苹果和橘子中草甘膦及其代谢物检测方案(液相色谱仪)

DiKMAA reliable partner for your lab 水果中草甘膦及其代谢物的测定 SPE-UPLC-MS/MS 法解决方案 草甘膦是一种非选择性、无残留灭生性除草剂，对多年生生杂草非常有效，广泛用于橡胶、桑、茶、果园及甘蔗地。草甘膦的使用量逐年增加，给农作物、人类健康以及生态环境带来了一定的安全隐患。目前常用草甘膦及其代谢物的检测方法通常存在操作时间长、需要衍生等问题。 迪马科技在参考各种标准及文献的基础上，建立了水果中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸的测定 SPE-UPLC-MS/MS法：采用水提取， ProElut GLY 固相萃取专用柱净化样品，收集流出液， Dikma Polyamino HILIC 色谱柱分离检测，该方法特点： 1)前处理步骤少，提取液直接通过净化柱接收流出液即可； 2)有机溶剂消耗量小，前处理过程中也无需使用酸碱试剂； 3) 仪器分析简单，样品无需衍生直接分析，可提高结果稳定性及减少实验成本； 4)方法定量限0.05 mg/kg。 以下为详细解决方案，敬请参考! 水果中草草膦及其代谢物的测定 SPE-UPLC-MS/MS法 1、适用范围 本方法适用于苹果和橘子中氨甲基膦酸和草甘膦的检测，定量限 0.05 mg/kg。 2、标准品配制 单标标准储备液：准确称取各标准品，用水配制成1000 pg/mL 的单标标准储备液。 混标标准中间液：分别吸取各单标标准储备液，用水配制成 1.0 pg/mL 和 10 pg/mL 的混标标准中间液。 3、提取 取2g样品于50mL离心管中，加入8mL水、10mL二氯甲烷，振荡10 min，超声 10 min，8000 rpm 离心5 min， 取全部上清液于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，取5mL，待净化。 4、净化——ProElut GLY 6 mL (Cat.#：65938) (1)活化依次加入5 mL 甲醇、5mL水，弃去流出液；(2)上 样 将待净化液加入柱中，弃去前3mL流出液，收集后2mL流出液，混匀，滤液过 0.22 pm 尼龙滤膜，，上机分析。 注：同方法制备基质匹配标准溶液。 5、UPLC-MS/MS 条件 5.1 UPLC 条件 色谱柱： Dikma Polyamino HILIC， 150×2.0 mm， 5 um (Cat.#： 99302) 流速：0.2 mL/min 进样量：10pL 柱温：35℃ 流动相： A：：乙腈 B： 5mM乙酸铵溶液，氨水调节至pH=11梯度设置： Time (min) 0 2 2.1 8 8.1 15 A(%) 80 80 20 20 80 80 B(%) 20 20 80 80 20 20 5.2质谱条件 电离模式：ESI扫描方式：负离子扫描检测方式：多反应监测电喷雾电压：-4500V雾化气压力：60psi辅助气压力： 60 psi气帘气压力：35 psi离子源温度：550℃ 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表 目标化合物 定性离子对(m/z) [母离子/子离子) 定量离子对(m/z) (母离子/子离子) 碰撞气能量/eV 去簇电压/V 草甘膦 167.8/62.8 167.8/62.8 -30 -50 167.8/81.0 -21 -31 氨甲基膦酸 109.9/62.8 109.9/62.8 -23 -53 109.9/78.9 -35 -51 6、添加回收结果 水果中氨甲基膦酸和草甘膦的 LC-MS/MS检测添加回收结果： 样品基质 回收率(%) 添加水平：0.05 mg/kg 添加水平：0.5 mg/kg 加标量： 1.0 ug/mL， 加100pL 加标量：10ug/mL，加100uL 草甘膦 氨甲基膦酸 草甘膦 氨甲基膦酸 苹果 86 85 82 88 橘子 143 93 87 106 氨甲基膦酸 10 ng/mL标准品 XIC图 氨甲基膦酸 50 ng/mL 标准品 XIC 图 氨甲基膦酸 100 ng/mL标准品 XIC 图 氨甲基膦酸250 ng/mL标准品 XIC图 ￥XIC of -MRM (6 pairs)： 109.900/62.800 Da ID： anjiajilinsuan1 from Sample 4... ￥XIC of -MRM (6 pairs)： 109.900/62.800 Da ID： anjiajilinsuan1 from Sample 4...53995000- 4500- 4000- 3500- 3000- c2500 2000- 1500- 1000- 500- Max.5398.6 cps.4.61 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 Max.5398.6 cps. 