食品（薯片曲奇咖啡）中丙烯酰胺的残留检测方案(其它色谱仪及分离设备)

月旭“舌尖上的卫士”为您把关食品中丙烯酰胺的残留 Hi，小伙伴们，8天的小长假结束啦，大家的假期是怎么度过的呢？一本书，一杯茶，一个午后，一场邂逅？ （你以为你的假期） 还是做回肥宅本宅？ （实际上你的假期） 哈哈，薯片烧烤，咖啡奶茶是当代精致男孩女孩的假期正确打开方式。不过，宅家一时爽，薯片曲奇咖啡这些食品，在热加工过程中，其中含有的天门冬酰胺（又称天冬酰胺，氨基酸的一种）与葡萄糖、果糖、半乳糖等还原糖可能发生反应，形成丙烯酰胺（AA）。丙烯酰胺是一种含有不饱和双键的酰胺，经过体内代谢可产生环氧丙酰胺 (Glycidamide)，而环氧丙酰胺对体内的血红蛋白和 DNA 等大分子物质有较强的烷基化作用，具有神经毒性、生殖毒性、遗传毒性等。因此，国际癌症研究机构(IARC)于1994年将丙烯酰胺列为2A类“人类可能致癌物质”。 因此，建立高效、简单、快捷的食品中丙烯酰胺分析方法，对于评估丙烯酰胺含量非常重要。 分析概况 《食品安全国家标准 食品中丙烯酰胺的测定》 (GB 5009.204-2014)[1] 中规定的方法包括LC-MS/MS 法和 GC-MS 法。其中 LC-MS/MS 法具有质谱的高灵敏度和离子检测特异性，但样品前处理所用的基质固相分散萃取方法和固相萃取柱净化法均步骤繁多，不易操作；且丙烯酰胺极性较强，很多色谱柱难保留，常规 C18 色谱柱对高比例水相的流动相条件更是耐受不佳。再者，GB/T 5009.204-2014 采用水提取丙烯酰胺，对于含有大量脂肪、蛋白和淀粉的食品，会严重影响丙烯酰胺的提取效率。此外，由于经过高温热加工的淀粉类食品含有较多的杂质，丙烯酰胺提取液还需经过进一步净化以去除杂质。对此，月旭科技开发了一种快速高效的食品中丙烯酰胺的测定方法，助力监管部门评估丙烯酰胺的残留。 提取步骤 称取 1g 样品于 15mL 离心管中，加入 10mL 乙腈，涡旋 2min，离心 1min（4000r/min），转移上清液移至 50mL 离心管中；再往 15mL 离心管中加入 10mL 乙腈，再提取一次；合并两次提取液，加入 20mL正己烷，剧烈震荡 5min；除去上层正己烷后，再加入 20mL 正己烷，剧烈震荡 5min，再除去正己烷；将下层清液转移至烧瓶中，加入 4mL 水，混匀，减压旋蒸至小于 2mL，待净化。 SPE净化步骤 SPE小柱：月旭 Welchrom® C18E；规格：500 mg/6mL。 活 化：5mL甲醇，5mL水。 上 样：待净化液，收集。 洗 脱：2mL 30%甲醇分次润洗烧瓶，再上样，收集，抽干。 合并上样液和洗脱液，并用30%甲醇水定容至5mL，并过0.22 µm滤膜，上HPLC检测。 注意事项：洗脱液由原先的水，改成为 10%，20%，30%，40%，50%甲醇水分别洗脱，发现30%甲醇水的洗脱能力更好。 色谱条件 色 谱 柱：月旭 Ultimate® XB-C18, 4.6×150mm,3μm 流 动 相：甲醇：水 (20:80) 柱 温：35℃ 进 样 量：5μL 检测波长：210nm 流 速：0.5mL/min 丙烯酰胺对照品及加标回收率图谱 图1. 丙烯酰胺对照品 2mg/L色谱图 图2. 咖啡样品加标 10mg/mL色谱图 图3. 咖啡样品色谱图 表1. 加标回收率表 名称 样加标（mg/kg） 回收率（%） Rt（min） RSD（%） 丙烯酰胺 10 84 4.36 3.77 10 84 10 84 10 86 10 83 10 82 10 87 相关产品信息 货号 名称 规格 00559-11006 SPE小柱 Welchrom® C18E，500mg/6ml,30pk 00837-05006 离心管 Welchrom® 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00837-05003 离心管 Welchrom® 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,灭菌，15mL，25/包 00824-31001 