呋喃唑酮中药物残留检测方案(液质联用仪)

thermoscientific热线8008105118电话4006505118www.thermofisher.com 全新一代三重四极杆液质联用仪TSQ Quantis针对硝基呋喃类药物残留检测中的应用 吕辰 王伟 郭藤 高梦婕 赛默飞世尔科技(中国)有限公司，上海201206 摘要 本文在赛默飞全新液相色谱串联三重四极杆质谱 TSQQuantis 平台针对国标 GB/T 21311-2007《动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物建立了快速检测方法》建立了快速检测方法。4种硝基呋喃类代谢物在其适宜的浓度范围内线性关系良好(r>0.99)， LOD 及 LOQ均能满足国标规定的检测要求，运用本方法对动物源性食品中硝基呋喃类药物残留检测具有深远的指导意义。 关键词 硝基呋喃，TSQ Quantis，药物残留 1.引言 硝基呋喃类代谢物属于一种人工合成的广谱抗菌药物，它 主要包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃它酮等。 硝基呋喃类由于具有杀菌性而被广泛应用于畜禽和水产等动物传染病预防与治疗。该类药物半衰期短，在动物体内代谢速度快，与蛋白结合的代谢物产生稳定的残留，形成的代谢产物3-氨基2-噁唑烷酮(AOZ)、3-氨基5-吗咻代甲基2-噁唑烷酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)、1-氨基乙内酰脲(AHD)均可使动物发生癌变和基因突变，人类长期使用可对其健康产生危害。 本文建立了基于 Thermo Fisher Scientific TSQ Quantis 三重四极杆串联质谱仪针对硝基呋喃类药物的检测方法。本方法灵敏度高，稳定性好，远远满足国标 GB/T 21311-2007《动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物建立了快速检测方法》中所规定的检测要求，，可为食品安全监控提供有效技术支持。 2.实验部分 2.1仪器与试剂 ( 2.1.1 T hermo F isher Vanquish Binary Horizon 超高效液相 色谱仪 ) ( 2.1.2 Thermo Fisher TSQ Quantis三重四极杆质谱仪 ) ( 2.1.3 甲醇(色谱纯，美国 Thermo Fisher公司)； 实验用水为Mill i -Q去离子水；甲酸铵(色谱纯， SIGMA) ) ( 2. 1 .4 硝基呋喃类4种代谢物标准品均购自德国Dr.Ehrenstrofer公司 ) 2.2化合物信息及溶液配制 2.4质谱条件 2.2.1 4种硝基呋喃类药物代谢物信息(表1) 表1.化合物信息 Table1. Compounds information 可加热电喷雾电离源(HESI)，正离子扫描模式；扫描方式：SRM；喷雾电压(+)：3700V；离子传输管温度：250℃；鞘气压力 30 arb； 辅助气压力 3 arb； 离子源温度：385℃；碰撞气压力：2mTorr； 选择反应监离离子对信息见表3。 化合物信息表 中文名 英文名 CAS 分子式 分子量 呋喃唑酮 2-NP-AOZ 19687-73-1 C10HgN304 235.06 呋喃妥因 2-NP-AHD 623145-57-3 C10HgN404 248.05 呋喃西林 2-NP-SCA 16004-43-6 CgHgN4O： 208.06 呋喃它酮 2-NP-AMOZ 183193-59-1 C15H18N405 334.13 表3.4种化合物及质谱采集参数 Table 3 MS/MS parameters of 4 compounds 2.2.2 储备液：分分精精称取10mg(0.01)标准品粉末，溶解于10mL甲醇中 2.2.3 系列标准曲线：以50：50甲醇水作为溶剂，稀释成系列标准曲线 0.001 ng/mL-100 ng/mL 2.3色谱条件 色谱柱： Thermo Hypersil GOLD VANQUISH(1.9 um，50x2.1mm)； 化合物 母离子 RF Lens 电压 子离子 碰撞能量 (m/z) (V) (m/z) (V) 2-NP-AMOZ 236.01 136 133.98* 13 104 21 2-NP-AHD 249.01 142 133.98* 12 103.97 21 2-NP-SCA 209.01 110 191.98* 12 166.05 10 2-NP-AMOZ 335.06 135 291.05* 12 262.12 17 柱温：40℃； 注：带*的为定量子离子 进样量： 5uL； 流动相：A为水(含2 mmol/L HCOONHA)，B为甲醇，梯度洗脱程序(表2) 3.实验结果与讨论 3.1灵敏度测试 表2.梯度洗脱程序 Table 2 Gradient Elution Program 采用上述仪器分析方法，4种硝基呋喃类代谢物在5分钟内均可获得良好的色谱峰，图1为4种硝基呋喃类代谢物在LOQ (50 pg/mL)处的选择离子流提取图，各化合物灵敏度测试结果见表4。 