橄榄样品中农药残留检测方案(气相色谱仪)

作者 摘要 A. Moreno Lopez， L. Moreno Lopez 相J.L. Pineda LucasLaboratorio Quimico MicrobiologicoS.A. 西班牙塞维利亚 Joan Stevens 安捷伦科技有限公司 应用 GC/MS/MS对橄榄样品进行农药多残留分析 应用简报 食品检测和农业 本文将介绍一种测定橄榄中27种农残的分析方法。橄榄中脂类含量高达 80%到85%，这会对农残的回收率和色谱系统造成不利影响。因此，本研究采用一种改进的QuEChERS 方法进行样品提取，并结合气相色谱/三重四极杆质谱 (GC/MS/MS)的多反应监测方法进行分析。该方法在橄榄样品的回收率、重复性和重现性等方面已得到验证。结果表明，方法的定量回收率介于 70%-120%之间，符合 SANCO/12571 [1]所推荐的可接受范围，RSD<20%。方法的农残定量限与法规允许的最大残留限值相当甚至更低。 前言 农残分析对于人和动物健康、进出口贸易以及法规监管来说都是十分必要的。农业生产中使用了多种农药，而且大多数农药都有相应的法规监管，如GC/MS或 LC/MS/MS分析测定的食品中的最大残留限值 (MRL) [2]. 气相色谱与质谱联用的分析方法以选择离子监测 (SIM)为基础，具有相当高的灵敏度，但同时也降低潜在的识别能力和非目标物分析/回顾性分析的性能。使用 GC/MS/MS测定食品中适用于 GC分析的农药是近十年来兴起的一种有价值的方法，该方法具有更高的选择性和灵敏度，几乎将大部分的色谱干扰降至最低甚至完全消除[3]。虽然 GC/MS/MS的灵敏度和选择性有了很大的提高，但是共萃取的基质成分还是会产生基质效应，对分析结果造成负面影响。本研究使用一种优化的样品前处理方法，可将此不利影响降至最低。 材料与方法 使用一种改进的EN萃取方法，来提取橄榄中的27种农残。如EN 15662 [4]中所述，这种溶剂改进型的方法包含了非极性和极性非质子混合溶剂(乙酸乙酯：环己烷：丙酮)和极性非质子溶剂(乙腈)，可用于萃取橄榄中高脂基质内的农残成分。与仅使用极性非质子溶剂 CAN相比，使用非极性和极性非质子混合溶剂能够为可萃取化合物提供更广泛的极性范围。本文研究的农药包括有机氯、有机磷和拟除虫菊酯农药。 ( 仪器与耗材 ) ( Agilent Bond Elut QuEChERS EN 萃取试剂盒 (部件号 5982-5650) ) 农药 氯苯胺灵 11.05 庚烯磷 9.737 甲基嘧啶磷 18.307 六氯苯 12.377 地虫磷 13.889 西玛津 12.909 特丁磷 13.796 特丁津 13.810 二嗪农 14.466 抗蚜威 15.677 甲基毒死蜱 16.59 丙酯杀螨醇 25.419 甲基对硫磷 16.594 联苯菊酯 28.839 杀螟松 18.072 对硫磷 19.275 二甲基敌草索 19.433 毒虫畏 21.557 二甲戊乐灵 20.991 o-硫丹 22.637 腐霉利 21.962 B-硫丹 25.3158 硫丹硫酸酯 26.76 氟丙菊酯 30.724 艾试剂 18.528 毒死蜱 19.234 隔垫吹扫： 开启，3mL/min 分流出口吹扫流速： 100 mL/min (0.75 min 时) 进样： 不分流进样， 1.0 pL RTL化合物： 甲基毒死蜱 质谱条件 离子源： EPC 离子源温度： 280°C 碰撞气体： 氦气淬灭气体，开启， 2.35 mL/min氮气碰撞气体，开启， 1.5 mL/min传输线温度：280°CMS 四极杆1，2温度：两者均为150°℃MS1/MS2分辨率：宽/宽 MRM设置： 见表1 表1.27种农残分析的保留时间和 MRM参数 表2列出了时间间隔。MS1 和 MS2的分辨率全程均为宽/宽。驻留时间 10 ms。 表2.时间间隔 化合物 母离子 子离子 碰撞能量 化合物 母离子 子离子 碰撞能量 时间间隔17 氟丙菊酯 289 93 5 氟丙菊酯 208 5 样品前处理 橄榄摘自当地橄榄树。将橄榄切成薄片，称量部分(约1g)用于分析，剩余的冷冻保存。如果有橄榄核，将其剔除，并计算最终样品中橄榄核的百分含量。这是一项关于 LMR 计算的法规要求。取有代表性的橄榄样品(2或3整片)对橄榄核比重进行估算，方法如下：首先，称取含有橄榄核的代表性样品。然后，易除橄榄核并称量。最后，根据公式1计算橄榄核的百分含量。 式中： %H=橄榄核的百分含量 步骤 1.称取10.0g±0.1g的切片样品放入50mL离心管中 ( 2. 加入10 mL乙酸乙酯：环己烷：丙酮 (1：1：4) 的混合溶剂，盖上 离心管，振摇至少1 m in。 ) ( 3. 向样品管中加入Bond Elut QuEChERS 萃取盐包(部件号 5982-5650)， 振摇 1 min ) 4. 以4000 rpm 的转速离心5 min ( 5. 移取6mL 上层有机相到15 mL Bond Elut分散管(部件号 5982-5156)中，分散管中已事先加入300 mg C18EC (部件 号5982-8082) ) ( 6. 