土鳖虫微粉中尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤检测方案(制备液相色谱)

Agela Technologies博纳艾杰尔产品应用案例 土鳖虫微粉中尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤分析报告 AP10082 应用及技术服务部 摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC)法， 选择 Venusil@HILIC(5 um， 100 A， 4.6×250mm)色谱柱对土鳖虫微粉中尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤进行了测定。结果表明：流动相为乙腈∶水=90：10(v/v)时，供试品溶液中主成分与相邻杂质峰间的分离度较好，能够满足检测要求。 关键词：高效液相色谱法；土鳖虫微粉；尿嘧啶；尿囊素；次黄嘌呤；VenusilHILIC色谱柱 前言 土鳖虫，其化学成分主要为挥发油和氨基酸。挥发油总量约22.19%，主为为，另含各种脂肪醛和芳香醛，占24.95%。还含有二氯苯和二甲基二硫醚等其它中药少见的成分。氨基酸总总量约占40%，人体必需的氨基酸占氨基酸总量的30%以上。另含b-谷甾醇。又从中分得二十八烷醇、十八烷基甘油醚、尿囊素、尿嘧啶；胆甾醇、棕榈酸及5，5，4℃-二羟基-7-甲氧基黄酮 本实验使用 VenusilHILIC 色谱柱对土鳖虫微粉中尿嘧啶、尿囊素与次黄嘌呤进行了测试。 表 1.有关成分化学信息 样品名称 英文名 结构式 分子式 分子量 CAS 号 NH 尿嘧啶 Uracil C4H4N2O2 112.09 144104-68-7 N 尿囊素 Allantoin HN N N NH2 C4H6N4O3 158.12 97-59-6 OH 次黄嘌呤 Hypoxanthine C5H4N4O 136.11 51953-04-9 N 实验部分 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w. ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 仪器、试剂与材料 试剂材料 屈臣氏水；；乙腈为色谱纯； 土鳖虫微粉：褐色粉末，由某药科大学提供； 尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤对照品：无色透明液体，由某药科大学提供； 稀释剂：乙腈：水=1：1(v/v)； 高效液相色谱柱：Venusil HILIC； 5 um， 100 A，4.6×250 mm。 样品制备 取土鳖虫微粉 0.5 g， 加稀释剂25 mL， 混匀，超声提取 10 min， 取上清液经0.45 p.m针筒过滤器过滤，取续滤液作为供试品溶液。 色谱条件 色谱柱：VenusilHILIC； 5 um， 100 A， 4.6×250 mm； 流动相|：：乙乙：水=90： 10 (v/v)； 波长：210 nm； 柱温：25℃： 流速：1.0 mL/min： 进样量：10uL； 结果与讨论 本实验采用 Venusil HILIC 色谱柱对土鳖虫微粉中尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤进行了测定，由表2及图2可知，流动相为乙腈和水，等度洗脱时，待测物峰形良好，有关物质分离度较好。 表2.土鳖虫微粉有关物质测试结果 样品名称 色谱峰序号 化合物名称 保留时间/min 理论塔板数 拖尾因子 备注 尿嘧啶 5.721 10458 1.00 图1 对照品 尿囊素 8.196 9957 0.95 次黄嘌呤 9.455 13249 0.97 土鳖虫微粉供试品 图2 尿嘧啶 5.747 11607 1.02 2 尿囊素 8.224 14947 0.99 ( 地址： 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w. ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 归一化300250200150-100-二50 0-13 tLs VWD1 A， Wavelength=210 nm (ZJZ\土鳖虫2014-08-2216-31-41001-0102.D)6寸6co 0 2.5 5 7.5 10 12.5 min 图1.尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤对照品溶液高效液相色谱图 VWD1 A， Wavelength=210 nm (ZJZ\土鳖虫2014-08-22 16-31-41(002-0202.D) 图2.土鳖虫微粉供试品溶液高效液相色谱图 结论 本实验相关方法，采用 Venusil HILIC 色谱柱(5 um， 100A，4.6×250mm)对土鳖虫微粉中尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤进行了测定。结果表明供试品溶液中主成分尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤与相邻杂质峰分离效果较好，能够满足检测要求。 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Venusil HILIC 5 um， 100 A， 4.6×250 mm 1支 VH952505-0 1.5 mL 样品瓶 短螺纹透明带书写处32×11.6mm 100/PK 1109-0519 ( 地址： 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w. ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 1.5 mL 样品瓶盖 9mm 中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE 隔垫45°Shore A； 1.0 mm 100/PK 0915-1819 激孔滤膜 单膜，13 mm， 0.45 um 100个/包 AS021345-T 一次性注射器 2 mL 无针头 100支/包 LZSQ-2ML 乙腈 4L/瓶，色谱纯 4×4L/箱 AH015-4 ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w.ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编： 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：话： 传真：