天然产物白毛茛中使用CORTECS 2.7 μm色谱柱和ACQUITY QDa检测器表征检测方案(液相色谱仪)

THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 应用纪要1 售 「应用纪要] Waters 使用CORTECS 2.7 um色谱柱和ACQUITY QDa检测器表征天然产物白毛莨 Kenneth D. Berthelette， Thomas Swann和Kenneth J. Fountain沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 仁使用CORTECS 2.7 um色谱柱分离复杂样品基质，实现样品的准确表征 使用ACQUITY@QDa@检测器可在5min内通过质量数快速鉴定化合物 沃特世解决方案 CORTECS C+色谱柱 Alliance@ HPLC Empower3 CDSLCMS认证最大回收样品瓶 ACQUITY QDa 检测器 关键词 Alliance HPLC， CORTECS C.+， 白毛莨， ACQUITY QDa检测器，天然产物 简介 天然产物中草药保健品可广泛用于治疗身体疾病。根据样品来源和加工过程的不同，保健品组分在数量、类型以及存在的天然产物化合物含量方面差异很大。对多种来源的样品进行准确表征对于控制保健品质量来说非常有用。但是，样品的复杂性和/或变异性则需要使用不会降低分析速度的高效色谱柱。 CORTECS 2.7 um色谱柱含实心核颗粒，能实现更高的峰容量和更低的背压，非常适用于传统HPLC仪器。因此，使用CORTECS 2.7 um可更轻松地分析天然产物混合物。 白毛莨是加拿大东南部和美国东北部地区特有的一种植物。过去常将它用于促进消化、粘膜、胆汁分泌以及许多其它身体功能。在本应用中，我们对五种不同来源的白毛食(包括四个不同的生产商、植物的两个不同部位以及两种不同制剂基质)进行了分析。检测了原料的多样性，以测定各个样品间的差异以及所有所测原料是否存在共有化合物。本应用在配有UV和ACQUITY QDa检测器的Alliance HPLC系统上使用CORTECSC+， 2.7 pm， 3.050mm色谱柱对各个样品进行分析，以快速可靠地获得样品峰的质谱数据，，.从而为表征天然产物提供详细且重要的信息。 LC条件 系统： ACQUITY UPLC 色谱柱： CORTECS C+， 2.7um，3.0x50mm (部件号186007400) 流动相A： 0.1%甲酸水溶液 流动相B： 0.1%甲酸的乙腈溶液 梯度： 流动相B在5.0min内 由7%增至30%， 然后在0.1 min内降至7%， 保持1.0 min 流速： 1.0 mL/min 温： 30℃ 检测(UV： 300nm ACQUITY QDa设置： ESI+模式，全扫描 (从150-1250 amu) 进样体积： 1.0pL 样品瓶： LCMS认证最大 回收样品瓶 (部件号600000670CV) 数据管理： Empower 3 CDS 胶囊样品 取20mg粉末状状品于10mL离心管中。加入2.5mL甲醇：水(90：10)的0.1%乙酸溶液。将样品超声处理15 min， 以4000rpm的速度离心5 min。然后取上清液加入到另一个样品瓶中。再提取3次。提取液用0.1pm尼龙过滤膜过滤并进样。 液体样品 将两滴白毛莨液体添加到10mL甲醇：水(90：10)的0.1%乙酸溶液中。提取液用0.1pm尼龙过滤膜过滤并进样。 结果与讨论 本研究对五种商业来源的白毛莨进行了表征。表1显示了每个样品的来源以及与所用的植物部分和样品形态相关的详细信息。 名称 来源 形态 白毛莨液体 根 液体 白毛莨草药 茎、花、叶 胶囊 白毛莨根 根 胶囊 白毛莨提取物 根 胶囊 白毛莨 根茎/根 胶囊 样品制备完后进样，并采集UV和质谱数据。 图1显示五种样品的全图。 图1.五种不同来源的白毛莨在CORTECS C，g+， 2.7 um，3.0x50mm色谱柱上的分离结果(300nm)。其中列出了主要组分A和B。分离的最大压力为2600 psi。 随后放大色谱图以显示样品中低含量的成分。 图2示出了五种样品的放大色谱图。 图2.图1中五种样品的放大UV色谱图。 由于使用了高柱效的CORTECS色谱柱，五种不同样品的UV色谱图具有显著差异。