振摇至少 1 min， 然后以 4000 rpm 的转速离心5 min ) ( 7. 移取1到2mL上层有机相到色谱样品瓶中，加盖密封 ) 结果与讨论 所有目标农残均在 HP-5ms 超高生性相相色谱柱上实现了完美的分离和检测。由于 LC/MS/MS具有强大的选择性，空白基质的 MRM 色谱图中未显示目标分析物的干扰峰。图1所示为经改进的 EN QuEChERS 方法制备的 20 pg/kg 加标橄榄提取液的GC/MS/MS谱图。图2表明橄榄和橄榄油分析中具有挑战性的农药(如特丁津和毒死蜱)的定量分析结果十分优异。 计算 一旦通过校准曲线得到了样品瓶中农残的浓度，则可以通过公式2计算出样品中的浓度(mg/kg)。 ( 式中： ) C农残=通过校准曲线得到的浓度 (ug/l) W=测试用样品的初始重量，单位为g(10.0g) ( %H=橄榄核的百分质量(如必需) ) ( 最终结果以国际单位(ug/kg)表示。 ) 图1加标 20 pg/kg 橄榄样品中27种农残 MRM离子对的 GC/MS/MS谱图叠加 A Cmitraion Catve e+t- lypa： Linsar ~ Crigin： Ignons - Waight Nans STDaccc ++ 云会A 图2 A)5 pg/kg特丁津， R?=0.9999. B) 5 ug/kg毒死蜱， R2=0.9999 线性和定量限(LOQ) 测试的所有农残的线性校准范围均为5-60 pg/kg。通过向基质空白加标的方法制备校准曲线，浓度分别为5、10、20和60 pg/kg，其中60 pg/kg 至少为上限的120%。利用分析物的相对响应和浓度之间的关系绘制校准曲线。所有农残的定量限均为10 pg/kg，其小于或等于这些农残在水果和蔬菜中的MRL 值。所有化合物的相关系数(R2)均大于0.9999。 表 3 使用 Agilent Bond Elut QuEChERS EN 萃取方法和溶剂改进型分散 SPE 试剂盒(用于含脂肪和蜡质的水果与蔬菜)所得的橄榄中农药的回收率%、(RSD%)和重现性 化合物 L1 L2 L3 4，4'-二氯二苯甲酮 93.94 (7.32) 92.95(7.62) 106.43 (6.28) 氟丙菊酯 101.92(6.66) 95.13(14.01) 105.25(2.00) 艾试剂 90.46(12.86) 90.36(9.60) 100.00(10.52) 联苯菊酯 96.50 (9.12) 95.88 (7.87) 104.29(8.01) 毒死蜱 93.15(4.43) 86.07(14.21) 108.10 (5.53) 二甲基敌草索 98.78 (5.78) 96.05(7.47) 99.96(16.41) 毒虫畏 93.10(6.04) 89.01(11.80) 106.86(6.38) 丙酯杀螨醇 91.24(7.46) 86.68(7.88) 108.70 (5.41) 甲基毒死蜱 100.40(11.72) 92.70(8.63) 110.22(3.23) 氯苯胺灵 98.38(7.30) 91.00(15.89) 105.07 (6.86) 二嗪农 94.11(10.24) 94.68(14.24) 108.81 (5.98) 硫丹(α异构体) 89.13(16.31) 93.97 (11.88) 105.55(5.64) B-硫丹 83.90 (21.05) 93.06(10.03) 98.25(4.41) 硫丹硫酸酯 94.67 (4.76) 93.48 (7.74) 109.58(4.75) 杀螟松 91.48(8.74) 86.33(17.91) 109.38(10.91) 地虫磷 89.55(5.21) 91.06(9.75) 104.63 (7.52) 庚烯磷 97.24(4.02) 93.55(17.02) 101.78(12.40) 六氯苯 95.25 (3.52) 87.10(8.51) 105.62 (7.34) 甲基对硫磷 94.00 (15.54) 85.27(10.50) 104.57 (7.81) 对硫磷 86.26(11.20) 81.57(10.98) 94.98(10.91) 二甲戊乐灵 90.25(12.40) 81.78(7.91) 96.00(4.64) 抗蚜威 84.52(5.09) 76.15(5.43) 89.66 (10.16) 甲基嘧啶磷 93.02(7.29) 85.34(13.69) 106.92 (5.54) 腐霉利 90.75(7.97) 85.04(3.41) 98.88 (7.29) 西玛津 94.12(4.59) 90.17(11.80) 105.81(8.75) 特丁磷 105.06(8.45) 98.92(9.06) 112.62(6.92) 特丁津 97.31 (9.04) 91.66(7.59) 105.34(9.99) L1 5.0(至少为 LO的70%) 10.0 L2 10 L3 20 L4 60(至少为上限的120%) 回收率与重现性 向粉碎的橄榄样品中加入农残标样，加标浓度分别为5、10和20 pg/kg， 然后再通过 EN QuEChERS 萃取法和溶剂改进型净化方法制备样品，以便进行回收率与重现性实验。