鳄梨中灭菌丹残留检测方案(固相萃取)

「应用纪要WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. [应用纪要] 利用Oasis PRiME HLB和APGC-MS/MS分析鳄梨中农药多残留 Michael S. Young和Jeremy C. Shia 应用优势 高效、省时的多种类/多残留分析方法 简单、快速且有效的样品净化方法，适用于分析多油脂的样品 快速、灵敏的APGC-MS/MS分析 沃特世解决方案 配备APGC接口的Xevo°TQ-S质谱仪沃特世APGC专用于除油脂的OasisPRiME HLB小柱AOAC QuEChERS的提取包 关键词 APGC-MS/MS， Oasis PRiME HLB， 农药，鳄梨，QuEChERS 概述 为了保障公众健康和安全，人们亟需能够可靠测定食品中多农药残留的分析方法。许多农药是适合采用气相色谱(GC)进行分析，因此我门通常采用气质联用(GC-MS)法来测定水果和蔬菜中的这些化合物。 本应用纪要介绍了一种适用于鳄梨样品(含有大量脂类的基质)农药分析的高效净化方案。经改良的QuEChERS提取法处理之后，使用Oasis PRiME HLB小柱进行净化，然后经APGC-MS/MS进行分析。 简介 近年来，食品安全实验室纷纷开始采用简化的样品制备方法，这些方法主要目的是缩短分析时间、降低相关成本和提高通量。例如，用于水果和蔬菜样品的QuEChERS方法仅需数分钟即可完成样品制备，替代了耗时数小时甚至数日的传统方法。 本研究在鳄梨样品(一种脂类含量较高的水果基质)的农药分析中应用了这种精简的样品制备方法。一般来说，鳄梨的脂肪含量为10%-15%，总磷脂含量约为1%。在QuEChERS提取过程中，大量的脂肪和磷会会随着目标物化合物一起被提取出来。这些共提物(尤其是磷脂)可能会干扰色谱分析，污染GC进样器和色谱柱，并且还会污染离子源。为了避免上述问题，最好在进行仪器分析之前前行净化操作。该步骤一般采用混合吸附剂进行分散SPE净化，但此法通常需要繁琐的多步骤离心操作。本研究使用Oasis PRiME HLB小柱进行简单的通过式净化，从而有效去除脂肪和磷脂。该方法被用于分析鳄梨中农药多残留，而且适用于GC-MS分析。在本研究中，我们采用APGC方法进行定量分析(APGC-MS/MS)。 实验 APGC条件 GC系统： Agilent 7890 色谱柱： Restek Rxi-5ms， 30 m x 0.25 mm x 0.25pm 流速： 1.0mL/min(氦气) 进样体积： 1pL(分流比15：1) 升温程序： 初始温度80℃， 保持0.5 min， 以12℃/min的速率升至 320℃，然后保持8 min MS条件 质谱仪： Waters Xevo TQ-S 离子模式： API+(电荷转移模式) 电晕电流： 2.8uA 离子源温度： 150°C 探头温度： 450°C 锥孔气： 170 L/h 辅助气体： 250 L/h 碰撞气体： 0.15 mL/min(氩气) 喷雾器： 4.0 Bar 数据管理： MassLynx° 4.1版 其它仪器参数列于表1中。 表1.APGC-MS分析化合物时所采用的MRM通道(初级通道列在第一列)、仪器参数和观察到的保留时间(RT)(*表示具有多种异构体的化合物；定量时选用丰度最高的异构体)。 样品制备 AOAC QuEChERS提取 称取5g样品放入50mL离心管中(如果是加标样品，则加入相应体积的加标标准溶液)。加入5mL水和15mL 99：1乙腈/乙酸。漩涡混合30s，然后充分振荡2 min。加入QuEChERS盐包(用于AOAC的DisQuE试剂袋的内容物，部件号186006812)。用手大力振荡离心管1 min， 然后以大约2500 rcf的速度离心5 min。上清液待净化。 备注：由于鳄梨的脂肪含量过高，我们对AOAC QuEChERS方法进行了修改，将样品样从15g减至5g。 通过式SPE净化 将Oasis PRiME HLB小柱(3cc， 60 mg， 部件号186008056)安装在真空导管上。设置为最低真空度(约2英寸汞柱)。取0.4mLQuEChERS上清液通过小柱流入废液。安装收集容器。