注射液中不溶性微粒检测方案(激光粒度仪)

76天津药学 Tianjin Pharmacy 2014年 第26卷卷第5期 启动清洁再验证。而清洗程序的变更，如溶剂变更、清洗剂变更、清洗水量、温度变更等，应必须全面启动清洁再验证工作。 13 总结 药品生产清洁验证是确保药品生产中防止污染与交叉污染的重要措施之一，企业必须针对药品特性、生产设备特点建立明确可控的清洗程序，并依据科学知识对其共线生产的产品组合、设备组合进行充分的评估，确定残留限度标准，研究建立并验证科学的取样及分析方法，充分考虑清洗的最差状态，设计严谨的验证方案并遵照实施，确保验证结果可靠，并充分证实按照预定程序清洗后，设备的洁净程度达到预期要求，药品 ( 生产稳定可控，药品质量安全可靠。 ) ( 参考文献 ) ( 1 国家食品药品监督管理局药品认证管理中心. WHO 药品 GMP 指南[M].第2版.北京：中国医药科技出版社，2008：38-42 ) ( 2 国家食品药品监督管理局药品认证管理中心.欧盟药品GMP 指南-原料药生产质量管理规范[M].北京：中国医药科技出版社，2008： 88-89 ) ( 3 A ndrew Walsh. C l e aning Va l idation for t h e 2 1 st C e ntury： AcceptanceLimits for Active Pharmaceutical I ngredients [ . P h a rmaceutical Eng i - neering ， 2011 ， 31(4)： 1 -9 ) ( 4 国家食品药品监督管理局药品安全监管司/药品认证管理中心.药品生产验验指南[M].北京：中 国 医药科技出版社，2003：135-138 ) 光阻法对注射液不溶性微粒检测的准确性影响因素探讨 陈如柳，曲丹丹，付 斌 (1.天津市医药集团有限公司，天津 300204： 2.天津市天发科技有限公司，天津 300190) 摘 要 本文通过对注射液不溶性微粒检测的常用仪器——光阻法微粒检测仪的原理分析，探讨了该类方法的局限性(介质特性、气泡及取样结构)对检测的影响；并总结了正确使用方法及注意事项。只有正确使用微粒检测仪，才能保证样品检测的准确性。 关键词 光阻法，注射液，准确性，不溶性微粒 中图分类号：R927.11 文献标识码：A 文章编号：1006-5687(2014)05-0076-03 Factors affecting accuracy of light -blockage detection of insoluble particles in injections Chen Ruliu， Qu Dandan， Fu Bin² (1.Tianjin Pharmaceutical Group Co Ltd，Tianjin 300204；2. Tianda Tianfa Tecnology Co Ltd，Tianjin 300190) ABSTRACT In this paper， we have investigated the limitation of the light blockage based particle dectors by analyzing its workingmechanism of insoluble particle test of injection preparations. We explored the effect of solution properties， air bubbles and sam-pling structure on test accuracy，and summarized a correct method and cautions for dection operation. We found that a correct opera- tion is very important for an accurate test result. KEY WORDS light blockage，injection，accuracy，insoluble particle 引言 光阻法微粒检测仪是进行注射液不溶性微粒检测的常用仪器，《中国药典》2000年版附录中开始收录此种方法。其具有的高效率、快捷、准确，迅速代替了原来的显微计数法，用户数量逐年递增。经过十几年的应用，光阻法微粒检测已成为生产注射剂的厂家及检验单位必备的检验仪器，保守估计，目前国内在用微粒检测仪在2000台以上。 光阻法微粒检测是将检测样品中颗粒大小转换成 电脉冲的一种间接测量的方法，具有测试方法简单、检测速度快等优点，但也有一定的局限性。