血浆中普瑞巴林的含量检测方案(固相萃取仪)

使用LC-MS/MS 检测96孔蛋白沉淀板处理的血浆中普瑞巴林的含量 引言 普瑞巴林是一种新型钙离子通道调节剂，能阻断电压依赖性钙通道，减少神经递质的释放。该药是一种新型y-氨基丁酸(GABA)受体激动剂，能阻断电压依赖性钙通道，减少神经递质的释放，临床主要用于治疗外周神经痛以及辅助性治疗局限性部分癫痫发作。 普瑞巴林一般为口服用药，其生物利用率可达到或高于90%。在血浆中的血药浓度约0.04到9.5 ug/mL 二、 材料与方法 普瑞巴林 (pregabalin)， 分子式CgH17NO2， 分子量159.23， CAS： 148553-50-8， pKa 4.2和10.6。其结构式见图1。 图1.普瑞巴林化学结构式 本实验使用96孔蛋白沉淀板对血浆样品进行净化： Cleanert 蛋白沉淀板(Cat：96CD2025-Q， Spec： 2mL/well， Lot： 150623)， 96位正压装置，96孔接收板， Venusil MP C18(2)(2.1x50mm， 5um， 110A)，以上产品均为天津博纳艾杰尔科技有限公司产品； LC/MS/MS， API 4000+液相色谱-串联质谱仪(SCIEX)。 血浆为牛血浆。 HPLC 条件 色谱柱：： Venusil MP C18 (2) (2.1x50mm， 5um， 110A)； 流速：200pL/min； 柱温：30℃； 进样量：5pL； 流动相：A-0.1%甲酸水溶液；B-甲醇。 表 1. HPLC 梯度条件 Step Total Time(min) Flow Rate(ul/min) A(%) B (%) 0 0 200 80 20 1 4 200 80 20 质谱条件 扫描模式：电喷雾电离正模式； 采集模式：多反应监测(MRM)； 电喷雾电压： 4500V； 气帘气 (curtain gas) ： 30； 雾化气 (gas 1)： 60； 辅助气 (gas 2)： 30； 离子源温度 (TEM)： 450℃ 表2串联质谱参数 化合物 保留时间 Q1 Q3 DP CE 普瑞巴林 1.98 min 160.2 142.1(定量) 50 15 125 50 19 97 50 21 样品处理方法 蛋白沉淀 1.将50ul 血浆和50 pL甲醇/水(1/1)提前混合。然后向96孔板中加入500 pl甲醇，再将上面混好的血浆加到孔中，用移液器反复抽吸几次或使用漩涡混合器混合； 2. 使用 SPE-M96 正压装置，调节压力，将液体收集到96孔收集板中，3分钟后停止正压装置； 3. 向收集板中各孔中加入400 uL 0.1%甲酸水，混匀，准备检测。 三、 结果与讨论 图2.标准溶液MRM普图 图3.血浆空白MRM谱图 图4.血浆加标MRM谱图 表3.血浆中普瑞巴林的回收率情况 加标浓度 (ng/mL) 平均回收率 (n=8) RSD (n=8) LOD (ng/mL) 25 96.8% 3.12% 0.3 100 95.9% 5.05% 四、结论 本实验使用蛋白沉淀板对血浆中的普瑞巴林进行了快速提取检测。在 25-100 ng/mL 浓度下，平均回收率为 96.8%和95.9%， RSD 值小于5.05%，可以满足相关的检测需求。 订货信息 产品名称 规格/包装 订货号 Cleanert 蛋白沉淀板 96孔板， 2mL/well 96CD2025-Q Cleanert M96 生物样品前处理仪 与96孔板匹配 SPE-M96 96位接收板 2mL/well， 与96孔板匹配 96SP2036-2 Venusil MP C18(2) 2.1*50mm，5um， 110 A VA950502-2 甲醇 LC-MS 级， 4*2.5L LC230 水 LC-MS级，4*2.5L/箱 LC365