动物源性食品中大环内酯检测方案(液相色谱仪)

「应用纪要]WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「应用纪要] Oasis PRiME HLB-UPLC-MS/MS测定动物源性食品中的多兽药残留 孙超、黄德凤 应用优势 样品处理方法可以同时净化不同种类的兽药残留 Quanpedia数据库方便LC-MS/MS方法开发 简便快速的操作流程 稳定的回收率和精密度 关键词 ( Oasis PRiME HLB， Xevo TQ-XS， Quanpedia，猪肉，多兽药残留 ) 摘要 本实验是使用Oasis PRiME HLB处理动物肌肉样品，建立动物源性食品中多种兽药残留同时检测的方法。样品经酸化乙腈溶液提取，利用Oasis°PRiME HLB固相萃取小柱通过式净化处理， UPLC-MS/MS检测。经前处理与仪器条件优化后，在0.5~10 ug/kg的添加浓度范围内，磺胺、喹诺酮、氯霉素、β-受体激动剂、四环素、糖皮质激素、大环内酯、硝基咪唑、苯并咪唑、内酰胺、金刚烷胺、头孢、性激素、镇静剂、阿维菌素、孔雀石绿、喹乙醇、玉米赤霉醇、抗菌剂、抗球虫剂、杀虫剂、非甾体类抗炎药、氨苯砜等多种类的化合物回收率在20%-120%，精密度RSD<20%(n=5)。 前言 兽药被广泛的应用于治疗或预防防物疾病。动物在使用兽药后，在动物细胞、组织或器官内蓄积或储存药物原型、有毒性的代谢物或杂质，形成兽药残留(Veterinary drug residue)。 我国在畜牧养殖方面使用较多的兽药主要有磺胺类、喹诺酮类、β-受体激动剂类、糖皮质激素类、氯霉素类、头孢类等化合物。滥用兽药易造成畜牧产品及环境的严重污染，并通过代谢途径进入畜禽产品中，最终被人体摄入并蓄积，导致过敏反应且使人体产生抗药性等副作用。因此，监测多种兽药在猪肉为代表的肉制品中的残留对保证证制品的安全具有积极意义。目前，相关标准和文献报道的多兽药残留的同时检测方法大多按照兽药种类分成若干种检测方法，对于日益增长的检测量而言需要耗费大量的人力物力，因此亟需一个统一简便的多残留检测方案。 本方法中样品处理采用了沃特世(Waters)Oasis PRiME HLB固相萃取小柱，该产品创新的填料技术能够有效吸附动物肌肉中的磷脂等干扰物，结合蛋白沉淀技术，能够有效去除肌肉样品中的大部分基质干扰。采用Waters UPLC/Xevo°TQ-XS系统，结合QuanpediaTM数据库，建立稳定高效的多兽药残留液相色谱串联四极杆分析方法，获得准确分析结果。 试验部分 仪器，试剂与材料 Waters ACQUITY UPLCI-Class FTN， Waters Xevo TQ-XS三重四极杆质谱， Waters HSS T3色谱柱(2.1x100mm， 1.8 um)， Oasis PRiME HLB固相萃取柱， 200mg， 6 CC 样品处理 称取2.5g肉样，加入80%乙腈水溶液(含0.2%甲酸)10 mL， 旋涡振荡， 4000 r/min高速离心5 min， 取上清液准备过PRiME HLB固相萃取柱。 取Oasis PRiME HLB固相萃取柱，无需活化与平衡，将3mL上清液上固相萃取柱，保持一秒一滴的流速，收集2mL流出液，氮气下吹干，1mL初始流动相定容，过GHP滤膜，待上机。 液相条件 色谱柱： Waters HSS T3色谱柱(2.1x100mm，1.8 um) 流动相： 正离子：A： 0.1%甲酸水溶液 B： 0.1%甲酸甲醇 负离子：A：水 B：乙青 Curve %B 流速 %A 时间 (min) (mL/min) 起始 0.45 98 2 起始 0.25 0.45 98 2 6 12 0.45 2 98 6 0.45 2 98 6 13 13.01 0.45 98 2 6 17 0.45 98 2 6 流速： 0.45mL/min 柱温： 45°C 样品温度： 10°℃ 进样量： 2pL 质谱条件 离子源： ESI+/ESI- 采集方式： MRM 毛细管电压： 3.5kV 离子源温度： 150°C 脱溶剂气温度： 600°C 脱溶剂气流速度：1000L/h 锥孔气： 150 L/h 碰撞其流速： 0.15 mL/min 结果与讨论 样品处理的优化 样品提取时选用了80%的酸化乙腈溶液，主要是考虑了多种目标化合物的提取效率极其稳定性和沉淀蛋白的作用。