新鲜秋葵中农药残留检测方案(气质联用仪)

作者 摘要 Koushik Banerjee 和 Narayan Kamble国家葡萄研究中心 印度农业研究委员会 (ICAR)国家葡萄研究中心国家参考实验室 (NRL)， Pune， Maharashtra K Hari Chandra Prasad 和 Prabakaran R 必维国际检验集团 Chennai， Tamilnadu Chandrasekar Kandaswamy 和 Thierry Faye 安捷伦科技公司 Block C， RMZ Centennial Mahadevapura， Bangalore 采用 QuEChERS 样品前处理技术和气相色谱串联质谱测定新鲜秋葵中的多农药残留 应用简报 食品安全 本应用简报报述了如何使用快速、简便、经济、高效、耐用和安全 (QuEChERS)的 AOAC 样品前处理方法萃取和净化新鲜秋葵中的多农药残留。该 A0AC 方法包括： 在水/乙腈缓冲系统中进行初步萃取 加入盐进行萃取/分离步骤 1使用分散固相萃取(分散式固相萃取)进行净化步骤 Agilent Technologies 待定量的农药是印度农产品和加工食品出口发展局(APEDA)根据其秋葵出口农用化学品控制流程选出[1]。APEDA是印度负责监测残留和出口促进活动的监管机构，对秋葵出口要监控的化合物及其 MRL 限值作出了规定。对适合气相色谱分析的化合物进行分离，!以进行 GC-MS/MS分析。回收率实验的加标浓度为10、25和50ng/g. ( 前言 ) 秋葵 (Abelmoschus esculentus) 又名“美人指”，是一种锦葵科的开花植物。其价值在于可食用的绿色种荚。这种植物栽培于全球范围内的热带、亚热带和暖温带地区。秋葵是热带国家/地区的一种重要蔬菜，深受喀麦隆、加纳、印度、伊拉克、尼日利亚、巴基斯坦、瑞士、阿联酋和美国等地消费者的欢迎。有人认为秋葵起源于非洲，在世界上大多数亚热带和热带地区都有种植。印度、巴基斯坦、伊拉克等都是重要的秋葵种植国家。印度是秋葵产量排名第一的国家，占全球产量的73%。在印度，秋葵主要用作辅食。西非许多地区经常使用粘稠食物为当地的汤类和炖菜增稠。 本应用简报介绍了通过设置样品前处理方法优化秋葵定量分析的农药回收率，同时最大限度减少衬管污染，从而简化常规分析，提高通量。 表1./.100g秋葵中可食用部分的含量 含量 项目 水 90.17g 能量 31 kcal (129kJ) 蛋白质 2.00g 总脂质 0.10g 灰分 0.70 g 碳水化合物 7.03g 总膳食纤维 3.2g 总糖 1.2g 蔗糖 0.40 g 葡萄糖 0.13 g 样品前处理 萃取 去除果柄(植物上附着的小部分)之后，在搅拌机中对新鲜秋葵进行均质化。称取2g样品置于50mL离心管中。加入一粒陶瓷均质子(部件号5982-9313)以提高振荡效率。使用改良的QuEChERS 技术进行样品前处理[2]，加入15mL蒸馏水，让样品静置 30 min 以便水合。加入10 mL含1%乙酸的乙腈，将试管剧烈振荡1分钟。加入硫酸镁(6 g) 和乙酸钠(1.5g)，剧烈振荡1分钟。将管在6000 rpm下离心5分钟。 ( 分散 ) 将 1 mL样品移至含有 50mg N-丙基乙二胺 (PSA)、50 mgC18、7.5 mg石墨化炭黑 (GCB) 和150mg硫酸镁(部件号5982-0028CH) 的2mL分散管中。将管剧烈振荡1分钟，然后以9000 rpm 的速率离心10分钟。 图1.样品前处理流程图 样品分析 在气相色谱方法中，将甲基毒死蜱的保留时间 (RT)锁定至9.14分钟，预设后运行柱中反吹。 柱温箱升温程序、反吹、进样口温度和选择性反应监测(SRM)离子对等仪器参数来自安捷伦农药和环境污染物数据库[4]。 秋葵中的粘液和胶状物实际上是多糖。其可溶于水[3]，因此加入15 mL 水将其除去。秋葵含有的叶绿素、类胡萝卜素和叶黄素等色素不会挥发，进样时会粘附在高温衬管上。分散净化中的石墨化炭黑可吸附这些色素(萃取流程第3步)。 为了选择方法，对所有可用的离子对进行分析，并根据峰形、丰度和离子比选择两个无基质离子对。准确度实验的离子对方法中也使用无基质离子对。图示为50 ppb甲基毒死蜱基质匹配标样及其所有离子对。分别选择Q4和05作为定量离子和定性离子。 图2.