小鼠脾组织中脾组织磷脂质检测方案(液相色谱仪)

LAAN-A-LM127 Application No.C155News用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行日：2017年4月400-650-0439 4种小鼠组织的磷脂质分析 复合脂质的磷脂质与糖脂、胆固醇一同作为细胞膜的主要成分，在脂质双分子层的形成中担任着重要的角色。此外，除构成细胞膜外，磷脂质还作为与通过脂质代谢产生能量、转运脂质、信号传导有关脂肪酸的供应源发挥着相关功能。像这样，磷脂质在活体内发挥着多种作用，根据其结构成分的特征性头基因与脂肪酸的组合，其数量可谓相当庞大。在全面分析脂质分子种类的 lipidomics 领域中，常常会基于磷脂质的m/z、头基因由来的特征性产物离子、各脂肪酸由来的产物离子等信息，利用数据库进行定性分析。本研究以小鼠来源的脑、脾脏、肺、肝脏组织为对象，采用三重四极杆质量分析器，通过前体离子扫描(PIS)或中性丢失扫描(NLS)进行磷脂质分析。此外在推测候选磷脂时，使用PREMIER Biosoft 公司 (www.premierbiosoft.com) 的 SimLipid 软件进行了数据库搜索，并基于该结果进行推测。根据4种不同的组织提取物，确认了各组织中的特征性磷脂质成分，并确认了通过 SimLipid 软件进行的数据库搜索的有效性。 样本制备和分析 使用甲醇对小鼠的各组织进行脂质提取。用甲醇适当稀释制备的组织提取液后，使用LCMS-8060 通过前体离子扫描(PIS)和中性丢失扫描(NLS)进行磷脂质分析。此时， LC和MS的分析条件与Application News C151的分析条件相同。作为代表性脂肪酸，对各组织进行的以(16：0)、(18：0)、(18：1)、(20：4)、(20：5)、(22：4)、(22：5)、(22：6)为对象的PIS分析结果如图1 a)所示。此外，以PC和SM由来的头基因为对象的PIS的分析结果如b)所示。b)的结果显示，检测出了与PC和SM 相当的磷脂质的各波峰，在a)中零散可见推测是其他磷脂质来源、以及中性脂质来源的波峰。 M. Yamada， T. Nakanishi 图1以脂肪酸和头基因为对象的 PIS 分析的色谱图(脑、脾脏、肺、肝脏) |通过 SimLipid 软件进行的磷脂质推测 基于PIS 和 NLS 的分析结果，对检测出的各波峰的磷脂质进行推测，并使用 SimLipid 软件进行数据库搜索。首先，用 SimLipid 软件直接读取 LCMS-8060 的分析数据后，对通过 PIS 和 NLS分析检测出的各样本的峰值强度进行了计算。基于相对于设定质量值的 Tolerance、加合离子的有无、产物离子的选择(脂肪酸或头基因)，通过 SimLipid 软件进行了数据库搜索。SimLipid 软件的数据库中登录有对应1793种脂肪酸和34种头基因5227的 PIS/NLS 集合，以及归属于该集合的1023种磷脂质，通过事先设定的条件，对检测出的波峰和数据库进行对照。通过数据库搜索出的肺组织分析结果示例如图2所示。在此，通过数据库搜索的结果，推测了与该峰相对的各磷脂等级的信息和脂肪酸的碳原子数量以及双键总数，并显示了各样本(n=4)的对应峰值强度积分值( TotalAbundance)。 四种组织中的磷脂质 根据数据库搜索的结果，在各组织中推测的磷脂质中，对所有组织样本已确认的磷脂质的峰值强度(TotalAbundance)进行了制图(图3)。根据图3，确认了各个组织中均有特征性的磷脂质存在。例如，已知具有减少肺泡表面张力功能的肺表面活性物质的主要成分为 PC (32：0)，但同时也含有了大量 PC (32：1)。已知脑的大脑皮质中存在大量含有棕榈酸(16：0) 和油酸 (18：1)的磷脂酰胆碱，因此推测在脑中显著观测到的 PC (34：1)的脂肪酸成分为上述两种脂肪酸。此外，根据本次的结果，确认了肝脏组织中的磷脂质的多样性十分显著。 通过像这样使用 SimLipid 软件进行数据库搜索，使在数量庞大的磷脂质中推测样本中含有的磷脂质成为了可能。 图2通通 SimLipid 进行的数据库搜索的一例(肺组织) 图34种组织中的磷脂质的“Total Abundance” 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ( 免责声明： ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 如有变动，恕不另行通知。 ) 本研究以小鼠来源的脑、脾脏、肺、肝脏组织为对象，采用三重四极杆质量分析器，通过前体离子扫描（PIS）或中性丢失扫描（NLS）进行磷脂质分析。此外在推测候选磷脂时，使用PREMIER Biosoft公司的SimLipid软件进行了数据库搜索，并基于该结果进行推测。根据4种不同的组织提取物，确认了各组织中的特征性磷脂质成分，并确认了通过SimLipid软件进行的数据库搜索的有效性。使用甲醇对小鼠的各组织进行脂质提取。用甲醇适当稀释制备的组织提取液后，使用LCMS-8060通过前体离子扫描（PIS）和中性丢失扫描（NLS）进行磷脂质分析。