豆芽中吲哚丁酸检测方案(固相萃取仪)

Agela Technologies博纳艾杰尔产品应用案例 豆芽中植物生长调节剂的分析方法 AF 10142 应用及技术服务部 摘要：本实验采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱的方法，建立了豆芽中植物生长调节剂的检测方法。样品经酸化乙腈提取， Cleanert MCS 固相萃取柱净化， DA-5MS (30 m×0.25 mm×0.25um)和 Venusil MP C18 色谱柱(3um， 100 A； 3.0×50mm)分离，采用水和乙腈为流动相进行洗脱，外标法进行定量。结果表明，样品添加量为 0.1 mg/kg 和0.004 mg/kg 时，回收率在60%~100%之间，能够满足检测要求。 关键词：植物生长调节剂； Cleanert MCS 固相萃取柱； Venusil MP C18 色谱柱 前言 植物生长调节剂，是用于调节植物生长发育的一类农药，包括人工合成的具有天然植物激素相似作用的化合物和从生物中提取的天然植物激素。是人们在了解天然植物激素的结构和作用机制后，通过人工合成与植物激素具有类似生理和生物学效应的物质，在农业生产上使用，有效调节作物的生育过程，达到稳产增产、改善品质、增强作物抗逆性等目的。按照登记批准标签上标明的使用剂量、时期和方法，使用植物生长调节剂对人体健康一般不会产生危害。如果使用上出现不规范，可能会使作物过快增长，或者使生长受到抑制，甚至死亡。对农产品的品质会有一定影响，并且对人体健康产生危害。 实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 AB SCIEX API 4000+液相质谱联用仪 试剂材料 甲醇、乙腈为色谱纯；实验用水为超纯水；；氯化钠、无水硫酸钠、氨水为分析 纯； 40 mmol/L 的盐酸溶液：吸取 0.33mL 的盐酸与100 mL纯水混合配成浓度为40mmol/L 的盐酸溶液 5%氨化甲醇：量取95mL甲醇，加入5mL氨水，混匀 农药混合标准工作液：0.1ug/mL， 甲醇溶解； eanert MCS： 500 mg/6mL。 样品制备 样品提取 称取试样10g于50mL离心管中，加入40 uL甲酸，再加入20 mL乙，涡旋混匀1min， 然后超声 30 min， 超声结束冷却后，8000 r/min 离心5 min，上清液转移至新的 50 mL 离心管中，然后加入3.0g氯化钠，涡旋混匀1 min， 超声10 min，冷却后8000 r/min 离心5 min， 吸出乙腈层，用无水硫酸钠脱水过滤至 40 mL 玻璃瓶中，用氮气吹至近干，加入2mL甲醇超声溶解，待净化。 样品净化 净化一： 取上述待净化液1mL， 加入到 QuEChERS净化管中，混匀，静止5 min，进一步混匀，然后8000 r/min 离心5 min， 取上清液过 0.22 um Nylon 针式过滤器后，进行 GC-MS分析测定 2，4-D-乙酯和2，4-D-丁酯。 净化二： 另外取1mL待净化液，加入9 mL 40 mmol/L 的盐酸溶液，然后超声混匀，转移至15 mL离心管后，8000 r/min 离心5 min， 上清液待净化。先将 MCS (500 mg/6mL)小柱依次用5 mL甲醇，5 mL水和5 mL 40 mmol/L 的盐酸溶液活化平衡；然后将待净化液转移到小柱内，待样品过柱后，用5mL水淋洗小柱并抽干；最后用5mL甲醇洗脱收集，抽干得洗脱液1；再用5 mL 5%氨化甲醇(V/V)洗脱收集，抽干得洗脱液2。洗脱液1、2于45℃氮气吹干，用1mL20%乙腈水(V/V)溶解定容，过0.22 um PTFE-Q针式过滤器后，进行 LC-MS/MS 检测。洗脱液1用于分析赤霉素、2，4-D、4-氯苯氧乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸、2-萘乙酸6种植物生长调节剂；洗脱液2用于分析氯吡脲、噻苯隆、6-BA、多效唑4种植物生长调节剂。 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com . cn 网址： w w w. ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 气质检测 色谱柱： DA-5MS (30 mx0.25 mm×0.25 um)； 进样量：：11pL； 进样口：220℃，不分流进样； 程序升温：起初80℃保持 1min，之后以10℃/min 的速度升至280℃，保持21 min 载气：氦气，1mL/min 离子源：230℃ 液质检测 液相条件 色谱柱：Venusil MP C18，，3 um， 100A， 3.0×50 mm 流动相：A：水；B：乙腈 柱温：30℃ 进样量：5uL 质谱条件 正离子模式 离子源：EESI+；电喷雾电压：5500V；雾化气压力：45 psi；i；气帘气压力： 25 psi； 辅助气压力：45 psi；离子源温度：500℃；采集方式：多反应监测(MRM)。负离子模式 离子源： ESI-；电喷雾电压：-4500V；'；雾化气压力：40 psi；气帘气压力： 25 psi； 辅助气压力：40 psi；离子源温度：550℃；采集方式：多反应监测(MRM)。梯度洗脱： 表1.