数据库中甲基毒死蜱的所有可用 SRM (部件号19091s-431) 色谱柱2 Agilent HP-5MS， 15 m ×0.25 mm， 0.25 pm (部件号19091s-431) 压力控制三通 (PCT) 微板流路控制装置 采用电子气路控制 (EPC)的 自动进样器 Agilent 7693A 进样 2pL冷不分流，多模式进样口(MMI) 衬管 4 mm 带玻璃毛的超高惰性单细径锥衬管 (部件号5180-2293) 进样口温度 70°℃保持0.1 min， 以450°C/min 升至325℃ 升温程序 进样口吹扫流速 1 min 时 50mL/min RTL化合物 甲基毒死蜱锁定至 9.14 RT 载气 氦气 柱温箱程序 60℃保持1 min 以 40°C/ min 升至170℃ 以10°C/min 升至 310°℃， 保持3 min 后运行时间 3.3 min 后运行温度 310°C Agilent 7000 三重四极杆 GC/MS 系统以 MS/MS电子电离(EI)模式运行， 在 SRM 模式下定量。 MS参数 图3. 净化前(A)和分散净化后(B)秋葵样品的乙腈萃取物 仪器校准 农药的秋葵基质质配校准标样采用浓度分别为0.09、0.19、0.39、0.78、1.56、3.13、6.25、、12.5、25、50、100和 200 ng/mL 的秋葵对照溶液配制。每个基质匹配标样还含有浓度为 25 ng/mL 的灭蚊灵内标(IS)。 方法性能 本应用简报所述的样品前处理方法在一项验证研究中进行了评估，该研究对10、25和 50 ng/g 三种不同浓度进行了六次重复分析。 表2.两个无基质 SRM 离子对以及碰撞能量 表2.两个无基质 SRM 离子对以及碰撞能量(续) 表2. 两个无基质 SRM 离子对以及碰撞能量(续) 氯氰菊酯Ⅲ 164.9 127 5 163 127 5 氯氰菊酯IV 163.1 127.1 5 163.1 91 15 甲氰菊酯 264.9 210 10 181.1 152.1 25 灭蚁灵 273.8 238.8 15 273.8 236.8 15 氯菊酯I 163 127 5 163 91 15 氯菊酯Ⅱ 162.9 127.1 5 162.9 91.1 15 伏杀磷 182 111 15 182 75.1 30 吡丙醚 136.1 96 15 136.1 78.1 20 16.8 氯氰菊酯1 163 127 5 163 91 10 氯氰菊酯Ⅱ 163.1 127.1 5 163.1 91 15 氯氰菊酯Ⅲ 164.9 127 5 163 127 5 氯氰菊酯IV 163.1 127.1 5 163.1 91 15 苯醚甲环唑 322.8 264.8 15 322.8 201.9 40 苯醚甲环唑Ⅱ 322.8 264.8 15 322.8 201.9 40 顺式氰戊菊酯 225 119.1 20 167 125.1 10 醚菊酯 163 135.1 10 163 107.1 20 氰戊菊酯1 224.9 147.1 10 167 88.9 40 氰戊菊酯Ⅱ 224.9 119 15 167 88.9 40 7-氟胺氰菊酯1 250 200 40 250 55 40 7-氟胺氰菊酯Ⅱ 250 200 40 250 55 40 17.85 嘧菌酯 344.1 182.9 25 344.1 171.9 40 溴氰菊酯 252.9 174 5 250.7 172 5 苯醚甲环唑1 322.8 264.8 15 322.8 201.9 40 苯醚甲环唑Ⅱ 322.8 264.8 15 322.8 201.9 40 苯醚甲环唑1 322.8 264.8 15 322.8 201.9 40 苯醚甲环唑Ⅱ 322.8 264.8 15 322.8 201.9 40 TS=时间段；Q1=定量离子；Q2=定性离子；CE=碰撞能量 方法开发和验证完成之后，使用从泰米尔纳德邦和卡纳塔克邦收集的市场样品检验了该方法的性能、适用性和稳定性。 图5.卡纳塔克邦样品中的农药以及定量农药数量 图6.6.泰米尔纳德邦市场样品中检出的农药 由于秋葵基质较为复杂，很难在新鲜秋葵样品前处理和分析中对农药残留进行定量分析。 本研究设法去除色素和胶状物，以延长衬管和色谱柱的使用寿命，提高回收率。采用 QuEChERS 样品前处理技术进行净化，包括用乙腈萃取，然后进行分散步骤。净化步骤可减少色素和胶状物，从而提升目标化合物的灵敏度，同时也延长了色谱柱和衬管的使用寿命。 使用微板流路控制技术配置后运行柱中反吹，可去除进样间残留的高沸点组分，减轻对质谱仪离子源的污染。 大多数目标化合物回收率在可接受限度内，符合DGSANCO 12495/2013 [5] 文件的规定。具体而言，回收率为70%-120%，三个加标浓度(10、25和50ng/g) 的重现性均<20%。有几种化合物回收率较低(<70%)，但在三个准确性生度下的 RSD 保持一致。由于这些农药的结果一致(<20%RSD)， 在分析中可以根据已知回收率对结果进行校正。就灵敏度而言，大多数化合物可在1-3 ng/g 浓度下定量。 ( 参考文献 ) ( 1. http：//apeda.gov.in/apedawebsite/menupages/ Export_Regulations.htm ) ( 2. Agilent QuEChERS 样品前处 理 手册，安捷伦科技公司， 出版号 5991-1057CHCN， 9 0-99 ) ( 3. M.L. Woolfe， M. F. Chaplid， G i fty Otchere， “ St udies on theMucilages E x tracted from Okra Fruits (Hibiscus esculen-tus L.) and Baobab Leaves (Adans oniadigitata L.)"Department of Nutrition and Food Science， University ofGhana， Legon， Ghana ) ( 4. 安 5 捷伦农药和环境污染物 SRM数据库，部件号 G9250AA ) ( 5. Safety of the food chain chemicals， c o ntaminants， pesti- cides； DG SANCO/12571/2013 19 November 2013 rev.0 ) 图7.三个浓度回收的相对标准偏差 更多信息 这些数据仅代表典型的结果。有关我们的产品与服务的详细信息，请访问我们的网站 www.agilent.com。 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： ( www.agilent.com/chem/erfq-cn ) www.agilent.com 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本资料中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 ◎安捷伦科技(中国)有限公司，2015 2015年12月1日，中国出版 ( 5991-6207CHCN )     摘要    本应用简报描述了如何使用快速、简便、经济、高效、耐用和安全(QuEChERS)的AOAC 样品前处理方法萃取和净化新鲜秋葵中的多农药残留。该AOAC 方法包括：• 在水/乙腈缓冲系统中进行初步萃取• 加入盐进行萃取/分离步骤• 使用分散固相萃取（分散式固相萃取）进行净化步骤    待定量的农药是印度农产品和加工食品出口发展局(APEDA) 根据其秋葵出口农用化学品控制流程选出[1]。APEDA 是印度负责监测残留和出口促进活动的监管机构，对秋葵出口要监控的化合物及其MRL 限值作出了规定。对适合气相色谱分析的化合物进行分离，以进行GCMS/MS 分析。回收率实验的加标浓度为10、25 和50 ng/g。    前言    秋葵(Abelmoschus esculentus) 又名“美人指”，是一种锦葵科的开花植物。其价值在于可食用的绿色种荚。这种植物栽培于全球范围内的热带、亚热带和暖温带地区。秋葵是热带国家/地区的一种重要蔬菜，深受喀麦隆、加纳、印度、伊拉克、尼日利亚、巴基斯坦、瑞士、阿联酋和美国等地消费者的欢迎。有人认为秋葵起源于非洲，在世界上大多数亚热带和热带地区都有种植。印度、巴基斯坦、伊拉克等都是重要的秋葵种植国家。印度是秋葵产量排名第一的国家，占全球产量的73%。在印度，秋葵主要用作辅食。西非许多地区经常使用粘稠食物为当地的汤类和炖菜增稠。    本应用简报介绍了通过设置样品前处理方法优化秋葵定量分析的农药回收率，同时最大限度减少衬管污染，从而简化常规分析，提高通量。    结论    由于秋葵基质较为复杂，很难在新鲜秋葵样品前处理和分析中对农药残留进行定量分析。本研究设法去除色素和胶状物，以延长衬管和色谱柱的使用寿命，提高回收率。采用QuEChERS 样品前处理技术进行净化，包括用乙腈萃取，然后进行分散步骤。净化步骤可减少色素和胶状物，从而提升目标化合物的灵敏度，同时也延长了色谱柱和衬管的使用寿命。使用微板流路控制技术配置后运行柱中反吹，可去除进样间残留的高沸点组分，减轻对质谱仪离子源的污染。大多数目标化合物回收率在可接受限度内，符合DG SANCO 12495/2013 [5] 文件的规定。具体而言，回收率为70%–120%，三个加标浓度（10、25 和50 ng/g）的重现性均< 20%。有几种化合物回收率较低(< 70%)，但在三个准确性浓度下的RSD 保持一致。由于这些农药的结果一致(< 20% RSD)，在分析中可以根据已知回收率对结果进行校正。就灵敏度而言， 大多数化合物可在1–3 ng/g 浓度下定量。