儿 离子源：电喷雾 (ESI) 扫描模式：正离子 检测方式：多反应监测(MRM) 表2质谱仪离子源参数 Source/Gas Collision Gas(CAD) 10 Curtain Gas (CUR) 30 Ion Source Gas 1(GS 1) 50 Ion Source Gas 2(GS 2) 50 Ion Spray Voltage(IS) 5500 Temperature(TEM) 550 Interface Heater(ihe) On 订购信息 货号 描述 包装 COMCX6200 CopureB MCX 固相萃取柱， 200 mg/6 mL 30支/盒 SF130-22-NL 尼龙/中13 mm/0.22 Hm/有机系 100个/盒 MF047-45-MCE MCE/中47 mm/0.45 Hm/水系 200片/盒 MF047-45-PTFE PTFE/中47 mm/0.45 Hm/有机系 200片/盒 V2-AL 2mL棕色短螺纹广口样品瓶，带书写处 100个/盒 SC2-1 2 mL 蓝色聚丙烯盖，预开口，9-425 100个/盒 SPEMF12G 12位固相萃取负压装置，玻璃缸体 1个/盒 表3 B-受体激动剂的母离子和子离子参数表 物质名称 保留时间(min) 检测离子对 DP EP CE CXP 特布他林 3.77 226.0/151.7 60 10 16 12 226.0/169.8 60 10 12 12 克伦特罗 5.82 277.1/202.9 60 10 23 12 277.1/259.0 60 10 15 12 莱克多巴胺 5.45 302.1/163.7 60 10 23 12 302.1/284.2 60 10 19 12 沙丁胺醇 3.86 240.1/147.8 60 10 18 12 240.1/221.9 60 10 12 12 妥布特罗 6.17 227.9/153.8 60 10 16 12 227.9/171.8 60 10 12 12 四、实验结果 表4添加水平为0.5 Hg/kg 猪肉中B-受体激动剂的回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 沙丁胺醇 88.6 82.8 81.4 84.3 4.5 克伦特罗 85.3 88.3 86.7 86.7 1.7 莱克多巴按 86.6 88.3 81.4 85.4 4.2 特布他林 82.0 80.9 87.3 83.4 4.0 妥布特罗 82.6 82.6 88.1 84.4 3.8 Ma 1204qp 1特布他林 2沙丁胺醇 图3克伦特罗 (clenbutecol) (277.1/202.9)色谱图图4莱克多巴胺 (ractopamine) (302.1/163.7)色谱图 一、样品提取 称取均质猪肉试样 10.00 ｇ试样 ( 精确至 0.01 g)，加入 15 mL pH=5.2 的乙酸 - 乙酸铵缓冲溶液，1000 r/min 匀浆 1 min，再加入 β- 葡萄糖醛酸苷肽酶 / 芳香磺酸酯酶溶液 100µL，于 37℃ ±1℃振荡酶解过夜。取出冷却后，10℃ 9500 r/min 离心 10 min。取全部上清液。待净化。二、SPE 柱净化（Copure® MCX，200 mg/6 mL）活化：加入 6 mL 甲醇、6 mL 水、6 mL 0.1 mmol/L 高氯酸 (pH=4.0) 溶液活化。 上样和洗脱：当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上 述待净化溶液，过柱，弃去滤液，用 2 mL 甲醇、2 mL 2% 甲醇水溶液淋洗，最后用 7 mL 5% 氨化甲醇洗脱。 重新溶解：洗脱液缓慢氮气流条件下吹至近干，用甲醇 -0.1% 甲酸水溶液溶解定容至 1.0 mL，涡旋混匀 1 min，用于 LC-MS/ MS 测定。 三、仪器条件 质谱仪：API 4000 色谱柱：Venusil ASB C18 (2.1 mm×150 mm, 5 µm) 流动相：A：0.1% 甲酸水溶液 B：甲醇 洗脱方式：梯度洗脱，见表 1 表 1 流动相梯度洗脱程序