液相色谱梯度洗脱条件 时间/min 流速/mL/min A/% B/% 0.50 0.4 95 5 1.00 0.4 60 40 3.00 0.4 15 85 4.50 0.4 5 95 6.00 0.4 5 95 ( 地址： 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com.cn 网址： w w w.agela.com.cn 客服：400-606-8099 ) 6.10 0.4 95 5 10.00 0.4 95 5 质谱参数：见表2 表2.10种农药质谱参数 物质名称 Q1 Q3 DP/V CE/V 吲哚乙酸 176.1 130.0 56 22 134.0 19 吲哚丁酸 204.1 54 186.0 17 168.2 26 多效唑 294.0 76 70.1 45 125.0 54 4-氯苯氧乙酸 185.0 127.0 -45 -17 91.0 -40 2-萘乙酸 185.0 141.0 -18 -9 2，4-D 218.9 161.0 -36 -17 125.0 -36 噻苯隆 218.9 99.8 -69 -15 71.2 -17 6-苄氨基嘌呤 224.1 -80 132.7 -30 208.0 -28 126.5 -18 氯吡脲 246.1 91.0 -74 -15 赤霉素 344.9 128.7 -88 -15 142.8 -40 220.9 -35 实验结果 由表3可知，采用固相萃取结合气相色谱串联质谱和液相色谱串联质谱的方法检测豆芽中12种植物生长调节剂，加标回收率在60%~100%之间，能够满足检测 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com.cn 网址： w w w.agela.com.cn 客服：400-606-8099 ) 要求。由图1~图17可知，用 DA-5MS 和 Venusil MP C18 色谱柱检测12种植物生长调节剂，峰形良好，且保留时间稳定。 表3.豆芽中加标回收实验结果 物质名称 保留时间/min 添加水平/mg/kg 平均回收率/% 变异系数/% 2，4-D-乙酯 13.194 0.1 75.2 3.4 2，4-D-丁酯 15.215 0.1 74.4 2.8 吲哚乙酸 4.040 0.004 63.2 8.1 吲哚丁酸 4.400 0.004 61.8 3.4 多效唑 4.920 0.004 87.6 1.1 4-氯苯氧乙酸 4.460 0.004 86.8 1.1 2-萘乙酸 4.560 0.004 74.1 6.2 2，4-D 4.760 0.004 86.4 2.0 噻苯隆 4.240 0.004 79.9 0.4 6-苄氨基嘌呤 3.880 0.004 96.3 0.8 氯吡脲 4.580 0.004 81.6 0.1 赤霉素 3.750 0.004 92.7 0.1 实验谱图 图1.0.5 pg/mL标准溶液GC-MS色谱图 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s s e e rvice@agela . com.cn 网址： w w w. ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 图2.0.1mg/kg豆芽基质混合标准工作液GC-MS色谱图 图3.豆芽基质空白GC-MS色谱图 图4.0.1 mg/kg豆芽基质加标GC-MS色谱图 图5.正模式0.02 ug/mL标准溶液LC-MS/MS色谱图 图6.正模式0.004 mg/kg豆芽基质混合标准溶液LC-MS/MS色谱图 图7.正模式豆芽空白基质加标LC-MS/MS色谱图 图8.正模式0.004 mg/kg豆芽基质加标LC-MS/MS色谱图 Email： sseervice@agela.com.cn 网址： www.agela.com.cn 客服：400-606-8099 图9.正模式0.004 mg/kg豆芽基质混合标准工作溶液LC-MS/MS色谱图 图10.正模式豆芽空白基质LC-MS/MS色谱图 图10.正模式0.004 mg/kg豆芽基质加标LC-MS/MS色谱图 图11.负模式0.02 ug/mL标准溶液LC-MS/MS色谱图 图12.负模式0.004 mg/kg豆芽基质混合标准工作溶液LC-MS/MS色谱图 图13.负模式豆芽空白基质LC-MS/MS色谱图 ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com . cn 网址： w w w .ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 图14.负模式0.004 mg/kg豆芽基质加标LC-MS/MS色谱图 图15.负模式0.004 mg/kg豆芽基质混合标准工作溶液LC-MS/MS色谱图 图16.负模式豆芽空白基质LC-MS/MS色谱图 ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com . cn 网址： w w w .ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 图17.负模式0.004 mg/kg豆芽基质加标LC-MS/MS色谱图 结论 本实验建立了豆芽中植物生长调节剂的 GC-MS 和 LC-MS/MS 检测方法，并结合固相萃取技术对豆芽中植物生长调节剂的含量进行了测定。对于加标量为0.1mg/kg 和 0.004 mg/kg 的样品，植物生长调节剂样品回收率在60%~100%，变异系数小于10%，能够满足实验要求。说明 QuEChERS 产品和 Cleanert MCS 小柱可以用于豆芽中植物生长调节剂的检测，且稳定性良好。 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Venusil MP C18 3 um， 100 A， 3.0×50 mm 1支 VA930503-0 DA-5MS 30 mx0.25mm×0.25 um 1支 1525-3002 Cleanert MCS 500 mg/6 mL 30 支/pk MCS5006 Qdaura° 卓睿全自动固相萃取系统 4 通道 1台 SPE-40 15 位氮吹仪 15位 1台 NV15-G 1.5 mL 样品瓶 短螺纹透明带书写处32×11.6 mm 100/pk 1109-0519 1.5 mL 样品瓶盖 9 mm中心孔蓝盖，红色 橡胶/米色 PTFE 隔垫 45° Shore A；1.0 mm 100/pk 0915-1819 一次性注射器 2 mL 无针头 100支/包 LZSQ-2ML 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：话： 传真：mail： seservice@agela.com.cn 网址：www.agela.com.cn 客服： 色谱条件地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：