陈皮中橙皮苷的检测检测方案(快速溶剂萃取)

2 加速溶剂萃取-顺序萃取法萃取陈皮中的橙皮苷 车金水叶明立梁立娜 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词：加速溶剂萃取；顺序提取；中药；陈皮；橙皮苷； Key words： Accelerated Solvent Extraction； Sequential Extraction；Traditional Chinese Medicine； Citri Reticulatae Pericarpium； Hesperidin 引言 中药陈皮中的橙皮苷具有抗氧化性，防止自由基的形成，能够作为功能性因子加入到食品中。参照2010版药典，对橙皮苷的提取需先采用石油醚索氏提取陈皮中的挥发油类成分，然后再进行橙皮苷的提取，该前处理方法需要消耗大量的时间和溶剂。赛默飞生产的加速溶剂萃取仪(ASE)，很好地解决了上述问题，具有简单、快速、溶剂消耗小、萃取效率高及环境污染小等优点。采用ASE提取，建立序列(sequence)的方式，分别用石油醚和甲醇顺序提取，能够在半个小时左右的时间内处理好样品，大大的节省了前处理时间及溶剂消耗。 ASE条件 仪器： ASE350 前处理方法：陈皮样品粉碎至30目左右，过30目筛。取陈皮2g，精密称定，加入石英砂适量，混合均匀，转至底层垫有纤维素膜的萃取池(10mL)中，加速溶剂萃取，弃去石油醚提取液，甲醇提取液过0.45pm滤膜，即得。 表1 ASE萃取条件 ASE条件 Step1 Step2 溶剂 石油醚 甲醇 温度 120℃ 120℃ 加热时间 6min 6min 静态萃取时间 3min 5min 循环次数 2 1-2 吹扫体积 60% 60% 吹扫时间 200s 90s 总体积 40mL 总时间 30min 仪器： UltiMate 3000高效液相色谱仪，配四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器。 分析柱： Acclaim C18， 120A， 4.6mm， 250mmx5um(PN：059149) 流动相：甲醇-醋酸-水(35：4：61) 流速：1.0mL/min 柱温：30℃ 检测器： UV@283nm 进样量：10pL 结果与讨论 图1标准品色谱图 图2样品色谱图 溶剂的选择 本实验参考2010版药典方法，分别采用石油醚及甲醇作为ASE萃取溶剂。其中石油醚作为第一步萃取溶剂，除去样品中的挥发油类等脂溶性物质；第二步采用甲醇作为橙皮苷的提取溶剂，将样品中的目标成分萃取出来。 本实验分别考察了80℃、100℃、120℃和140℃作为萃取温度对陈皮中的橙皮苷萃取率的影响。随着萃取温度的提高， ASE对橙皮苷的萃取率随着升高，于120℃时达到最佳的萃取效率，对橙皮苷的萃取效率为6.7%。再升高萃取温度，对橙皮苷的萃取效率没有影响，维持在同一水平。故本文采用120℃作为后续萃取温度。 ASE炉体升温速度较快，而降温速度较慢，为提高效率，避免使用不同的萃取温度对同一样品进行萃取。故对橙皮除脂萃取温度也采用120℃。 图3萃取温度的选择 静态萃取时间及循环次数 本方法考察了ASE除脂过程中循环次数的影响(静态萃取时间为3min)，当第二次萃取循环时提取液几乎为无色，故采用3min静态萃取时间，2次循环次数作为除脂过程的提取条件。 为研究静态萃取时间及循环次数对橙皮苷萃取效率的影响，本方法采用固定静态萃取时间(5min)的方法，考察不同循环次数中对橙皮苷的萃取量。实验结果表明，第一次萃取循环对橙皮苷的提取量占3次提取总量的81.5%；第二次萃取循环对橙皮苷的提取量占3次提取总量的17.1%；第三次萃取循环对橙皮苷的提取量占3次提取总量的1.4%。 图4不同萃取循环对橙皮苷的提取效率的影响 2010版药典方法：取陈皮样品2g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚80mL，加热回流3h，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇80mL，再加热回流至提取液无色(约3-4h)，放冷，滤过，滤液置100mL容量瓶中，定容，摇匀，即得。 当采用1次萃取循环作为循环次数时，ASE对陈皮中的橙皮苷的平均萃取率为5.1%， RSD为3.8%(n=3)。同时采用2010版药典规定方法对同一样品进行萃取(方法见1.1部分)，索氏提取的平均提取率为5.2%，RSD为7.4%(n=3)。实验结果表明：ASE对陈皮中的橙皮苷的萃取率和药典推荐方法-索氏提取萃取率相当，但ASE更加省时，省溶剂，平行性更好。 表2ASE和索氏提取比较(ASE采用1次萃取循环) 萃取方法 样品量 溶剂量 耗时 萃取率 RSD ASE 2g 55mL 35min 5.1% 3.8% SE 2g 200mL 7h 5.2% 7.4% ASE采用2次萃取循环作为萃取循环次数时， ASE对陈皮中的橙皮苷的平均萃取率为6.3%， RSD为3.1%(n=3)。ASE的提取率较传统的索氏提取提高了约20%，且稳定性更好。同时比较溶剂消耗量，耗时， ASE具有速度快、溶剂消耗小等优点。 表3ASE和索氏提取比较(ASE采用2次萃取循环) 萃取方法 样品量 溶剂量 耗时 萃取率 RSD ASE 2g 55mL 35min 6.3% 3.1% SE 2g 200mL 7h 5.2% 7.4% 结论 采用ASE顺序提取法提取陈皮中的橙皮苷，相比较2010版药典推荐方法-索氏提取，能够达到了除脂和萃取有效成分的目的，并简化了操作步骤及节省了大量的操作时间。ASE提取中药中的活性成分时，既能达到药典推荐萃取方法等同的萃取率，在提高萃取条件时， ASE还能达到更高的萃取率。同时具有操作简单、快速、高效等特点，值得在中药领域推广使用。 ( [1]国家药典委员会.中国人民共和国药典2010版 第一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010： 176. ) thermoscientific.com ( C 2012 T h e rmo Fishe r Scie n tific Inc . Al l ri g hts reserved. All trademarks are the pro p erty of Thermo Fisher Scientific Inc. a nd its s ubsidiaries. Specifications， terms a nd p r icin g are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your l ocal s ales r epresentative for d e tails. ) 北京 免费服务热线： 上海浦东新金桥路27号6号楼 北京东城区安定门东大街28号 8008105118 邮编：201206 雍和大厦西楼F座7层702-715室 4006505118 电话：021-68654588 邮编：100007 传真：021-64457830 电话：010-84193588 传真：010-88370548 ThermoFisherSCIENTIFIC Thermo Fisher Scientific，San Jose， CA USA is ISO Certified.上海SCIENTIFIC