如何才能用好光阻法微粒检测仪，保证测试样品的准确性，本文重点进行探讨。 2 光阻法的原理和局限性 2.1 原理 光法微粒检测仪是光学单粒子计数器的一种，也称遮光式颗粒计数器，其利用光学系统将小功率的半导体激光进行准直聚焦，照射在一微小的探测区中，末端有光敏器件接收光强，当微粒随着透明液体进入探测区，经过光束时，会产生遮光效应，光敏器 效投影面积相同的圆的直径“，见图1. 件接收的光强度发生变化，其变化量正比于微粒的在光轴方向的投影面积，即光阻法检测的颗粒直径为等 图1 光阻法原理图 2.2 光阻法微粒检测的局限性 由光阻法原理可知，光阻法得到的是微粒的等效投影面积，所以，当同一不规则的微粒多次经过探测区时，可能会被计为大小的不同微粒。在注射液不溶性微粒检测中，以下几个原因常常是影响其准确性的关键因素。 2.2.1 介质必须透明 由光阻法微粒检测的原理可知，光阻法是检测透明液体中与液体折光系数不同的微粒杂质，如果介质不透明，光束无法穿过，检测将无法进行。所以，对于此类液体的检测，应找到能稀释的溶剂(必须进行空白处理和检测)，进行一定比例稀释，达到透明后可检测。如不能找到互溶的溶剂，则此种样品不适合利用光阻法检测。 比较典型的为乳浊液，需进行大比例稀释后(1：：1000)进行检测，得到的检测结果要依据具体稀释倍数进行折算。 2.2.2 气泡的影响 液体中的气泡会对光阻法微粒检测产生较大影响。当分散在液体中的微小气泡经过传感器探测区时，其会反射一定的光能量，从而使光敏器件接收到的光强降低，产生类似微粒的电脉冲，仪器的后处理电路无法区分这种电脉冲究竟是由微粒产生的还是由气泡产生的，而全部被记为微粒，因而对计数产生干扰现象。尤其是气泡的体积较大，很容易影响10 um 以上的微粒计数，因此消除气泡影响是保证光阻法微粒检测准确性最重要的一个环节。 2.2.3 不同介质的影响 当不同的介质(两种互不相容的液体或两种能够互溶，但短时间未互溶或有分层现象时)同时通过传感器探测区时，介质的分层现象会对光束产生影响，导致光敏接收器件产生一些电脉冲，被误计为微粒，导致计数偏大。 2.2.4 取样结构的影响 光阻法微粒检测的取样方式一般是传感器连接一定长度的取样头，检测时，取样头下探至待测溶液中，取样泵工作，将待测液体以一定流速稳定的吸入，在传感器的探测区位置形成稳定流 速的液流，光阻法微粒检测仪取样头一般为长度70~150 mm，内径2 mm 的不锈钢中空圆管，其充满液体体积为0.2~0.5 ml，此段为“死体积”，检测时，仪器的取样泵必须先工作一段(仪器可设置预走量，一般设置为0.5~1.0 ml)，将取样头中的“夜液体”置换为待测的“新液体”后，再开始定量计数，计数结束后，必须保证取样管中充满液体，以免气泡进入导致数据作废。所以光阻法传感器的这种结构决定了光阻法不能做到对样品进行100%的完全计数，这对于25ml以下的小容量注射液检测很有指导意义，很多用户希望仪器能够将安部瓶中的液体完全抽吸干净，得到整个容器的微粒数，这是不科学也无法做到的。正确的做法是取小于标称容量进行定量检测(如安安瓶装5ml的液体，取2ml进行检测)，然后换算得到整个容器的微粒含量 同时，光阻法传感器的这种结构还决定了预处理的重要性，检测前必须使用空白液对取样头、传感器、管路进行充分的冲洗，检测结束后，关机前也需要对这些部分进行充分的冲洗处理，这样才能最大限度地降低这部分污染对检品带来的影响。传感器与取样头结构见图2. 图2 传感器与取样头结构 3 检测时应注意的事项 3.1 检测容器的处理检测大容量注射液及检测空白使用的检测杯必须处理干净，可按下述方法处理：先使用洗洁精反复刷洗，然后置于超声水浴中(通常使 用的超声浴池为4000 W/m)清洗；清洗完毕后使用不起毛的布料擦干容器外壁，对光观察玻璃容器应洁净无污渍。 3.2 空白(微粒检查用水)的处理 《中国药典》附录《注射液不溶性微粒检查法》明确规定了空白的处理方法：微粒检查用水(空白)应经过不大于1.0 um滤膜过滤。笔者经过实践证明，空白处理可以采用更为简单的方法，纯水机处理过的水或品质好的饮用纯净水(如娃哈哈瓶装纯净水)可达到药典微粒检查用水的要求，可直接使用。 3.3 传感器和管路的冲洗 检测样品前，必须使用处理过的容器，并以空白对传感器和管路进行反复冲洗，一般仪器具有“管路清洗”流程，在“管路清洗”中，为了保证其清洁效果，仪器的取样速度会比正常检测时的取样速度快一倍，将空白倒入处理过的检测容器，运行“管路清洗”数次后，如达到<10粒/10 ml 或<2粒/25ml，则认为检测样品具备了条件。 