乳制品及特殊膳食中雌酮、雌二醇、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮检测方案(固相萃取仪)

Agela Technologies Guaranteed Product QualityInnovation to Benefit Customers 奶粉中雌酮、雌二醇、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮的检测 应用编号： AF10022 1.参考方法 博纳艾杰尔内部方法。 2.实验材料 Cleanert PEP吡咯烷酮化聚苯乙烯/二乙烯基苯固相萃取柱(100mg/6mL， P/N：PE1006，博纳艾杰尔科技)； Cleanert Silica 硅胶固相萃取柱(1000mg/6mL， P/N：SI0006， 博纳艾杰尔科技)； 液相色谱柱 (Bonshell C18， 2.1×100mm， 2.7 um， P/N：SC921002-0，博纳艾杰尔科技)； 标准品：雌酮(CAS.No.53-16-7)、雌二醇 (CAS.No.50-28-2)、醋酸甲地孕酮 (CAS.No. 595-33-5)、醋酸氯地孕酮(CAS.No. 302-22-7)，购自中国药品生物制品检定所。 3. 实验步骤 Cleanert"PEP样品提取净化法 提取：取2g奶粉，加标，然后加12mL 80%乙腈，涡旋混匀两分钟后，离心(9000 r/min， 6 min)取 3mL上清液，加入9mL超纯水稀释，涡旋混匀后，待过 Cleanert"PEP柱净化。 净化步骤： 活化：以5mL乙腈，5 mL水活化 CleanrtPEP； 上样：把上述稀释后的样品溶液过柱，流速控制以1 mL/min 为宜； 淋洗：待样品溶液完全通过小柱后，用5 mL5%乙腈淋洗小柱，然后真空抽干 3 min； 洗脱：以3-5 mL 乙腈洗脱目标，收集流出液；浓缩：收集液以氮气吹干(40℃水浴)，后以50%甲醇水定容至1mL， 混匀后过0.22 um 尼龙针式过滤器过滤， 进LC-MS/MS 分析。 (以上萃取操作通过 Qdaura°卓睿全自动固相萃取仪完成) Cleanert Silica样品提取净化法 提取：取2g奶粉，加标，然后加12mL乙腈，涡旋混匀两分钟后，离心(9000 r/min， 6min) 取 3 mL上清液，待过 CleanertSilica 柱净化。 净化步骤： 活化：以5mL乙腈活化Cleanrt" Silica 小柱； 上样：把上述提取液过柱，收集流出液； 淋洗：以5mL乙腈洗涤小柱，收集流出液； 浓缩：合并以上流出液，以氮气吹干(40℃水 浴)， 后以50%甲醇水定容至1 mL混匀后 0.22 um尼龙针式过滤器过滤，进LC-MS/MS 分析。 (以上萃取操作通过 Qdaura°卓睿全自动固相萃取仪完成) 4.色谱条件 孕激素(醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮)测定 液相色谱条件： Bonshell C18， 2.1×100 mm， 2.7 um； 流动相：A：0.1%甲酸水，B：甲醇； 速：0.3mL/min： 温：40℃； 进样量：：10pL； 参考质谱条件：电离源：电喷雾正离子模式。 雌激素(雌二醇、雌酮)测定 色谱条件： Bonshell C18， 2.1×100 mm， 2.7 um； 流动相：A：水， B：乙腈； 流速：0.3mL/min；柱 温：40℃； 进样量：10pL； 参考质谱条件：电离源：电喷雾负离子模式。 5.实验结果及谱图 结果见图1、图2。用 Cleanert" PEP (反相)或 CleanertSilica (正相)两种净化手段均可到达满意的回收率和净化效果，添加浓度在25 ppb 时回收率可达到80%。用 Bonshell色谱柱可以实现样品的快速分离，大大提高工作效率。雌二醇和雌酮两种激素，质谱响应偏低，质谱条件需要进一步优化。本实验结果采用单点定量判定，结果可能有失偏颇，详细数据需做基质添加标准曲线确证，方法的精密度，稳定性等亦需要进一步确证。 Best Value 图1两种孕激素总离子流图和选择离子流图(标品) 图2两种雌激素总离子流图和选择离子子图(奶粉样品) 6.订货信息 名称 规格 订货号 Cleanert" PEP 固相萃取柱 100mg /6mL，30/PK PE1006 Cleanert Silica 固相萃取柱 1000mg /6mL，30/PK SIO006 Bonshell C18 2.1×100mm， 2.7 um SC921002-0 雌酮 CAS.No. 53-16-7 100849 雌二醇 CAS.No.50-28-2 100182 醋酸甲地孕酮 CAS.No. 595-33-5 100171 醋酸氯地孕酮 CAS.No. 302-22-7 100011 Qdaura"卓睿全自动固相萃取仪 4通道24位连续处理 SPE-40 www.agela.com.cn— 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!