血液中DNA检测方案(PCR)

地址：广州国际生物岛螺旋三路8号第八层802单元：网址： www.forevergen.cn ddPCR技术 快速定量检测念珠菌 中背景介绍 念珠菌是引起院内血源性感染第4位最常见病原体，而重症患者由于病情危重，需要进行多种有有监测，加上器官功能不全等导致免疫功能受损，成为念珠菌感染的高危人群。侵袭性念珠菌感染起病隐匿、临床表现不典型，临床诊断较为困难，尤其对于重症患者，需结合临床表现与实验室检查进行诊断。此外，研究发现侵袭性真菌感染的死亡率与抗真菌治疗时机有重大关系，48h后对病人进行抗真菌治疗的死亡率比12h内采取抗真菌治疗高25%。因此建立快速检测真菌的方法，早期获得检测结果可指导临床及时采取适当治疗方案。 目前临床上常规的真菌感染检测方法主要有： (1)直接镜检，主要用于明确真菌感染是否存在，但不能进行菌种鉴定。 (2)真菌培养，可以提高真菌检出率，但培养时间较长，且灵敏度欠佳，不利于及时诊断与治疗。(3)分子生物学技术，主要通过荧光定量PCR技术检测真菌的特异性DNA序列，是一种快速敏感的检测方法，但对于感染早期或微量样本的检测仍存在局限性。ddPCR (数字PCR)技术是一种新的不依赖于标准曲线能够对目标序列进行绝对定量的技术，相比qPCR技术具有更高的检测灵敏度和准确性。 因此我们开发的ddPCR方法，专门针对重症监护室常见的致病念珠菌属：白色念珠菌 (Candidaalbicans)、近平滑念珠菌 (Candida parapsilosis)、热带念珠菌 (Candida tropicalis)、光滑念珠菌(Can-dida glabrata) ，最快可于6小时出结果，结合临床表现，有力的帮助了在侵袭性念珠菌感染方面的治疗过程。 1，生成微滴 2，扩增微滴 3，检测微滴 4，数据分析 样本制备仪 PCR扩曾仪 生物芯片分析仪 分析软件 广州永诺生物科技有限公司 ]广州永诺医学检验所有限公司电话：020-84298069 电话：020-84298069 地址：广州国际生物岛螺旋三路6号第四层 永诺生物 中临床样品验证 阳性痰液样品检测 病人名 ddPCR检测结果 细菌培养结果 P1 白色念珠菌 白念珠菌 P2 白色念珠菌+光滑念珠菌 白念珠菌+光滑念珠菌 P3 白色念珠菌 白念珠菌 P4 近平滑念珠菌 非白念菌 P5 近平滑念珠菌 非白念菌 P6 白色念珠菌 白念珠菌 P7 白色念珠菌 白念珠菌 P8 近平滑念珠菌 非白念菌 P9 白色念珠菌 白念珠菌 P10 光滑念珠菌+热带念珠菌 热带念珠菌 结论：9例样品ddPCR检测结果和细菌培养结果完全一致，1例样品细菌培养漏检光滑念珠菌。 阳性肺泡灌洗液样品检测 病人名 ddPCR检测结果 细菌培养结果 P1 白念珠菌 白念珠菌 P2 热带念珠菌 热带念珠菌 P3 白念珠菌 白念珠菌 P4 白念珠菌+热带念珠菌 白念珠菌+热带念珠菌 P5 热带念珠菌 热带念珠菌 P6 白念珠菌 白念珠菌 P7 白念珠菌 白念珠菌 P8 近平滑念珠菌+白念珠菌 白念珠菌 P9 白念珠菌 白念珠菌 P10 热带念珠菌+白念珠菌 白念珠菌 结论：9例样品ddPCR检测结果和细菌培养结果完全一致，2例样品细菌培养漏检近平滑念珠菌和热带念珠菌。 中总结 我们探索出一种ddPCR检测方法，可以同时检测4种念珠菌类型，并且在临床样品进行了初步验证。在阳性样品中我们方法的灵敏度和特异性达到100%，并且能检测出细菌培养中漏检的念珠菌类型，证明了我们方法的高度灵敏。此方法最快可于6小时出检测结果，结合临床表现可以有力的帮助了在侵袭性念珠菌感染方面的治疗过程。