如果想重点提高某类化合物的结果时，提取溶剂还可以做特殊优化。 动物源性食品中大量存在的磷脂，干扰部分化合物分析定量，影响色谱柱寿命及仪器维护成本。利用Oasis PRiME HLB固相萃取小柱净化样品，能有效去除磷脂等干扰物。同时，采用通过式净化策略能极大提高样品分析通量，并且Oasis PRiME HLB经过特殊设计的筛板能够提供更快通过效率。 仪器方法的优化 本实验室UPLC-MS/MS方法的建立过程使用Waters Quanpedia数据库，库中包含了1000多种化合物的LC-MS/MS方法，涵盖了几乎所有食品检测要求的兽药种类。Waters Quanpedia数据库操作简便，包含了从液相条件、采集方法到定量处理方法的完整方法包，能大大节约方法开发时间，并且能有效避免实验室间方法开发的差异。 方法回收率和精密度 采用在空白样品中添加标准溶液的方法进行添加回收率测定。分别添加0.5 ug/kg、1.0 ug/kg、2.0pg/kg、10 pg/kg 4个浓度水平，按所建立的方法进行样品处理及测定，每个浓度水平进行3次重复测定。方法采用空白基质标准曲线，外标法定量。各添加水平的回收率分布如下图。 ( 结论 ) ( 实验成功建立了同时测定多种类兽药残留的分析方法。分析结果满足动物源性样品中兽药残留检测的相关要求。 ) Oasis PRiME HLB固相萃取柱简单的通过式净化处理能有效去除样品中磷脂等干扰物，且处理过程简单高效，合适大批量日常分析检测。 Waters Quanpedia数据库包含多兽药残留分析所需的LC-MS/MS方法，能节约方法研发成本，避免实验室间方法差异。 扫一扫，关注沃特世微信 Waters 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 北京：010-5209 3866 上海：021-61562666 广州：020-28296555 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400) 8202676www.waters.com Oasis PRiME HLB-UPLC-MS/MS测定动物源性食品中的多兽药残留 Waters和The Science of What’s Possible是沃特世公司的商标。所有其他的商标属于各自的所有者。@特世公司 前言 兽药被广泛的应用于治疗或预防动物疾病。动物在使用兽药后，在动物细胞、 组织或器官内蓄积或储存药物原型、有毒性的代谢物或杂质，形成兽药残留 (Veterinary drug residue)。我国在畜牧养殖方面使用较多的兽药主要有磺胺 类、喹诺酮类、β-受体激动剂类、糖皮质激素类、氯霉素类、头孢类等化合物。 滥用兽药易造成畜牧产品及环境的严重污染，并通过代谢途径进入畜禽产品中， 最终被人体摄入并蓄积，导致过敏反应且使人体产生抗药性等副作用。因此，监 测多种兽药在猪肉为代表的肉制品中的残留对保证肉制品的安全具有积极意义。 目前，相关标准和文献报道的多兽药残留的同时检测方法大多按照兽药种类分 成若干种检测方法，对于日益增长的检测量而言需要耗费大量的人力物力，因此 亟需一个统一简便的多残留检测方案。本方法中样品处理采用了沃特世(Waters®)Oasis PRiME HLB固相萃取小柱，该 产品创新的填料技术能够有效吸附动物肌肉中的磷脂等干扰物，结合蛋白沉淀 技术，能够有效去除肌肉样品中的大部分基质干扰。采用Waters UPLC/Xevo® TQ-XS系统，结合 QuanpediaTM数据库，建立稳定高效的多兽药残留液相色谱串 联四极杆分析方法，获得准确分析结果。结论1)实验成功建立了同时测定多种类兽药残留的分析方法。分析结果满足动物源性样品中兽药残留检测的相 关要求。2)Oasis PRiME HLB固相萃取柱简单的通过式净化处理能有效去除样品中磷脂等干扰物，且处理过程简单 高效，合适大批量日常分析检测。3)Waters Quanpedia数据库包含多兽药残留分析所需的LC-MS/MS方法，能节约方法研发成本，避免实验 室间方法差异。