取0.6 mLQuEChERS上清液通过小柱并收集。在本研究中，APGC-MS分析时， 取200uL收集液转移至Q-Sert样品瓶之后直接进行分析。或者，也可以将一部分收集到的流出液蒸干后复溶至甲苯中，用于不分流GC进样。 结果与讨论 AOAC QUECHERS提取 区分SPE净化导致的回收率损失和QuEChERS提取导致的回收率损失非常重要。因此，在进行SPE回收率实验之前，我们先评估了改良QuEChERS方案对目标化合物的回收率。除了灭菌丹(70%)、甲氰菊酯(65%)和吡丙醚(75%)外，其它所有化合物(加标浓度为40 ng/g)的回收率均高于80%。 OASIS PRIME HLB净化 使用通过改良QuEChERS方案获得的空白鳄梨样品测定SPE净化步骤的回收率数数(见图1)。空白提取物中的加标浓度为9和40 pg/kg (ppb)， 并采用通过式SPE净化方案进行处理。然后将各化合物的响应值与经过SPE净化之后再加标的相同空白样品提取物所得的响应值进行比较。只有热不稳定定pH不稳定的灭菌丹在采用这种净化方案时损失了20%以上的回收率。图2表明， Oasis PRiME HLB小柱净化步骤去除了鳄梨QuEChERS提取物中95%以上的磷脂。同时，该净化步骤还去除了90%以上的叶绿素和大约80%的脂肪。该方案仅需数秒即可完成净化，而且净化效果与传统的分散SPE (dSPE)净化方案(通常需要繁琐的多步离心操作)相当。 图1.SPE净化的回收率结果。 图2. Oasis PRiME HLB净化方案能够有效去除鳄梨QuEChERS提取物中的磷脂。 APGC-MS/MS 相较于传统的电子碰撞质谱(EI-MS)，APGC所采用的API电离是一种更加温和的电离方式，而且是一种适用于串联MS分析的先进电离技术。这种更为温和的电离方式产生的源内碎片更少，而且提升了化合物随后在第二级四极杆内碎裂产生分子离子的几率。图3所示为高效氯氟氰菊酯的APGC质谱和EI质谱分分结果对比。请注意， APGC谱图中分子离子(m/z449)的丰度比EI谱图中的丰度更高。本研究监测了两个MRM通道，目的是测定高效氯氟氰菊酯(见表1)。这两个通道均来自m/z449处分子离子的碎裂；EI-MS无法监测这两个通道。图4所示为高效氯氟氰菊酯异构体的APGC-MS/MS测定结果，检测样品为经QuEChERS提取和OasisPRiME HLB净化之后，加标浓度为9 ng/g的鳄梨样品。本研究中所有目标化合物均具有相近的低ng/g(ppb)水平检测限。 图3.高效氯氟氰菊酯的质谱图对比； El+(左图)谱图中几乎没有任何分子离子，而API+(右图)谱图中m/z 449处的分子离子丰度非常高。 图4.APGC-MS/MS谱图，图中展示了加标浓度为9 ng/g(ppb)的鳄梨样品中高效氯氟氰菊酯异构体的测定结果； MRM通道来自m/z449处分子离子的碎裂。 结论 经过改良的QuEChERS方案可以在进行APGC-MS/MS分析之前有效提取鳄梨样品中的农药。 Oasis PRiMEHLB的通过式净化可以有效去除QuEChERS提取物中的脂肪和磷脂 Oasis PRiME HLB小柱的净化效果和回收率与繁琐且耗时的多步骤分散SPE净化方法相当。 采用APGC-MS/MS模式的Xevo TQS质谱仪可以有效检测鳄梨中低ppb水平的农药。 扫一扫，关注沃特世微信 Waters 沃特斯中国有限公司沃特世科技(上海)有限公司 北京： 010-52093866 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 上海：021-61562666 广州：020-28296555 成都：028-67653588 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400) 820 2676Www.waters.com 利用Oasis PRiME HLB和APGC-MS/MS分析鳄梨中农药多残留 本应用纪要介绍了一种适用于鳄梨样品(含有大量脂类的基质)农药分析的高效净化方案。经改良的QuEChERS提取法处理之后，使用Oasis PRiME HLB小柱进行净化，然后经APGC-MS/MS进行分析。