时间 A B 流速 0.00 80 20 0.25 0.50 40 60 0.25 1.50 5 95 0.25 3.00 15 95 0.25 4.50 80 20 0.25 5.00 80 20 0.25 NL：5.78E2 RT：2.41 m/z=191.48-192.48 F： +c ESI SRMms2 AA：954 209.012[166.053-166.055， 100- SCA SN： 32 191.987-191.989] MS ICIS 50ppt_01 0 cc0丫 RT：2.35 NL：3.13E3 AA： 10445 m/z=133.48-134.48 F：+c ESI SRM ms2 AOZ SN： 208 236.012[103.999-104.001， 100 133.987-133.989] MS ICIS 50ppt_01 0 RT： 2.30 NL：1.54E2 AA： 599 m/z=133.47-134.47 F：+c ESI SRM ms2 SN： 137 249.012[103.969-103.971， 100- AHD 133.969-133.971] MS ICIS 50ppt_01 RT： 2.60 AA： 14135 SN： 511 100- NL：3.52E3m/z=290.55-291.55 F：+c ESI SRM ms2335.062[262.124-262.126，291.053-291.055] MS ICIS 50ppt_013 AMOZ 0 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 Time (min) 图1.4种化合物的色谱图(LOQ 50 pg/mL) Fig.1 ElC Chromatogram of 4 Compounds (LOQ 50 pg/mL) 3.2线性范围测试 采用上述仪器分析方法，对4种硝基呋喃类代谢物进行线性范围测试，线性相关系数r?均大于0.99，线性关系良好。4种硝基呋喃类代谢物线性范围、线性相关系数、LOD(S/N>3) 及 LOQ(S/N>10)结果见表4，化合物线性方程图见图2. 3.3相对标准偏差 RSD 性能展示 采用上述仪器分析方法，对4种硝基呋喃类代谢物进行相对标准偏差测试(1ng/mLn=20)，实验结果证明4种硝基呋喃类代谢物相对标准偏差 RSD%均小于5%(见表4) 表4.4种化合物的线性范围、线性相关系数及 LOD、LOQ、RSD Table 4 Linear Ranges， correlation coefficients， LOD， LOQ， RSD of 4 compounds 化合物 线性范围 相关系数 LOD LOQ RSD% (ng/mL) (r) (pg/mL) (pg/mL) (n=20) 2-NP-SCA 0.05-100 0.9914 10 50 4.39 2-NP-AOZ 0.01-100 0.9996 5 50 2.09 2-NP-AHD 0.01-100 0.9911 5 50 3.17 2-NP-AMOZ 0.005-100 0.9997 1 50 2.14 2-NP-AOZ 2-NP-AHD ( 本文建立了三重四 极 杆液质联用仪(TSQ Quantis)分析4 种硝基呋喃类代谢物的检测方法。由实验结果可以看出， ) 基于 Thermo Fisher TSQ Quantis 建立的检测方法不仅具有优异的灵敏度和线性范围，同时具备优异的重现性。本方法可用于硝基呋喃类药物的日常分析检测。 本 文 在 赛 默 飞 全 新 液 相 色 谱 串 联 三 重 四 极 杆 质 谱 TSQ Quantis 平台针对国标 GB/T 21311-2007《动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物建立了快速检测方法》建立了快速检测方法。4 种硝基呋喃类代谢物在其适宜的浓度范围内线性关系良好（r2>0.99），LOD 及 LOQ 均能满足国标规定的检测要求，运用本方法对动物源性食品中硝基呋喃类药物残留检测具有深远的指导意义。硝基呋喃类代谢物属于一种人工合成的广谱抗菌药物，它主要包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃它酮等。硝基呋喃类由于具有杀菌性而被广泛应用于畜禽和水产等动物传染病预防与治疗。该类药物半衰期短，在动物体内代谢速度快，与蛋白结合的代谢物产生稳定的残留，形成的代谢产物 3-氨基 2-噁唑烷酮（AOZ）、3-氨基 5-吗咻代甲基 2-噁唑烷酮（AMOZ）、氨基脲（SEM）、1-氨基乙内酰脲（AHD）均可使动物发生癌变和基因突变，人类长期使用可对其健康产生危害。本文建立了三重四极杆液质联用仪（TSQ Quantis）分析 4种硝基呋喃类代谢物的检测方法。由实验结果可以看出，基于 Thermo Fisher TSQ Quantis 建立的检测方法不仅具有优异的灵敏度和线性范围，同时具备优异的重现性。本方法可用于硝基呋喃类药物的日常分析检测