药物中定性定量检测方案(液相色谱仪)

thermoscientific 使用基于质量源于设计(QbD)原则的LC方法开发软件提高化药分析方法开发效率 熊亮张艳海秦旭阳金燕赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词： 摘要 本应用采用质量源于设计 (QbD) 原则在常规色谱柱上开发一套分析方法。其中包括在不同色谱条件(涉及流动相、流速、柱温等多重组合)下对不同色谱柱进行固定相筛选。结果清晰的表明使用Fusion QbD软件，搭配Thermo UltiMate3000 高效液相色谱系统和变色龙色谱数据软件能够快速有效的筛选出合适化药杂质分析方法的色谱柱及液相色谱条件。 前言 在药物开发过程中有各种具有特定分析需求且复杂程度不同的样品，整个制药企业进行的方法开发相关工作可能既花钱又耗时。简化方法开发过程能使产品更快上市，并更具有成本效益。现现今，满足ICH Q8 (R2)禾ICH Q2(R2)指导原则的基于QbD的方法开发是制药行业分析研发领域的热点。QbD原则中建立了关键方法属性，并利用多变量统计分析和建模方法对关键方法参数之间的相互作用对这些关键方法属性产生的影响进行了表征。满足QbD原则液相色谱方法的开发目标为建立稳定设计空间，实验设计、实验自动化和多变量分析可用于构建上述稳定设计空间，从而减少现场方法错误与超标研究结果。这一原则有助于在方法开发过程中确保方法稳定性。 实验方法 1、仪器 包括下列模块和组件的Thermo UltiMate3000 高效液相色谱系统(U3000)： ·配有在线脱气单元(P/N：5035.9200)的LPG-3400SD四元泵(P/N： 5040.0031) ·WPS-3000SL自动进样器(P/N：5822.0010) ·带两个6位7通阀(P/N： PD715-105)的TCC-3000SD柱温箱(P/N：5730.0010) ·VWD-3100紫外检测器(P/N： 5074.0005) 2、软件 变色龙色谱数据软件(版本：7.2.8) Fusion QbD 自动化液相色谱方法开发软件(版本：9.8.1.135)3、试剂 所有溶剂均为HPLC级，其他样品来自于供应商。 4、样品前处理 取布地奈德样品适量，用纯乙腈溶解后稀释至所需浓度。 Fusion QbD是基于质量源于设计(QbD)原理的LC方法开发软件。Fusion QbD与控制U3000高效液相系统的Chromeleon CDS联用，利用来自Chromeleon CDS的色谱分析结果， Fusion QbD可管理复杂的统计信息并自动进行方法筛选和优化(图2所示) 图2方法开发工作流程 方法开发工作流程为Fusion QbD自动创建实验，设计实验范围，并选择最有效的统计学实验设计，然后软件将实验设计导出至Chromeleon CDS， 自动创建仪器方法开展实验。(图3、 图4所示) 使用U3000系统运行并处理所得的色谱数据，并将结果导回至Fusion QbD软件， Fusion QbD软件统计分析并模拟定量设计空间种的方法性能响应。以报告和图表的形式迅速诠释数据，从而便于方法结果和变量间相互作用的直观显示。该软件无需进行额外的实验即可定量评估方法的耐用型，并识别出在平均性能和方法耐用性上均最优的方法。 图3Fusion软件中选择预研究的变量 图4Fusion软件生成实验设计再导入变色龙软件执行序列 图55变色龙软件中的序列 实验结果和讨论 为示范本方法开发工作流程，采用了纯度不高的布地奈德原料药配制的溶液，并利用Fusion QbD软件进行HPLC方法开发。同时在多个变量的条件(表1)下进行快速筛选实验。 溶剂 柱温 ·30℃ ·35℃ ·40℃ 60%~70%(v/v)内变化 表1变量筛选条件 Fusion QbD软件产生170次进样的实验设计在变色龙软件执行完序列后(图5)，再将结果导入Fusion QbD软件并予以分析。对结果设定如下筛选条件： •峰总数以及峰总数大于10 •分离度大于1.0的峰个数 ·拖尾因子小于1.5的峰个数 利用Fusion QbD软件中的叠加图即可轻易直观的呈现五个色谱柱的结果，叠加图中不同的色块代表上述的筛选条件，色块覆盖区域则代表无法满足上述筛选条件的色谱方法(图6)。叠加图非阴影区内清楚地呈现出满足我们平均性能目标和耐用性标准的条件，并将该区域定义为设计空间。设计空间越大的叠加图则表明变量对色谱柱性能的影响越小。因此可确定AcclaimC18色谱柱具有最佳性能。(图7) 图6色谱柱筛选条件叠加图 图77Acclaim C18筛选条件叠加图 查看Acclaim C18的多反应曲面图和多反应效应图等(图8)观察变量之间的多种相互作用，最后Fusion QbD软件可给出最佳的预测结果和色谱图(表2、图9)。 图8Acclaim C18多反应曲面图和多反应效应图 Study Variable Name Prediction Point Level Setting Strong Solvent Type MeOH Strong Solvent Amount 70.0 Oven Temperature 40.0 Column Type Acclaim RSLC 120 C18 表2最佳色谱条件 图9最佳色谱条件下的色谱图 结论 本文使用基于质量源于设计(QbD)原则的LC方法开发软件Fusion QbD， 搭配Thermo UltiMate3000 高效液相色谱系统和CDS变色龙色谱数据软件进行布地奈德杂质分析方法的开发。整个方法开发过程只需要三天，大大提高了方法开发的效率。 o 热线话 ww.thermofisher.com仅用于研究目的。不可用于诊断目的。◎ Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有权利。所有商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc.及其子公司的资产，除非另有指明。 本文使用基于质量源于设计（QbD）原则的LC方法开发软件 Fusion QbD，搭配Thermo UltiMate3000 高效液相色谱系统和 CDS变色龙色谱数据软件进行布地奈德杂质分析方法的开发。 整个方法开发过程只需要三天，大大提高了方法开发的效率。