固相萃取装置 Welch 固相萃取装置，12位方缸 00802-02201 针头式过滤器 Welchrom® 进口NY,13mm*0.22μm,100pk 00824-11101 一次性注射器 (​http:​/​​/​220.248.103.82:8088​/​qf​/​ManageWarehouse​/​StockRead.aspx?stkno=00824-11101" \t "_blank​) Welchrom® 一次性无菌注射器，独立包装，带针，橡胶头，1mL ，200支 00821-32291 盖子+垫片 Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 Welchrom® 2ml 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 00201-21041 液相分析柱 Ultimate® XB-C18, 3μm, 4.6×150mm 00826-A015P100 丙烯酰胺标准品 A2S, CAS No.:79-06-1,100mg 在新时代快消式网络传播覆盖的今天，绝大多数的我们应该都已经学会了“一停二看三通过”的“让子弹飞一会”的舆情观赏习惯。 听说咖啡“致癌”薯片、烤串都笑了薯片烧烤，咖啡奶茶成为当代精致男孩女孩的-爱。不过，薯片曲奇咖啡这些食品，在热加工过程中，其中含有的天门冬酰胺（又称天冬酰胺，氨基酸的一种）与葡萄糖、果糖、半乳糖等还原糖可能发生反应，形成丙烯酰胺（AA）。丙烯酰胺是一种含有不饱和双键的酰胺，经过体内代谢可产生环氧丙酰胺 (Glycidamide)，而环氧丙酰胺对体内的血红蛋白和DNA等大分子物质有较强的烷基化作用，具有神经毒性、生殖毒性、遗传毒性等。因此，国际癌症研究机构(IARC)于1994年将丙烯酰胺列为2A类“人类可能致癌物质”。因此，建立高效、简单、快捷的食品中丙烯酰胺分析方法，对于评估丙烯酰胺含量非常重要。 分析概况 《食品安全国家标准 食品中丙烯酰胺的测定》 (GB 5009.204-2014)[1]中规定的方法包括LC-MS/MS法和GC-MS 法。其中LC-MS/MS 法具有质谱的高灵敏度和离子检测特异性，但样品前处理所用的基质固相分散萃取方法和固相萃取柱净化法均步骤繁多，不易操作；且丙烯酰胺极性较强，很多色谱柱难保留，常规C18色谱柱对高比例水相的流动相条件更是耐受不佳。再者，GB/T 5009.204-2014采用水提取丙烯酰胺，对于含有大量脂肪、蛋白和淀粉的食品，会严重影响丙烯酰胺的提取效率。此外，由于经过高温热加工的淀粉类食品含有较多的杂质，丙烯酰胺提取液还需经过进一步净化以去除杂质。对此，月旭科技开发了一种快速高效的食品中丙烯酰胺的测定方法，助力监管部门评估丙烯酰胺的残留。 提取步骤 样品基质：咖啡称取1g样品于15mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋2min，离心1min（4000r/min），转移上清液移至50mL 离心管中；再往15mL 离心管中加入10mL乙腈，再提取一次；合并两次提取液，加入20mL正己烷，剧烈震荡5min；除去上层正己烷后，再加入20mL正己烷，剧烈震荡5min，再除去正己烷；将下层清液转移至烧瓶中，加入4mL水，混匀，减压旋蒸至小于2mL，待净化。 SPE净化步骤 SPE小柱：月旭 Welchrom® C18E；规格：500mg/6mL。活化：5mL甲醇，5mL水；上样：待净化液，收集；洗脱：2mL 30%甲醇分次润洗烧瓶，再上样，收集，抽干；合并上样液和洗脱液，并用30%甲醇水定容至5mL，并过0.22µm滤膜，上HPLC检测。注意事项：洗脱液由原先的水，改成为10%，20%，30%，40%，50%甲醇水分别洗脱，发现30%甲醇水的洗脱能力更好。 色谱条件 色谱柱：月旭 Ultimate® XB-C18, 4.6×150mm，3μm。流 动 相：甲醇/水 (20/80)；柱温：35℃；进样量：5μL；检测波长：210nm；流速：0.5mL/min。 丙烯酰胺对照品及加标回收率图谱相关产品信息