氨甲基膦酸 500ng/mL 标准品 XIC 图 20181127-3.rdb(anjiajilinsuan1)： "Linear" Regression ("No" weighting)： y=55.6x+-371(r=0.9995) 氨甲基膦酸的标准曲线图 R^2=0.9990 标准曲线浓度分别为：10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL 草甘膦 10 ng/mL 标准品 XIC 图 草甘膦 50 ng/mL 标准品 XIC图 草甘膦 100 ng/mL 标准品 XIC 图 草甘膦 250 ng/mL标准品 XIC图 草甘膦 500 ng/mL 标准品 XIC 图 20181127-3.rdb (caoganlin2)："Linear" Regression ("No" weighting)： y=59.6x+281(r=0.9995) 4- 草甘膦的标准曲线图 R^2=0.9990 标准曲线浓度分别为：10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL 水果中草甘膦及其代谢物的测定 SPE-UPLC-MS/MS 法相关产品信息： 货号 名称 规格 样品前处理 65938 草甘膦检测专用固相萃取柱ProElut GLY 6mL，30/pk 244358 12管防交叉污染真空 SPE 萃取装置 12立 4803 1，3，6 mL 柱管通用连接器 15/pk 4806 考克(控制流量) 15/pk 99011 真空/正压两用泵，无油 1/pk 99013 抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米，2L抽滤瓶及橡胶塞) 1/pk 30039 FitMax 针头式过滤器 Nylon 13 mm， 0.22 um 100/pk 标准品 12-MET-12133A-100MG 氨甲基膦酸[1066-51-9] 100 mg 46010 草甘膦[1071-83-6] 100 mg 色谱柱及保护柱 99302 Dikma Polyamino HILIC 150x2.0 mm，5 pm HPLC溶剂•缓冲盐•离子对试剂 50101 乙腈 HPLC级 4L 50102 甲醇 HPLC级 4L 50117 二氯甲烷HPLC级 4L 50138 乙酸铵 HPLC 级 100 g 通用色谱产品 52401B 瓶架/蓝色(现货) 50孔 52401A 瓶架/白色(现货) 50孔 1034 样品瓶(棕色/螺纹) 2 mL， 100/pk 1035 样品瓶盖/含垫(已经组装) 100/pk H80465 HPLC 进样针 25 uL 红色产品货号#30039、#1034、#1035火热促销中        草甘膦是一种非选择性、无残留灭生性除草剂，对多年生根杂草非常有效，广泛用于橡胶、桑、茶、果园及甘蔗地。草甘膦的使用量逐年增加，给农作物、人类健康以及生态环境带来了一定的安全隐患。目前常用草甘膦及其代谢物的检测方法通常存在操作时间长、需要衍生等问题。       迪马科技在参考各种标准及文献的基础上，建立了水果中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸的测定SPE-UPLC-MS/MS法：采用水提取，ProElut GLY固相萃取专用柱净化样品，收集流出液，Dikma Polyamino HILIC色谱柱分离检测，该方法特点：1) 前处理步骤少，提取液直接通过净化柱接收流出液即可；2) 有机溶剂消耗量小，前处理过程中也无需使用酸碱试剂；3) 仪器分析简单，样品无需衍生直接分析，可提高结果稳定性及减少实验成本；4) 方法定量限0.05 mg/kg。以下为详细解决方案，敬请参考！水果中草甘膦及其代谢物的测定SPE-UPLC-MS/MS法1、适用范围： 本方法适用于苹果和橘子中氨甲基膦酸和草甘膦的检测，定量限0.05 mg/kg。2、标准品配制：     单标标准储备液：准确称取各标准品，用水配制成1000 μg/mL的单标标准储备液。     混标标准中间液：分别吸取各单标标准储备液，用水配制成1.0 μg/mL和10 μg/mL的混标标准中间液。3、提取：     取2 g样品于50 mL离心管中，加入8 mL水、10 mL二氯甲烷，振荡10 min，超声10 min，8000 rpm离心5 min，取全部上清液于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，取5 mL，待净化。4、净化： ProElut GLY 6 mL (Cat.#: 65938）     活化：依次加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；    上样：将待净化液加入柱中，弃去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混匀，滤液过0.22 μm尼龙滤膜，上机分析。     注：同方法制备基质匹配标准溶液。5、UPLC-MS/MS条件：      UPLC条件             色谱柱：Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#：99302)             流速：0.2 mL/min                   进样量：10 μL             柱  温：35 ℃             流动相：A:乙腈 B:5 mM乙酸铵溶液，氨水调节至pH=11             梯度设置：       质谱条件            电离模式：ESI            扫描方式：负离子扫描             检测方式：多反应监测                电喷雾电压：-4500 V            雾化气压力：60 psi                   辅助气压力：60 psi            气帘气压力：35 psi                   离子源温度：550 ℃            定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表：6、添加回收率：         水果中草甘膦和氨甲基膦酸的SPE-UPLC-MS/MS检测添加回收结果：7、水果中草甘膦及其代谢物的测定SPE-UPLC-MS/MS法相关产品信息：