PCR试剂盒中PCR试剂盒检测方案(PCR)

白乐杰马杜拉放线菌染料法荧光定量PCR试剂盒荧光定量PCR技术的基础理论： 1、荧光定量PCR线性关系成立的条件分析 、荧光定量PCR线性关系成立的条件分析。 左图横坐标是PCR循环次数，纵坐标是总的荧光强度Rn,改图反映的是各个样品随着 左图横坐标是PCR循环次数，纵坐标是总的荧光强度Rn,改图反映的是各个样品随着 每轮PCR反应，其总的荧光量的实时变化；右图横坐标也是PCR循环次数，纵坐标是 每轮PCR反应，其总的荧光量的实时变化；右图横坐标也是PCR循环次数，纵坐标是 总的荧光强度与荧光本底的差值RT RB即△Rn的对数，在右图中确定阈值线，该直 总的荧光强度与荧光本底的差值RT –RB即△Rn的对数，在右图中确定阈值线，该直 线上所有样品的RT RB的对数都相同，荧光定量PCR的线性关系才会成立。 线上所有样品的RT –RB的对数都相同，荧光定量PCR的线性关系才会成立。 ​ 稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例） 1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。 2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。 3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。 4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。 7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。 白乐杰马杜拉放线菌染料法荧光定量PCR试剂盒荧光定量PCR技术的基础理论：1、荧光定量PCR线性关系成立的条件分析 、荧光定量PCR线性关系成立的条件分析。左图横坐标是PCR循环次数，纵坐标是总的荧光强度Rn,改图反映的是各个样品随着 左图横坐标是PCR循环次数，纵坐标是总的荧光强度Rn,改图反映的是各个样品随着 每轮PCR反应，其总的荧光量的实时变化；右图横坐标也是PCR循环次数，纵坐标是 每轮PCR反应，其总的荧光量的实时变化；右图横坐标也是PCR循环次数，纵坐标是 总的荧光强度与荧光本底的差值RT RB即△Rn的对数，在右图中确定阈值线，该直 总的荧光强度与荧光本底的差值RT –RB即△Rn的对数，在右图中确定阈值线，该直 线上所有样品的RT RB的对数都相同，荧光定量PCR的线性关系才会成立。 线上所有样品的RT –RB的对数都相同，荧光定量PCR的线性关系才会成立。稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。