牛奶中多拉菌素检测方案(液相色谱仪)

使用固相萃取结合高效液相色谱-荧光检测法对牛奶中阿维菌素类药物进行多残留测定 应用简讯食品检测 作者 前言 吴翠玲，屈龙，黄悯嘉 安捷伦科技(中国)有限公司 北京五洲东方科技发展有限公司 兽药在治疗或防止动物疾病、促进动物生长、提高饲料效果等方面起着十分重要的作用，被广泛地用于畜牧业中。然而，由于养殖人员对科学知识的缺乏以及一味地追求经济利益，致使滥用兽药现象在当前畜牧业中普遍存在。滥用兽药极易造成肉、蛋、奶等动物源食品中有害物质的残留，这些药物残留给人的健康带来潜在的危害，包括过敏反应，直接中毒效应，以及对抗生素产生抗药性等。 阿维菌素 (Avermectin)、伊维菌素 (lvermectin)、埃普利诺菌素 (Eprinomectin) 和多拉菌素 (Doramectin) 是一类具有杀虫、杀螨、杀线虫活性的十六元大环内酯化合物，是一类被广泛使用的农用或兽用杀虫、杀螨剂。本文所述方法参照食品安全国家家准GB 29696-2013，建立了牛奶中这四种阿维菌素类药物多残留分析的高效液相色谱法。 样品前处理过程 称取试料(5+0.05) g于50mL离心管中，加乙腈8 mL， 涡旋混合1 min， 超声 1min，4500 r/ min 离心10 min， 取上清液于另一50mL离心管中。残渣中加乙腈8mL， 重复提取一次，合并两次上清液，加水 20 mL、三乙胺 50pL， 混匀，待固相萃取净化，固相萃取操作流程见下图1。 *洗涤液：取乙腈30 mL、水 70 mL 和三乙胺 20pL， 混匀。 图1.固相萃取操作流程图 于待衍生的离心管中依次加衍生化试剂A (N-甲基咪唑：乙腈=1：1) 100pL， 加盖密闭，涡旋混匀10s， 再加入衍生化试剂B(三氟 乙酸酐：乙腈=1：2) 150pL， 依次加冰醋酸50 pL 和三乙胺50pL， 涡旋混匀10 s， 于室温密闭反应 30 min，加甲醇650pL混匀。 过滤，供高效液相色谱法测定，色谱条件见表1。 本文所述固相萃取结合高效液相色谱-荧光检测法可实现对奶产品中阿维菌素、伊维菌素、埃普利诺菌素和多拉菌素的基线分离和检测，方法法出限为1pg/kg， 定量限为 2 pg/kg。对比阿维菌素类药物标准样品与牛奶空白基质的色谱叠加图(图2)可以看出， 在空白基质色谱图中阿维菌素类药物的出峰位置处无杂峰干扰，表明本文所用 Agilent Bond Elut C18 固相萃取小柱的净化效果优异，可有效去除大部分干扰杂质。 表1 液相色谱条件 液相色谱系统 Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统 检测器 荧光检测器(FLD) 色谱柱 Agilent Poroshell 120 EC-C18柱， 4.6X100 mm， 2.7 pm 流动相 A： 水 B：乙清 流速 1.5 mL/min 进样量 20 pL 柱温 40°C 运行时间 14min 梯度 时间 (min) %B 0 90 12 90 12.1 100 14 100 后运行时间 3 min 激发波长 365 nm 如图3所所，在线性范围5-1000 ng/mL 内埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素的线性相关性良好。在添加水平2-40 pg/kg 下， 牛奶中各阿维菌素类药物的加标回收率为90.43%-102.79%， RSD ≤ 8% (n=3)，如表2所示。牛奶中各阿维菌素类药物添加水平 10 pg/kg时，连续进样6次，所得色谱叠加图如图4所示。其中埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素的峰面积RSD 值分别为0.20%、0.17%、0.29%和0.82%，结果表现出极高的重复性。 图 2.50 ng/mL 阿维菌素类药物标准样品(蓝色)与牛奶空白基质(红色)的色谱叠加图 埃普利诺菌素 图3.埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素的标准曲线 表2.牛奶基质中各阿维菌素类药物的加标回收率 添加水平 2 pg/kg(n=3) 10 pg/kg (n=3) 40 pg/kg (n=3) 平均回收率 RSD 平均回收率 RSD 平均回收率 RSD 化合物名称 (%) (%) (%) (%) (%) (%) 埃普利诺菌素 90.43 7.1 99.76 2.49 95.77 2.94 阿维菌素 96.11 5.57 99.32 4.82 102.64 1.53 多拉菌素 95.86 6.35 99.03 4.68 102.79 1.78 伊维菌素 101.83 5.89 98.77 4.91 101.49 1.92 图4.牛奶中添加 10 pg/kg 阿维菌素类药物的样品连续进样(n=6)所得色谱叠加图 综上所述，本文所述方法利用 Agilent Bond Elut C18固相萃取小柱对样品进行净化，并利用安捷伦专利的 Poroshell 120 EC-C18快速柱对目标物进行快速分析，方法检出限、定量限、准确度和精密度均满足 GB 29696-2013 的分析要求。 耗材订购信息 ( Agilent 可控针阀：部件号12131005 ) Agilent Vac Elut 20 固相萃取装置：部件号12234103 Agilent Bond Elut C18 固相萃取小柱： 500 mg， 6 mL， 30/pk，部件号12102052 Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱：4.6X100mm， 2.7 pm，部件号695975-902 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com.cn 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 @安捷伦科技(中国)有限公司，2016 2016年02月02日，中国印刷 5991-6668CHCN Agilent Technologies 兽药在治疗或防止动物疾病、促进动物生长、提高饲料效果等方面起着十分重要的作用，被广泛地用于畜牧业中。然而，由于养殖人员对科学知识的缺乏以及一味地追求经济利益，致使滥用兽药现象在当前畜牧业中普遍存在。滥用兽药极易造成肉、蛋、奶等动物源食品中有害物质的残留，这些药物残留给人的健康带来潜在的危害，包括过敏反应，直接中毒效应，以及对抗生素产生抗药性等。阿维菌素 (Avermectin)、伊维菌素 (Ivermectin)、埃普利诺菌素 (Eprinomectin) 和多拉菌素 (Doramectin) 是一类具有杀虫、杀螨、杀线虫活性的十六元大环内酯化合物，是一类被广泛使用的农用或兽用杀虫、杀螨剂。本文所述方法参照食品安全国家标准 GB 29696-2013，建立了牛奶中这四种阿维菌素类药物多残留分析的高效液相色谱法。