细胞中生长迁移速度检测方案(其它常用设备)

广州科适特科学仪器有限公司www.kosterscience.com 一种新型细胞划痕实验方法的简要介绍 广州科适特科学仪器有限公司 一、 传统细胞迁移实验技术一划痕实验 1.基本原理 细胞划痕(修复)法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外外口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间(例如72h)，取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长(修复)至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。 实验材料 细胞样品 试剂、试剂盒 无血清培养基 PBS 仪器、耗材 6孔板 maker笔直尺枪头 实验步骤 一、准备： 所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和 marker 笔等在操作前，需紫外照 射30min(超净台内) 二、流程 1.先用 marker 笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约 每隔0.5-1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 2.在空中加入约5X10°个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为 过夜能铺满。 3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直， 不能倾斜。 4.用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。 5.放入37度 5%C0培养箱，培养。按0，6，12，24小时取样，拍照。 2、操作步骤 (1)先用 marker 笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 (2)在孔中加入约5×105个细胞，具体数量因细胞种类不同而不同，接种原则为过夜后融合率达到100%。 (3)第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。 (4)PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。 (5)放入37℃ 5%C02培养箱，培养。可按0，6， 12， 24h时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。 (6)统计方法：使用 Image J软件打开图片后，随机划取6至8条水平线，计算细胞间距离的均值。 3.注意事项： (1)在用 PBS缓冲液冲洗时，贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。 (2)一般做划痕实验，都是无血清或者低血清(<2%)否则细胞增殖就不能忽略。 (3)按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。 二.传统实验方法主要问题 传统实验方法缺点是细胞增殖对实验结果有影响，即使在无血清或低血清条件时，细胞的状态、代谢等方面会受到影响，由于细胞内信号传导系统整体性的下调，细胞迁移的速度也会慢很多；另外创建“伤口”也可能时大时小，边缘不整齐等误差；还有在镜下拍照观察时，每次观察点基本不可能做到完全一致等。 三.最新实验解决方法-------伤口愈合划痕插件 ibidi的伤口愈合成像分析解决方案可以评估细胞迁移，仅仅通过4步就可以得到结果。 1.种植细胞，产生划痕 2.获得显微镜成像结果 3.图像处理 4.结果数据处理 可黏附底部；生物相容硅胶材料；9 mm x 9 mm x 5 mm； 两孔(70pl/孔)；每孔生长面积0.22 cm2；可产生500um 宽的“gap” 材料 生物相容硅胶材料 规格 两孔(70ul孔) 尺寸 8.4mm x 8.4mmx5 mm 每孔生长面积 0.22cm2 产生“划痕”宽度 500um 底部 可黏附底部 特点： 1.在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用。 2.非常适合研究细胞与胞外基质(ECM)，细胞与细胞之间相互作用引起的细胞迁移。34 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。 细胞培养插件方法与传统划痕实验比较 细胞培养插件提供重复性更好的实验结果：左图是伤口愈合插件做出的实验数据统计；右图是枪头划痕做出的实验数据统计 四.方案小结 (1)新型细胞划痕实验方法可以保证划痕的标准化，保证了实验的重复性一对比枪头划痕，划痕会歪歪扭扭，无法保证每次都一样； (2)新型细胞划痕实验方法可以避免枪头划痕会伤到包被；手动划痕伤到包被的话，会直接影响了细胞迁移的结果； (3)直接镜检观察，成像效果良好； (4)新型细胞划痕实验方法有配套的图像分析，图像分析是通过计算实验区域的空白面积来计算愈合情况的，比分析计算的要更客观准确； (5)产品用法简介：.只需要在插件的两个孔里种细胞，等细胞贴壁了再拔掉这个插件，细胞之间就会留下一道标准的划痕，就可以开始定时观察细胞愈合的情况了； (6)多种规格适合不同的实验流程，2孔，3孔，4孔，带培养皿或者插件，细胞追踪实验专用插件培养皿等 一种新型细胞划痕实验方法的简要介绍 广州科适特科学仪器有限公司一.传统细胞迁移实验技术—划痕实验1.基本原理细胞划痕（修复）法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上， 用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间（例如72h），取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。实验材料细胞样品试剂、试剂盒无血清培养基 PBS仪器、耗材6孔板   maker笔 直尺 枪头实验步骤一、 准备：   所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔等在操作前，需紫外照射30min（超净台内）二、  流程1.先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5-1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2.在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。4.用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。5.放入37度5%CO2培养箱，培养。按0，6，12，24小时取样，拍照。2、操作步骤（1）先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 （2）在孔中加入约5×105个细胞，具体数量因细胞种类不同而不同，接种原则为过夜后融合率达到100%。（3）第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜(不同孔之间使用同一只枪头)。（4）PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。（5）放入37℃ 5% CO2培养箱，培养。可按0，6，12，24h时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。（6）统计方法：使用Image J软件打开图片后，随机划取6至8条水平线，计算细胞间距离的均值。 3.注意事项：（1）在用PBS缓冲液冲洗时，贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。（2）一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（<2%）否则细胞增殖就不能忽略。（3）按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。二．传统实验方法主要问题传统实验方法缺点是细胞增殖对实验结果有影响，即使在无血清或低血清条件时，细胞的状态、代谢等方面会受到影响，由于细胞内信号传导系统整体性的下调，细胞迁移的速度也会慢很多；另外创建“伤口”也可能时大时小，边缘不整齐等误差；还有在镜下拍照观察时，每次观察点基本不可能做到完全一致等。三．新型实验解决方法-------伤口愈合划痕插件可黏附底部；生物相容硅胶材料；9 mm x 9 mm x 5 mm；两孔（70μl/孔）；每孔生长面积0.22 cm2；可产生500 μm宽的“gap”特点：1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。2. 非常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞迁移。3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用。4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。 细胞培养插件方法与传统划痕实验比较细胞培养插件提供重复性更好的实验结果：       左图是伤口愈合插件做出的实验数据统计；右图是枪头划痕做出的实验数据统计四.方案小结（1） 新型细胞划痕实验方法可以保证划痕的标准化，保证了实验的重复性－对比枪头划痕，划痕会歪歪扭扭，无法保证每次都一样； （2）新型细胞划痕实验方法可以避免枪头划痕会伤到包被；手动划痕伤到包被的话，会直接影响了细胞迁移的结果；（3）直接镜检观察，成像效果良好； （4）新型细胞划痕实验方法有配套的图像分析，图像分析是通过计算实验区域的空白面积来计算愈合情况的，比分析计算的要更客观准确；（5）产品用法简介： 只需要在插件的两个孔里种细胞，等细胞贴壁了再拔掉这个插件，细胞之间就会留下一道标准的划痕，就可以开始定时观察细胞愈合的情况了；（6）多种规格适合不同的实验流程，2孔，3孔，4孔，带培养皿或者插件，细胞追踪实验专用插件培养皿等