配方奶粉中核苷酸检测方案(离子色谱仪)

科捷仪器KEJIEINSTRUMENT电话：139-5161-2855网址： www.kj17.com 离子色谱法测定婴幼儿配方奶粉中的核苷酸 核苷酸是构成核酸的成分，碱基与糖通过糖苷键连成核苷，核苷与磷酸以酯键连成核苷酸。目前婴幼儿配方奶粉中作为添加剂的核苷酸主要有5中：胞嘧啶核苷酸(CMP)、腺嘌呤核苷酸(AMP)、尿嘧啶核苷酸(UMP)、次黄嘌呤核苷酸(IMP)、鸟嘌呤核苷酸(GMP)。其主要生理功能是广泛参与人体的能量代谢、蛋白质合成，具有提高各种酶的活性、活活细胞功能、促进抗体形成、增强免疫功能的作用。它们可促进神经细胞的生长发育，是与“神经生长因子”有关或者可以作为神经生长物质利用的营养成分。，一些临床上的研究发现，添加核苷酸的婴儿配方奶粉可减少腹泻的发生及促进较小胎儿的生长发育。 牛奶中一般不含有核苷酸，但由于核苷酸对婴幼儿的特殊功效，许多奶制品企业都把核苷酸作为重要添加剂。但人体对核苷酸的需求有一定的限度，并非越多越好。为此对婴幼儿奶粉产品中核苷酸的质量监控极为重要，必须尽快研究制定适用于乳制品的检测方法。目前报道的检测方法主要有比色法、离子交换色谱法、毛细管电泳法、液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等。比色法应用较早，但需要排除干扰、操作繁琐。离子交换色谱法、毛细管电泳法测定结果重现性不佳。液相色谱多用离子对反相色谱法进行测定，但离子对反相色谱法对胞嘧啶核苷的保留很弱，且牛奶样品成分复杂，测试过程中容易产生假阳性；液相色谱-质谱联用法的仪器价格昂贵。 离子色谱法是分析无机阴、阳离子的高效分离测试技术，，可以同时将常见阴离子、有机酸进行分离，具有简单、快速、灵敏度高等特点。而核苷酸在水溶液中离解为离子态，因此可以采用 IC 进行测定。近年来，采用IC分析生物分子的应用研究渐有报道，但涉及婴儿奶粉中5种核苷酸的研究还未见报道。为此，本文建立了运用 IC 同时测定婴儿奶粉中5中核苷酸的方法。 仪器准备 仪器简介 IC-700 型离子色谱仪采用与 WATERS 液相相同的并联泵输液方式，工作耐压值高，脉动小、稳定可靠。进样器与整机分体式模式，具有良好的抗干扰性和可拓展性。接头、流路均使用进口 Peek材料，耐强酸强碱。连续自动再生电化学抑制器，抑制容量高。高分辨率触摸屏配有 WinCE操作系统，以及全中/英文显示的数据处理系统。 南京科捷分析仪器有限公司 QQ：2326515893 样品处理： 准确称取奶粉样品 4.0g， 加入20mL水(水温75℃)，振荡超声使其溶解均匀，放冷，加入3.0mL5%(体积分数 下同)乙酸，混匀，沉淀蛋白质；加水定容至50mL， 离心，取上清液、经反相C18 预处理小柱与 0.22um滤膜过滤后，滤液供IC 分析。 色谱条件： 色谱柱 IonPac AG16 保护柱， IonPac AS16分离柱 流动相 KOH溶液，梯度淋洗，梯度洗脱程序：0-12min， 12mmol/L；12-22min， 由12mmol/L线性增加至55mmol/L； 22-28min，55mmol/L；28-28.10min， 由55mmol/L线性降低至12mmol/L；28.1-33min， 12mmol/L，恢复至平衡状态，流速1.0ml/min 检测波长 260nm 柱温 25℃ 进样量 25u1 测定结果 图1 5种核苷酸混合标准溶液(5mg/L)的色谱图 Fig.1 Chromatogram of a mixed solution of thefive nucleotide standards (5mg/L 1. CMP； 2. AMP； 3. UMP； 4. IMP； 5. GMP. 传真： 传真：南京科捷分析仪器有限公司QQ： 牛奶中一般不含有核苷酸，但由于核苷酸对婴幼儿的特殊功效，许多奶制品企业都把核苷酸作为重要添加剂。但人体对核苷酸的需求有一定的限度，并非越多越好。为此对婴幼儿奶粉产品中核苷酸的质量监控极为重要，必须尽快研究制定适用于乳制品的检测方法