果汁中农药多菌灵检测方案(液相色谱柱)

果汁中多菌灵检测的固相萃取方法 1、 前言 多菌灵是一种广谱性杀菌剂，对由真菌引起的多种作物病害有防治效果，可用于叶面喷雾、种子处理和土壤处理等，被广泛用于柑橘、橙子等水果黑斑病的防治，然而，一旦果汁饮料中的多菌灵含量高于标准值（EPA标准值为80 ppb），则会增加肝癌病变的风险，对人体健康构成威胁。 表1 多菌灵样品信息 样品名称 英文名 结构式 分子式 分子量 CAS编号 多菌灵 Carbendazim C9H9N3O2 191.2 10605-21-7 二、适用范围 适用于果汁饮料、纯果汁和浓缩果汁中多菌灵的检测。 三、实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 高效液相色谱仪，紫外检测器，SPE固相萃取装置，真空旋转蒸发仪，超声清洗仪，涡旋振荡仪，离心机。 试剂材料 市售果汁饮料；多菌灵标品；乙腈、甲醇（均为色谱纯）；乙酸乙酯、氨水、NaOH、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠（均为分析纯）。 色谱柱：ZKAT-C18（5 μm，120 Å，4.6×250 mm，订货号：152200542） 四、样品制备 样品提取 准确量取10 mL样品，置于50 mL离心管中，用0.1 mol/L NaOH溶液将样品pH调至10-11。加入15 mL乙酸乙酯，振荡提取1 min，4000 rpm下离心1 min，收集乙酸乙酯层，再用15 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并有机相，30 ℃下减压蒸馏至近干，用6 mL 0.1 mol/L HCl分两次溶解残渣，待净化。 SPE柱净化 （1）活化：先用3 mL甲醇活化，再用3 mL水平衡。 （2）上样：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以2 mL/min的流速过柱，流出液弃去。 （3）淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗固相萃取柱，淋洗液弃去。 （4）洗脱：用3 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱小柱，收集洗脱液。 （5）重新溶解：将洗脱液于30℃下减压蒸馏至近干，用流动相超声溶解并定容至1 mL，0.45 μm微孔滤膜过滤，供HPLC测定。 五、添加回收结果 果汁中多菌灵添加水平（2.5 mg/kg）的回收结果 表2 果汁中多菌灵添加水平（2.5 mg/kg）的回收结果 目标物 进样次数 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 多菌灵 1 96.23 96.11 0.53 2 96.71 3 95.39 图1 添加水平为2.5 mg/kg果汁中多菌灵的液相色谱图 液相色谱条件 色 谱 柱：ZKAT-C18（250 * 4.6 mm，5 μm） 检 测 器：UV2996 检测波长：UV 288 nm 流 动 相：磷酸缓冲液*/乙腈 = 75/25（v/v） 流 速：1.0 mL/min 柱 温：30 ℃ 进 样 量：20 μL * 磷酸缓冲液：1.38 g磷酸二氢钠 + 1.41 g 磷酸氢二钠，加水定容至1 L 六、结论 采用此方法进行果汁饮料中多菌灵含量的液相测试，添加回收率达到96.11%，表明AE.SPE-C18 及ZKAT-C18适于果汁饮料中多菌灵的纯化和测试。 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 ZKAT-C18 5 μm ，120 Å，4.6×250 mm 1支 152200542 AE.SPE-C18 500 mg/6 mL 30支/盒 S02-0506 2mL螺纹透明样品瓶 32×11.6mm 100个/盒 AE134425 微孔滤膜 单膜，13 mm,0.45 μm 200片/盒 AE1360101