山楂卷中展青霉素检测方案(制备液相色谱)

博纳艾杰尔产品应用案例 山楂卷中展青霉素的分析方法 AF10198应用及技术服务部 摘要：本实验根据 GB 5009.185-2016 建立了山楂卷中展青霉素的前处理方法，采用 Cleanert PAX结合高效液相色谱的检测方法，对山楂卷中的展青霉素进行了测定。样品经提取和酶解处理后，用Cleanert@PAX 进行净化， Venusil HLP C18(5 um， 4.6×250mm)色谱柱进行检测，外标法定量。结果表明，当展青霉素加标量为 0.1 mg/kg时，回收率为105.6%，能够满足检测要求。 关键词：山楂卷；展青霉素； CleanertPAX；： Venusil HLP C18 样品信息 表1.展青霉素样品信息 样品名称 英文名 结构式 分子式 分子量 CAS编号 0H 展青霉素 patulin O =0 C7H6O4 154.1 149-29-1 实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 高效液相色谱仪。 试剂材料 甲醇、乙腈、乙酸乙酯均为色谱纯；；乙酸、乙酸铵为分析纯； 5 mmol/L乙酸铵溶液：称取0.38g乙酸铵，加水溶解并定容至1000mL；乙酸溶液：取10mL乙酸，加入250mL水中，混匀； 展青霉素标准溶液：：乙腈溶解； 果胶酶：10000U/g； ( Email： cninfo@phenomenex.com 网址： w w w.agela . c om. cn 客服：400-606-8099 ) Cleanert" PAX， 500 mg/6 mL (P/N： AX5006)。 样品制备 样品提取 称取1g已均质好的山楂卷样品，加入10 mL水和 75 uL 果胶酶，涡旋混匀1 min，室温避光放置过夜后，加入10mL乙酸乙酯，涡旋混合2 min， 6000 r/min 离心5 min，取上层乙酸乙酯层至100 mL鸡心瓶中。剩余水相再加入10 mL 乙酸乙酯提取一次，合并两次乙酸乙酯提取液，在40℃旋蒸至干，以5mL 乙酸溶液溶解残留物，超声1min，待净化。 样品净化 将 Cleanert PAX 小柱依次用6 mL甲醇，6mL水活化平衡，将待净化液全部转移至小柱上，弃去流出液，再用6mL乙酸铵溶液，6mL水淋洗小柱，弃去流出液并抽干小柱15 min。加入8mL甲醇洗脱，收集流出液置于40℃氮吹至剩余200~300 uL，用5%乙腈水溶液定容至1mL，涡旋 30 s溶解残留物，过 0.22 um 尼龙针式过滤器过滤，待检测。 实验条件 色谱条件 色谱柱： VenusilHLP C18， 5 um， 4.6×250 mm； 柱温：40℃； 流速：1.2mL/min； 进样量：100uL； 波长：276nm 梯度条件：见表1。 表1.梯度条件 时间/min A% B% 0 95 5 20 95 5 20.1 0 100 25 0 100 ( 地址： 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： cninfo@phenomenex.com 网址： w w w .agela . c om. c n 客服：400-606-8099 ) 25.1 95 5 35 95 5 实验结果与讨论 实验结果 由表2可知，采用 Cleanert PAX 结合高效液相色谱的方法检测山楂卷中展青霉素，加标回收率为105.6%，能够满足检测要求。由图1~图3可知，用Venusil HLP C18检测山楂卷的加标样品，分离效果良好。 表2.山楂卷展青霉素加标回收实验结果(n=3，添加水平 0.1 mg/kg) 物质名称 平均回收率/% RSD/% 保留时间/min 展青霉素 105.6 5.0 5.233 Patulin 实验讨论 本实验参照国标方法用 PAX 150 mg/6 mL 做山楂制品中的展青霉素，经标样过柱发现此规格的小柱使用国标方法，仅能吸附50%的目标物，故加大小柱规格至500 mg/6mL，回收率能够满足检测要求。 本实验采用高效液相色谱检测，由于山楂制品的杂质较多，普通的 C18色谱柱对杂质和目标物的分离并不理想，后改用极性嵌合的 HLP C18色谱柱，发现分离度有很大改善，目标物能和杂质分离。但国标中山楂制品是用 LC-MS/MS 检测的，所以本报告中的检测方法仅供参考，也可以按照国按的方法使用 LC-MS/MS 检测。 实验谱图 图1.0.1 ug/mL 展青霉素标准溶液色谱图 图2.山楂卷基质空白色谱图 图3.0.1 mg/kg 山楂卷基质加标色谱图 结论 本实验建立了山楂卷中展青霉素的前处理方法，用 Cleanert@ PAX 结合高效液相色谱对加标量为 0.1 mg/kg 的样品进行了测定，加标回收率为105.6%， RSD 小于10%，可以满足检测要求，且净化效果良好，方法稳定。说明 Cleanert PAX 可以用于山楂卷中展青霉素的检测。 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Cleanert PAX 500 mg/6 mL 30支/包 AX5006 Venusil HLP C18 5 um， 4.6×250 mm 1支 VHP952505-0 保护柱套 适用于4.6×10 mm和2.1 ×10 mm 1支 SH-100 直联式保护柱芯 5 um， 4.6×10 mm 4支/包 VHP950105-0S 1.5 mL 样品瓶 短螺纹棕色带书写处32×11.6 mm 100/pk AV1111-0 1.5 mL 样品瓶盖 9mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE 隔垫 45° Shore A； 1.0 mm 100/pk AV2100-A 氮吹仪 15位 1台 NV15-G 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：话： 传真： 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：话： 传真：mail： cninfo@phenomenex.com 网址： www.agela.com.cn 客服： 本实验根据GB 5009.185-2016建立了山楂卷中展青霉素的前处理方法，采用Cleanert® PAX结合高效液相色谱的检测方法，对山楂卷中的展青霉素进行了测定。样品经提取和酶解处理后，用Cleanert® PAX进行净化，Venusil HLP C18(5 µm，4.6 × 250 mm)色谱柱进行检测，外标法定量。结果表明，当展青霉素加标量为0.1 mg/kg时，回收率为105.6%，能够满足检测要求。