3.4 样液准备 在对样液进行微粒检测前，应先用肉眼观察待测样液的性状(对于需要溶解的固体粉末制剂，应先充分溶解，并静置适当时间)，主要注意观察以下三方面：①样液是否澄清透明；②样液中是否有可见的气泡；③样液中有无明显可见的杂质、絮状物、漂浮物。如存在上述几方面问题，不应急于进行检测。对于前两项，可采取相应的措施(稀释、脱气)进行处理，对于第三项，明显可见异物有可能会堵塞传感器，应考虑重新取样。 3.5 气泡干扰的辨别和处理 有时样品中有不易辨别气泡，或某些药品本身易发泡，当出现下述情况时，应考虑样品中可能有气泡，检测数据存疑：①大粒径通道(如>25 pm，甚至>50 um 或>100 p.m通道)计数不合理的多；②检测数据不稳定、重复性差，而且大粒径通道颗粒数下降明显。 当出现上述情况时，应考虑检品中有气泡干扰，可以采取以下方法进行脱气后再检测：①静置：流动好的样液，如水、有机溶剂等可采取静置适当时间的方法脱气；②超声：超声可加快脱气的速度和效率，取样瓶用盖子盖好后放置在超声浴池内脱气，直至外观看不见气泡为止；③真空或正压：当样液具有一定的黏度，静置或超声都很难将气泡完全消除时，应采用真空或正压脱气的方法，将取样容器开盖放入密封的压力舱内，加至少0.05MPa 的真空或0.2MPa 的正压片刻，观察样液中的气泡应逐渐消失，如未达到满意效果，可适当增加压力。 3.6 黏度过高、易挂壁样品的检测 微粒检测仪一般采用注射器泵抽吸的方法取样，其适合的样液黏度 在20cP以下，如果检测某种样品出现注射器泵抽吸困难，注射器中有大量气泡时(排除传感器堵塞原因)，可考虑样品黏度过大引起，对于黏度大的样品，可按下述方法进行处理：①进行适当的稀释：稀释倍数越低越好，同时注意必须保证稀释液与样液完全互溶，并且稀释液需进行空白检测；检测的数据要进行空白扣除和折算；②加热：对于某些黏度略微超标的样液可通过加热到40~50℃的方法降低黏度；③加压辅助检测：某些黏度大的样品，通过加热无法解决，同时，又不能采用稀释方法的，可考虑采用加压辅助的方法，此时需要配置单独的压力舱或采用带有压力舱的微粒检测仪进行检测。 黏度过高、易挂壁样品检测后，必须用空白彻底清洗仪器的管路，以免出现结晶而堵塞传感器。 3.7 油基溶液的检测 ·如果遇到油溶性样液需要进行微粒检测，而仪器的管路处于水检测状态，此时，必须进行介质的置换，将管路、传感器上附着的水完全清除干净，否则会得到面目全非的数据，具体清除步骤如下：①用空白(过滤水)清洗仪器管路(运行仪器的“管路清洗”功能3~5次)；②用分析纯的异丙醇清洗仪器管路3~5次③用石油醚(沸点范围100℃ ~120℃)清洗仪器管路3~5次。④对石油醚进行检测，如检测结果达到药典空白检测的要求，可进行油溶性样品的检测小。 检测完油溶性的样液后，如需进行水溶性的样液检测，将上述方法由③一②一①进行逆向处理即可。需要注意的是，上述过程中使用的异丙醇和石油醚必须使用不大于1.0 p.m 滤膜过滤，才能保证达到药典空白检测的要求。 3.8 定期校准仪器的必要性 为了保证检测的准确性，定期校准仪器也是必要的，如果仪器的使用频次较高，应在6个月左右校准一次，最长也不要超过1年。 4 结论 光阻法微粒检测的准确性在很大程度上依赖于仪器的正确操作技术。只有正确使用微粒检测仪，才能减小计数误差，提高数据的准确度，从而正确评价药品质量。 ( 参考文献 ) ( GB/T 29024.3-2012.粒度分析单颗粒的光学测量方法第3部分：光阻法液体体粒计数器[S]. ) ( 2 中国药典[S].二部.2010：附录71 ) ( 3 卢继霞，任桂兰，夏志靳.液体自动颗粒计数器的规范化操作——一介绍国际标准 ISO/DIS 11500 [].机床与液压，1999，5：48-49 ) ( 4 JJG 1061-2010.中华人民共和国国家计量检定规程液体颗粒计数 器[S]. ) ?China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net 光阻法微粒检测仪是进行注射液不溶性微粒检测 的常用仪器，《中国药典》 2000 年版附录中开始收录此 种方法。其具有的高效率、快捷、准确，迅速代替了原 来的显微计数法，用户数量逐年递增。经过十几年的 应用，光阻法微粒检测已成为生产注射剂的厂家及检 验单位必备的检验仪器，保守估计，目前国内在用微粒 检测仪在2 000 台以上。 光阻法微粒检测是将检测样品中颗粒大小转换成电脉冲的一种间接测量的方法，具有测试方法简单、检 测速度快等优点，但也有一定的局限性。如何才能用 好光阻法微粒检测仪，保证测试样品的准确性，本文重点进行探讨。