花生过敏原蛋白质Ara h 2的酶解产物中蛋白质种类检测方案(生物质谱)

SSL-CA14-821Excellence in Science Excellence in ScienceMALDI-007 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center上海市徐汇区区州路180号B2栋http：//www.shimadzu.com.cn咨询电话：021-34193996Hotline： 021-34193996Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai 应用台式 MALDI-TOF-MS 鉴定蛋白质种类 MALDI-007 摘要：本文应用岛津台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪 MALDI-8020， 在线性正离子模式下，以 CHCA (α-氰基-4-羟基肉桂酸)为基质，分析花生过敏原蛋白质 Ara h2的酶解产物，得到了精确的分子量分布信息。将酶解产物的肽指纹图谱(PMF) 检索 asco 数据库，成功匹配到玛论蛋白质信息。 关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 MALDI-8020 蛋白质鉴定 Ara h 2 本文以 CHCA 为基质，应用台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪 MALDI-8020 检测花生过敏原蛋白质 Ara h 2的酶解产物，并对其进行 Mascot 搜库分析，搜库结果与理论相符，验证了 MALDI-8020的检测结果，表明 MALDI-8020 可以满足蛋白质分析的要求。 图1MALDI-8020 1.2分析条件 调谐模式：线性正离子模式激光器：355nm 固态激光器 扫描范围： m/z500-3000 激光能量：60 1.3试剂和样品 基质： CHCA (a-氰基-4-羟基肉桂酸) 样品：花生过敏原蛋白质 Ara h 2 (Conglutin-7) 1.4样品前处理 取50 ug样品，应用 DTT(二硫苏糖醇)和IAA((碘乙酰胺)进行还原烷基化处理后，加入1 ug胰蛋白酶37℃酶解过夜。吸取1uL酶解产物和1uLCHCA 基质溶液点靶，自然干燥后送入质谱进行分析。 结果与讨论 Ara h 2酶解产物一一级质谱检测结果如图2所示。从结果来看，酶解产物在 m/z 800-2200 之间检测到显著信号峰。将样品一级肽指纹图谱(PMF) 通过 Mascot软件检索数据库SwissProt_Viridiplantae (2018_08， 39603条序列) (参数设置见图3)，结果如图4所示，成功匹配到蛋白质 Conglutin-7，与理论一致。 图2 Ara h 2的胰蛋白酶酶解产物的一级质谱图 图3 Mascot检索参数 1. CONG7 ARAHY Mass： 20558 Score：71 Expect： 0.0029 Matches：9Conglutin-7 OS=Arachis hypogaea OX=3818 PE=1 SV=2 图4 Ara h 2 (Conglutin-7)酶解产物一级PMF搜库结果 结论 本文应用台式基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 MALDI-8020 检测花生过敏原蛋白质 Ara h 2的酶解产物，搜库结果与理论相符。MALDI-8020 作为台式基质辅助激光解析电离飞行时间质谱，体积紧凑、分析速度快、仪器维护方便，性能卓越，是蛋白质鉴定的有力工具。 本文应用岛津台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪MALDI-8020，在线性正离子模式下，以CHCA（α-氰基-4-羟基肉桂酸）为基质，分析花生过敏原蛋白质Ara h 2的酶解产物，得到了精确的分子量分布信息。将酶解产物的PMF（肽指纹图谱）检索Mascot数据库，成功匹配到理论蛋白质信息。