峰B的强度介于0.04至0.02AU之间，表明不同样品中特定化合物的含量不同。进一步的样品表征则需更多的信息。为了获得这些信息，本研究测定了ACQUITY QDa质谱数据并将其与文献中的白毛莨数据进行了比较。，-一共鉴定出了7种生物碱(见表2和图3)。 表2.文献所述的已鉴定生物碱及其质量数汇总?。 使用ACQUITY QDa检测器可鉴定出UV色谱图中观察到的某些峰。液体样品可识别的峰最多，表2列出了存在的7种化合物。其余每种样品含两个或多个可识别的峰。小檗碱是含量最高的组分，也是所有样品中唯一的共同化合物。图4示出了使用提取离子色谱(EIC)对液体样品中峰的鉴定结果。 图3.已鉴定生物碱的结构。 图4.使用m/z值对白毛莨液体样品中的UV峰的鉴定结果。 通过使用ACQUITYQDa检测器，两种主要组分峰(图1和2中的A和B)的鉴定结果分别为白毛莨碱和小檗碱。同时，对其它5种化合物进行了鉴定并将它们与UV色谱图中的峰进行关联。任何两种样品在相同浓度条件下均无完全相同的化合物。这些轨迹代表了一种“指纹”，即每种白毛莨样品的特征。这些指纹可用于对比来自不同生产商以及不同植物来源的白毛莨。由于使用了高柱效的CORTECS 2.7 um色谱柱，因此能够对复杂样品(例如，白毛莨)进行快速分离。通过将UV数据和ACQUITY QDa检测器获得的质谱数据相结合，我们能够对每种样品进行完全表征，从而以最小的付出为分析人员提供宝贵的信息。 结论 由于样品的复杂性，天然产物的分析和表征过程非常困难。快速获取可靠数据对于复杂样品(例如，本应用中的白毛莨)的表征来说至关重要。使用CORTECSC ，+2.7 um色谱柱可轻松完成复杂的分离。 CORTECS 2.7 um色谱柱具有较高柱效，同时可在HPLC系统压力范围内运行。通过将最新色谱柱技术与最新质谱检测技术(ACQUITY QDa)相结合，本研究在5 min内对5种来源的白毛莨进行了简单分离，并鉴定出了7种化合物。 ( 参考文献 ) ( Avula， B et al. Quantitative Determin a tion o f Alkaloids f r om Roots of H ydrastis canadensis L. and Dietary Supplements Using UltraPerformanceL i quid Chromatography with UV detection. Journal of AOAC International. Vol 95(2012)5 ： 1398- 1 405. ) ( 2. P illai， M et al.LC-MS Based Workflows for Qualitative and Quantitativ e Analysis of Homeopathic Preparation of Hydrastis canadensis.Chromatographia (2014)77：119-1 3 1. ) 使用CORTECS . um色谱柱和ACQUITY QDa检测器表征天然产物白毛莨 使用CORTECS . um色谱柱和ACQUITY QDa检测器表征天然产物白毛莨 天然产物中草药保健品可广泛用于治疗身体疾病。根据样品来源和 加工过程的不同，保健品组分在数量、类型以及存在的天然产物化 合物含量方面差异很大。对多种来源的样品进行准确表征对于控制 保健品质量来说非常有用。但是，样品的复杂性和/或变异性则需要 使用不会降低分析速度的高效色谱柱。CORTECS 2.7 µm色谱柱含实心核颗 粒，能实现更高的峰容量和更低的背压，非常适用于传统HPLC仪器。因 此，使用CORTECS 2.7 µm可更轻松地分析天然产物混合物。白毛茛是加拿大东南部和美国东北部地区特有的一种植物。过去常 将它用于促进消化、粘膜、胆汁分泌以及许多其它身体功能。在本 应用中，我们对五种不同来源的白毛(包括四个不同的生产商、植 物的两个不同部位以及两种不同制剂基质)进行了分析。检测了原料 的多样性，以测定各个样品间的差异以及所有所测原料是否存在共 有化合物。本应用在配有UV和ACQUITY QDa检测器的Alliance HPLC系统上 使用CORTECS C18+，2.7 µm，3.0 × 50 mm色谱柱对各个样品进行分析， 以快速可靠地获得样品峰的质谱数据，从而为表征天然产物提供详 细且重要的信息。