头孢呋辛中乳酸和乙酸检测方案(离子色谱仪)

2Thermo FisherScientific， Austin， TXUSA is ISO 9001：2008 Certified. 钟新林余彦海 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 Key words： Cefuroxime； Ion chromatography； lactate； Acetate 引言 头孢呋辛是由英国葛兰素公司研发的一个头孢类抗生素，属于二代头孢菌素。它通过与细菌细胞膜上的青霉素结合蛋白(PBPs)结合，抑制细胞分裂和生长，最后使细菌溶解和死亡。头孢呋辛具有广谱抗菌作用，适应范围广，可用于敏感菌所致的呼吸道感染、耳、鼻、喉科感染、泌尿道感染、皮肤和软组织感染、骨和关节感染、淋病、包括败血症及脑膜等其他感染。 头孢呋辛钠一般由7-氨基头孢烷酸(7-ACA)经过7步反应合成。其中最后一步为由头孢呋辛酸与异辛酸钠、乳酸钠或乙酸钠成盐制成。因此测试成品中的乳酸和乙酸对生产质量控制有重要意义。头孢呋辛钠的含量测定一般采用高效液相色谱。但由于乳酸和乙酸基本没有特征紫外吸收，用210nm末端吸收测试灵敏度很低。使用离子色谱分离电导检测则在同样进样量下灵敏度可高一千倍。虽然头孢呋辛钠在碱性情况下会降解，但短时降解产物未产生乳酸及乙酸，因此可以用离子色谱进行测试。 测试条件 仪器： 离子色谱系统： Thermofisher Dionex ICS-2000型离子色谱，带KOH自动淋洗液发生罐系统及电导检测器。 分析柱： lonPac AS19 (4×250mm) 保护柱： lonPac AG19(4×50mm) 流速：1.0mL/min 检测方法：抑制型电导检测 进样量：25pL 液相色谱系统： UltiMate 3000系列，包括LPG-3400SD泵， WPS3000SL ANALYTICAL自动进样器，TCC-3000SD柱温箱， VWD-3400RS紫外检测器 分析柱： Acclaim Mixed-Mode WAX-1 淋洗液条件：25mmol/L KH，PO4(磷酸调为PH3.5) +50%乙腈 流速：1.0mL/min 检测方式：210nm紫外检测 进样羊：20uL 样品前处理 称取0.1g样品，溶解到500mL纯水中，0.22pum滤膜过滤后直接进样。 碱性稳定性试验则为100mL上述样品中加入50%NaOH 0.3mL。每30分钟取部分进样一次。 结果与讨论 1.离子色谱实验结果 离子色谱分离的结果如图1所示，其中5.6.7均可能为主成分峰或主成成降解峰(在紫外254nm下有吸收，为头孢呋辛核心杂环的吸收值)。碱水解30分钟，60分钟，90分钟，乳酸及乙酸峰无差异(RSD<1.5%)。同时样品按不同浓度配制，其乳酸乙酸含量与样品浓度呈线性关系。乳酸和乙酸的线性范围由0.1mg/L-10mg/L，检测限以3倍噪音算为0.02mg/L。五个不同批次样品的结果如表1。 图1样品分析色谱图 使用弱碱性阴离子与反相机理混合的WAX柱，可以做到普通反相液相色谱柱做不到的分离效果。使用磷酸缓冲盐可以用于分离有机酸及主成分。特别比药典方法更有优势的是可以分离出多种杂质。对于杂质的具体成分，暂时还没有相关资料进行详尽分析。典型色谱图如图2所示。但是液相因为使用末端吸收，对有机酸的检测限比较有限(对乙酸约为10mg/L)，且乙酸这些分离比较弱，并不适合于其中低含量有机酸成分的分析。 图2实际样品液相分离色谱图，其中2号为乙酸峰，3号为乳酸峰，8号峰为主峰。 结论 使用离子色谱可以测定头孢呋辛钠中的乳酸及乙酸，且不受头孢呋辛降解的影响，具有极高的灵敏度和良好的线性范围。 ( [1]李爱军，周雪琴，刘志东， 《天津大学学报》 2007， 11 ： 1342 )