功能性饮料中维生素B12检测方案(其它色谱仪及分离设备)

功能性饮料中维生素B12的测定GB/T 5009.217-2008 适用范围 适用于片剂、胶囊、粉剂、功能性饮料类型保健食品中维生素B12的测定（该实验选用基质为功能性饮料）。 参考标准：《GB/T 5009.217-2008 保健食品中维生素B12的测定》 溶液的配置 乙腈溶液（5%）：取乙腈5mL，与95mL水混合。 乙腈溶液（25%）：取乙腈25mL，与75mL水混合。 标准储备液：称取维生素B12 5mg，用5%乙醇水溶液溶解并定容至10mL，溶度为500 μg/mL。 标准工作液：吸取2mL标准储备液，用水溶解并定容至10mL，溶度为100 μg/mL。 提取步骤 称取试样2g（精确至0.01g），于50mL具塞离心管中，加入10mL水，加入0.5mL乙腈，涡旋混匀，待净化。 净化 SPE小柱：Welchrom® BRP，规格：60mg/3mL。 活化：5mL甲醇，5mL水，弃去； 上样：全部上样，弃去； 淋洗：5mL 5%乙腈水； 洗脱：0.5mL 25%乙腈水； 洗脱液加水至1mL，待测。 5、注意事项 1）加标水平：2g样中加入40μL 100μg/mL标准工作液，复溶1mL上机，因此加标水平为2mg/kg，最终机度数为 4mg/L。 2）洗脱液必须加水至1mL，如用0.5mL 25%乙腈水体系上机会导致目标峰分叉。 6、色谱条件 色谱柱：月旭Xtimate® C18，4.6×250mm,5μm。 流动相A：精密称取磷酸氢二钾0.87g，磷酸二氢钾0.41g，用水溶解后加乙腈125mL用水稀释至1000mL。 流动相B：水-乙腈-磷酸=499:499:2。 时间 流动相A 流动相B 0 100 0 13 100 0 18 0 100 23 100 0 25 100 0 流速：1.2mL/min； 柱温：30℃； 进样量：20μL； 波长：361nm。 7、色谱图或者加标回收率结果 图1. 维生素B12标准溶液 4mg/L图谱 表1、出峰情况 峰名称 保留时间 峰面积 峰高 相对峰面积 拖尾因子 塔板数 min mAU*min mAU % EP (USP) 维生素B12 6.266 0.8547 5.32 100 0.92 10002 图2. 样品空白图谱 图3. 样加标2mg/kg图谱 表2、加标回收率表 目标物名称 加标水平mg/kg 平均回收率% RSD %（n=2） 维生素B12 2 97 4.33 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00522-20009 SPE小柱 Welchrom® BRP,60mg/3mL,50pk 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00837-05002 15mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，15mL，50/包 00824-31001 固相萃取装置 Welch 固相萃取装置，12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 00101-21043 液相色谱柱 Xtimate® C18，4.6×250mm,5μm 00826-V049P025 维生素B12标准品 A2S, CAS No.:68-19-9,25mg 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add:上海市松江区明南路85号启迪漕河泾（中山）科技园.紫荆园10号楼 邮编：201600 Add:浙江省金华市婺城区双林南街168号 邮编：321000 Tel:400-810-6969E-mail:lingyuyu@welchmat.com 一、适用范围适用于片剂、胶囊、粉剂、功能性饮料类型保健食品中维生素B12的测定（该实验选用基质为功能性饮料）。参考标准：《GB/T 5009.217-2008 保健食品中维生素B12的测定》 二、提取步骤称取试样2g（J确至0.01g），于50mL具塞离心管中，加入10mL水，加入0.5mL乙腈，涡旋混匀，待净化。 三、净化步骤SPE小柱：Welchrom® BRP，规格：60mg/3mL。活化：5mL甲醇，5mL水，弃去；上样：全部上样，弃去；淋洗：5mL 5%乙腈水；洗脱：0.5mL 25%乙腈水；洗脱液加水至1mL，待测。 四、色谱条件色谱柱：月旭Xtimate® C18，4.6×250mm,5μm。流动相A：精密称取磷酸氢二钾0.87g，磷酸二氢钾0.41g，用水溶解后加乙腈125mL用水稀释至1000mL。流动相B：水-乙腈-磷酸=499:499:2。流速：1.2mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL；波长：361nm。 五、色谱图或者加标回收率结果六、相关产品信息