牛樟芝中牛樟芝活性成分及杂质检测方案(液相色谱仪)

「应用纪要]THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「应用纪要] ■ ■ Waters 应用优势 走超临界流体萃取(SFE)相比溶剂萃取，对牛樟芝活性成分的提取效率更高、针对性更强、提取的杂质更少。 ■UUPC?基于超临界流体色谱理论，对硬件进行了全新的设计，保证了分离的稳定性、精密度以及重现性，在2.5分钟内对牛樟芝提取物中的目标化合物和杂质实现基线分离。 ■LC方法分析牛樟芝提取物，目标化合物和杂质分离度不够，导致放大到制备LC进样量提高时杂质峰和目标峰共流出，严重限制了单次制备量。而UPC?对牛樟芝提取物的分离度明显优于LC，将分析方法放大到制备超临界流体色谱时可显著提高进样量，，制备效率相比LC制备提高14倍。 UPC和制备超临界流体色谱主要以CO，为流动相，馏分溶剂后处理更方便，分析成本显著降低，相比LC方法溶剂成本节省90%。 沃特世解决方案 MV-10 ASFE 超临界流体萃取系统ACQUITY UPC? Prep SFC 80 牛樟芝简芝“樟芝”，学名为Antrodia camphorata，，俗名牛樟菇、红樟芝、樟内菇、樟菇、血灵芝等，至2012年从牛樟芝中已分离得到的化合物约225种。这些化合物包括大分子化合物(蛋白，核酸，多糖等)，小分子化合物(木质素，芳香族化合物，苯醌类，马来酸和琥珀酸衍生物等)，萜类化合物(单萜，二萜，羊毛甾烷型三萜，麦角甾烷型三萜，甾体等)，核苷酸类化合物(碱基，核苷等)，脂肪酸以及脂肪酸酯等。研究表明，多糖，萜类，甾体类化合物，马来酸及琥珀酸衍生物等是牛樟芝的主要活性化合物，具有护肝、抗癌、调节免疫、去过敏、解毒和抗炎等功效。 解决方案 待分离制备的目标化合物结构式如下： 主要杂质的结构如下： 目标化合物具有中等极性，适合用超临界流体萃取技术提取。采用MV-10 ASFE超临界流体萃取系统，对牛樟芝中的目标化合物进行提取，如图一所示，超临界流体萃取技术比溶剂萃取技术更有针对性，提取的杂质更少。 图1.超临界流体萃取和溶剂萃取所得样品用UPC分析结果图谱。 首先采用LC技术，考察目标化合物的制备方案。如图二所示，用UPLCQ/MS进行分析，分析结果显示主要杂质峰出现在目标化合物峰相邻的前面，这样的分离结果会对制备方法开发带来挑战。 图2.UPLC/MS分析图谱。 在考察LC制备方法进样量的过程中发现，当进样量逐渐增加时，杂质峰会包进目标峰当中，当进样量达到80微升时，杂质峰完全包在目标峰中，如图三所示。这样会限制LC制备的单次制备量，并影响目标馏分的纯度。 图3.不同进样量的LC分析图谱。 以上实验表明LC技术不是分离制备牛樟芝目标物质的最佳选择! 超高效合相色谱(UltraPerformance Convergence ChromatographyIM， UPC2@)是基于超临界流体色谱的分离技术，它利用压缩CO，处于或接近超临界状态时的特有属性(即低粘度和高扩散性)以及亚2um颗粒填充色谱柱，显著提高了分离效率、速度，并与LC具有不同的选择性。如图四所示：采用UPC2/MS分析牛樟芝提取物，发现主要杂质在目标物质之后出峰，并且分离度相对LC分离结果得到了很大的改善，给制备方法开发提供了很大的空间，当增加进样量同时不会影响目标峰的纯度。 图4.UPC2/MS分析图谱。 将UPC?分析方法放大到超临界流体制备系统，对目标化合物进行制备，如图五所示，当增加进样量的时候目标峰和杂质峰还是能实现基线分离， 可以明显提高单次制备量。 图5.超临界流体制备系统的制备图谱。 将收集到的目标馏分用UPC2/MS分析，如图六所示，超临界流体制备系统收集的目标馏分中无明显杂质。 图6.UPC2/MS分析收集的目标馏分图谱。 相比LC的分析制备方案，UPC?放大到制备超临界流体色谱的方案，饭馏分溶剂后处理更方便，分离时间更短，单次制备量更高。LC制备每天只能制备0.25克目标化合物(采用19x150mm色谱柱)，却要消耗95升有机溶剂。采用同样尺寸的制备柱，超临界流体制备系统每天可制备3.5克目标化合物，但只消耗11升有机溶剂，可节省90%的溶剂成本，提高14倍制备效率。 扫一扫，关注沃特世微信 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 以超临界流体萃取、UPC²分析、制备超临界流体色谱的整体解决方案，可以更有针对性的对牛樟芝中的目标化合物进行提取，提取物杂质更少；UPC?可在2.5分钟内对牛樟芝提取物中的目标化合物和杂质实现基线分离；制备超临界流体色谱单次制备量显著提高，馏分溶剂后处理更方便，相比LC方法溶剂成本可节省90%，制备效率可提高14倍。 牛樟芝简称“樟芝”，至2012年从牛樟芝中已分离得到的化合物约225种。这些化合物包括大分子化合物（蛋白，核酸，多糖等），小分子化合物（木质素，芳香族化合物，苯醌类，马来酸和琥珀酸衍生物等），萜类化合物（单萜，二萜，羊毛甾烷型三萜，麦角甾烷型三萜，甾体等），核苷酸类化合物（碱基，核苷等），脂肪酸以及脂肪酸酯等。 沃特世提供以超临界流体萃取、UPC2分析、制备超临界流体色谱的整体解决方案，可以更有针对性的对牛樟芝中的目标化合物进行提取，提取物杂质更少；UPC2可在2.5分钟内对牛樟芝提取物中的目标化合物和杂质实现基线分离；制备超临界流体色谱单次制备量显著提高，馏分溶剂后处理更方便，相比LC方法溶剂成本可节省90%，制备效率可提高14倍。