通过基质加标校准曲线对这些质控样品定量。各浓度水平重复分析5次回收率和重现性(以RSD 表示) 数据见表3，由数据可知，27种农药的回收率和精密度良好。 结论 将 Agilent Bond Elut QuEChERS EN 缓冲萃取试剂盒和分散 SPE试剂盒用于含脂肪和蜡质的水果和蔬菜的农残分析，同时使用改进型的混合溶剂，为橄榄中的代表性农残分析提供了简单、快速、高效的纯化方法。根据加标基质的标准样品来看，所测得的橄榄中多种农药的回收率和重现性均在可接受的范围内。同时，橄榄中的基质效应对目标化合物的定量无干扰。农药的 LOQ值均小于或等于食品中规定的 MRL 值。由于研究中所选择的农药代表了各种不同类别和性质的农药，因此，配有改进型混合溶剂的 Bond Elut QuEChERS EN 萃取和分散 SPE 试剂盒是用于类似食品基质中其他农药分析的极佳选择。 ( 参考文献 ) 1. Anon. Guidance document on analytical quality controland validation procedures for pesticide residues analysisin food and feed.SANCO/12571_2013. EuropeanCommission (2013) ( 2. L. Alder， et al. Mass Spectrom. Rev. 25， 838 (2006) ) 3. F. Hernandez，et al. Anal. Methods 5， 5875 (2003) 4. Anon. Foods of plant origin. Determination of pesticideresidues using GC-MS and/or LC-MS/MS followingacetonitrile extraction/partitioning and clean-up bydispersive SPE. QuEChERS-method. EN 15662. EuropeanStandard 更多信息 这些数据代表典型结果。有关我们的产品和服务的详细信息，请访问我们的网站： www.agilent.com/chem/cn www.agilent.com/chem/cn 安捷伦不对本文可能存在的错误或由于提供、展示或使用本文所造成的间接损失承担任何责任。 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 C 安捷伦科技(中国)有限公司，2014 2014年6月18日，中国印刷 5991-4800CHCN Agilent Technologies Agilent Technologies 摘要本文将介绍一种测定橄榄中27 种农残的分析方法。橄榄中脂类含量高达80% 到85%，这会对农残的回收率和色谱系统造成不利影响。因此， 本研究采用一种改进的 QuEChERS 方法进行样品提取，并结合气相色谱/三重四极杆质谱(GC/MS/MS) 的多反应监测方法进行分析。该方法在橄榄样品的回收率、重复性和重现性等方面已得到验证。结果表明，方法的定量回收率介于70% - 120% 之间，符合SANCO/12571 所推荐的可接受范围，RSD < 20%。方法的农残定量限与法规允许的最大残留限值相当甚至更低。前言农残分析对于人和动物健康、进出口贸易以及法规监管来说都是十分必要的。农业生产中使用了多种农药，而且大多数农药都有相应的法规监管，如GC/MS 或LC/MS/MS 分析测定的食品中的最大残留限值(MRL) 。气相色谱与质谱联用的分析方法以选择离子监测(SIM) 为基础，具有相当高的灵敏度，但同时也降低潜在的识别能力和非目标物分析/回顾性分析的性能。使用GC/MS/MS 测定食品中适用于GC 分析的农药是近十年来兴起的一种有价值的方法，该方法具有更高的选择性和灵敏度，几乎将大部分的色谱干扰降至最低甚至完全消除。虽然GC/MS/MS 的灵敏度和选择性有了很大的提高，但是共萃取的基质成分还是会产生基质效应，对分析结果造成负面影响。本研究使用一种优化的样品前处理方法，可将此不利影响降至最低。结论将Agilent Bond Elut QuEChERS EN 缓冲萃取试剂盒和分散SPE 试剂盒用于含脂肪和蜡质的水果和蔬菜的农残分析，同时使用改进型的混合溶剂，为橄榄中的代表性农残分析提供了简单、快速、高效的纯化方法。根据加标基质的标准样品来看，所测得的橄榄中多种农药的回收率和重现性均在可接受的范围内。同时，橄榄中的基质效应对目标化合物的定量无干扰。农药的LOQ 值均小于或等于食品中规定的MRL 值。由于研究中所选择的农药代表了各种不同类别和性质的农药，因此，配有改进型混合溶剂的Bond Elut QuEChERS EN 萃取和分散SPE 试剂盒是用于类似食品基质中其他农药分析的极佳选择。