苹果汁和苹果酒中天然棒曲霉素检测方案(气相色谱仪)

采用 (GC/MS：方法检测苹果汁和苹果酒中的天然棒曲霉素 应用简报 食品检测和农业 作者 摘要 Pat Sasso 安捷伦科技有限公司 随着苹果生长期的延长以及苹果和苹果浓缩汁出口能力的提高，它们摄入污染产品的可能性也随之增加。棒曲霉素是一种真菌霉素，在苹果腐烂过程中产生，本文描述了一种采用安捷伦超高惰性色谱柱检测棒曲霉素的方法，该方法无需样品衍生化。该色谱分析方法可以分离5-羟甲级糠醛(HMF)—一种由苹果产品中的糖在过度加热时生成的产物。使用聚苯乙烯-二乙烯苯 SPE 柱执行固相萃取，然后在注入GC/MS 系统检测前用乙酸乙酯进行液/液萃取，完成样品制备。 前言 苹果酒和苹果汁是全球十大消费量最高的水果饮料之一。苹果以及苹果产品的三大生产国分别是中国、美国和波兰。这三个国家苹果产区的气候条件非常适合多种苹果的生长。市售苹果汁经由过滤、巴氏消毒以及真空包装等工序加工而成，口味独特、气味芳香、保质期长。棒曲霉素来源于青霉素霉菌，包装产品要求尽量避免棒曲霉素的产生，其含量被控制在10 ng/g 以内[1]。在果汁生产过程中对棒曲霉素的检测方法有很多，包括 HPLC/UV 方法、GC 方法以及 GC/MS方法，这些方法有些需要衍生，有些无需衍生[2，3]。尽管这些方法都经济可靠，但如何分离棒曲霉素与 HMF对于反相 HPLC方法来说还是一个难题。不过，可以通过LC/MS/MS方法来验证两者是否成功分离[4]。在鲜苹果汁的生产过程中，因为加工步骤的关系，果汁中会含有果胶，果胶能够降低血清胆固醇从而增加果汁的健康价值。然而，这种简化的加工方法加大了保质期缩短的风险，棒曲霉素产生的可能性也将显著提高[5]。 材料与方法 将 Agilent 7890A GC 与配备有惰性 El 350°C无涂层离子源的Agilent 5975C 质谱仪联用。Agilent J&W DB-35ms UI 色谱柱安装在多模式进样口(MMI)上，采用冷-不分流模式以获取最佳样品传输。棒曲霉素以及 HMF 购自 Sigma-Aldrich公司，浓度为100 pg/mL(由曲霉素)或纯品(HMF)。 ( 分析条件 ) GC ( 色谱柱： Agilent J&W DB-35ms UI， 30 m x0. 2 5 mm， 0.25 pm (部件号122-3832UI) ) 温度： 300C GC： Agilent 7890A GC 进样器： Agilent 7693 自动液体进样器，进样体积1 pL MS 溶剂延迟： 6 minMS温度：SIM模式：时间为100 ms(*定量离子)安捷伦消耗品(除非另外说明) MS： Agilent 5975C 系列 MSD， 配备情性 El350离子源，三轴检测器300°℃(离子源)，150°℃(四极杆)质量数：55.00，97.00*，110.00*，126.00，每个质量数驻留 ( 干燥管： 15 mL 锥底螺旋盖 Pyrex离心管，带刻 度 (Sigma-Aldrich 公司，产品目录号 CLS808215-12EA)样品瓶： 棕色螺口盖(部件号5182-0716)瓶盖： 蓝色螺口盖(部件号5282-0723)进样口衬管： 超高惰性不分流单细径锥衬管(部件号5190-3162) ) 标样 将乙酸乙乙作为溶剂，配置浓度范围10~1000 ng/g 的棒曲霉素和HMF混合标准溶液，用于测定线性和检测限。将购买的苹果汁和苹果酒冷藏保存。在初步筛选后，使用空白提取物做稀释溶剂来制备与样品基质相匹配的校准组。 ( 样品制备 ) ( 1. 称取 10g(10 mL)的苹果汁或苹果酒置于洁净的容器中。 ) ( 2. 向样品中添加10 ng/g (10 ppb) 的标样用以测定标样在果汁 中的回收率。 ) ( 3. 依次用4mL甲醇、4 mL HPLC 级的去离子水平衡 SPE 管。 ) 4. 向经过预平衡的 SPE 柱加 10mL样品，让样品自然流出(根据样品的澄清度，苹果酒可能需要稍微抽一下真空)。 5. 在常压下用8 mL 1%的碳酸氢钠水溶液淋洗柱子。 6. 在常压下用 8 mL 1%的醋酸水溶液淋洗柱子。 7. 用收集管替换废液管。 8. 在常压下用 8 mL HPLC级的甲醇进行洗脱。 9. 用温水浴干燥洗脱液来除去甲醇，干燥至余下大约4 mL的水溶液。 10.用3mL乙酸乙酯对洗脱液进行液/液萃取(3次)，合并萃取液并收集于锥形管中待干燥。 ( 11.将乙酸乙酯萃取液干燥至1mL， 转移至自动进样瓶中待进样。 ) 结果与讨论 图1是10 ng/g HMF与棒曲霉素混合物的全扫描色谱图。峰形理想、基质背景干扰少。 图1.10 ng/g HMF与棒曲霉素混合物的全扫描色谱图，峰形理想，与基质组分的分离度良好 加标样品的回收率大于90%， 说明 Bond Elut LMS SPE 可用于低浓度样品的分离。萃取步骤将会去除果汁中所含有的10%的糖类物质，因为它们会在短时间内污染进样器，使得进样口的维护频率增加。被去除的还有大量维生素C， 因为它会与 HMF一起洗脱出来，干扰色谱峰的积分。-一些高沸点的溶质，如，多酚类物质会被一同萃取出来。这些高沸点物质会在进样口积聚，在最高允许温度下烘烤一段时间可被去除。本方法可以分离苯甲醛，它是一种苹果种子腐烂时会产生的一种标志性化合物。尽管拖尾比较多， MMI模式下的峰对称性仍可与冷柱头进样模式下的峰对称性相媲美。 结论 ( 在使用Bond Elut LMS萃取柱以及液/液萃取制备样品之后， Agilent J&W DB-35ms 超高惰性色谱柱可以很好地分离棒曲霉素 和羟甲基糠醛。如果样品量很大，进一步的优化和自动化萃取步骤可以节省大量时间。 ) ( 参考文献 ) ( 1. M. L lovera. J. Food Prot.62，202 ( 1999). ) ( 2. M. W.Trucksess. J. AOAC Int. 82，1109(1999). ) ( 3. A. Moukasa. J. Food Chem. 109，860 (2008). ) ( 4. H. B. Christensen. Food Addit. C ontam.A. 26， 10 1 3 (2009).5. K. Harris. J . Food Prot. 72， 1255 (2009). ) 更多信息 这些数据仅代表典型结果。有关我们的产品和服务的详细信息，请访问我们的网站： www.agilent.com/chem/cn. www.agilent.com/chem/cn 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本资料中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 C安捷伦科技(中国)有限公司，2013 ( 中国印制 ) 2013年7月12日 5991-2799CHCN Agilent Technologies 随着苹果生长期的延长以及苹果和苹果浓缩汁出口能力的提高，它们摄入污染产品的可能性也随之增加。棒曲霉素是一种真菌霉素，在苹果腐烂过程中产生，本文描述了一种采用安捷伦超高惰性色谱柱检测棒曲霉素的方法，该方法无需样品衍生化。该色谱分析方法可以分离5 - 羟甲级糠醛(HMF) —— 一种由苹果产品中的糖在过度加热时生成的产物。使用聚苯乙烯- 二乙烯苯SPE 柱执行固相萃取，然后在注入GC/MS 系统检测前用乙酸乙酯进行液/液萃取，完成样品制备。