肉制品中农兽药残留检测方案

Guaranteed Product Quality Agela Technologies 猪肉中泰乐菌素残留量检测 LC-MS/MS法 泰乐菌素(Tylosin)， 亦称泰农、泰乐霉素，是美国于1959年从弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)的培养液中获得的一种大环内酯类抗生素，对支原体有特效，对多种G+菌具有很强的抗菌作用，还对部分G-菌、弯杆菌、螺旋体及球虫具有抑制作用。其产品形式有酒石酸盐、磷酸盐、盐酸盐、硫酸盐及乳酸盐，易溶于水，被广泛的应用于畜牧业的畜禽疾病防治及促生长的饲料添加剂。2006年欧盟成员国全面禁止使用抗生素作为促生长剂。欧盟对肉制品中泰乐菌素的最高残留量规定为100ug/kg。我国农业部在2002年公告的《关于动物性食品中兽药最高残留的通知》中，规定泰乐菌素在鸡、猪、牛的肌肉、脂肪、肝、肾组织中的最高残留量为200pg/kg. 1.样品提取 称取5.0 g(精确到0.01g)均质好的样品，置于50 mL离心管中，加入20mL乙腈，用均质器均质1 min， 在振荡器上振荡10 min， 4200 rpm离心5 min， 取上清液于另一50 mL离心管中；再加入20 mL乙腈于样品残渣，重复提取一次，合并上清液于50 mL离心管中，用乙腈定容至50 mL。移取10mL提取液，加入30mL正己烷，涡旋振荡2 min， 以4200rpm离心5 min， 弃去正己烷，下层提取液于50℃水浴氮气浓缩至近干。用10 mL磷酸盐缓冲液分两次溶解残留物，作为待净化液。 2.净化方法 先将Cleanert" PEP-2 (500mg /6mL)小柱分别用5 mL甲醇，5mL水，5mL磷酸盐缓冲液活化平衡；然后将待净化液过柱(流速控制在1 mL/min)；用5 mL水和5 mL甲醇-水(2+8)洗柱，弃去全部流出液，小柱用真空泵抽干30 min；最后用10 mL甲醇洗脱。收集洗脱液于45℃氮气吹干，用1mL 10%甲醇-水溶液溶解残留物，过0.22 um滤膜后待测。 3.检测方法 3.1色谱条件 色谱柱： VenusilMP C18， 2.1×50 mm， 5 um， 100A； 流动相：A相-0.1%甲酸水，B相-0.1%甲酸乙腈 柱 温：30℃； 进样量：10uL； 梯度洗脱：见表1 表1液相色谱梯度洗脱条件 时间(min) 流速(mL/min) A/% B/% 0.00 0.30 80.0 20.0 1.00 0.30 80.0 20.0 2.50 0.30 5.0 95.0 4.00 0.30 5.0 95.0 6.00 0.30 80.0 20.0 15.00 0.30 80.0 20.0 3.2质谱条件 离子源：电喷雾离子源 扫描方式：正离子扫描 电喷雾电压：5500V 雾化气压力：50 psi 气帘气压力：15 psi 辅助气压力：45 psi 离子源温度：550℃ 采集方式：多反应监测(MRM) Q1、Q3均为单位分辨率 质谱参数(见表2) 表2泰乐菌素的质谱参数 化合物 Q1 Q3 CE/V 泰乐菌素 (Tylosin) 916.5 174.2 61 145.1 61 4.实验结果 由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测泰乐菌素，加标量为4.0 ug/kg、20.0 ug/kg加标回收率在80%~100%之间， RSD值小于10%，能够满足检测要求。由图1和图2可看出经Cleanert"PEP-2固相萃取柱净化，采用Venusil" MP C18色谱柱检测得到的泰乐菌素峰形良好，且保留时间稳定。 表3泰乐菌素加标回收实验结果(n=3) 物质名称 加标量/(ug/kg) 处理加标回收率/% RSD/% RT/min 泰乐菌素 (Tylosin) 4.0 91.56 4.35 9.59 20.0 88.74 1.31 图1泰乐菌素样品加标4.0 pg/kg 液相色谱/串联质谱质量色谱图 图2泰乐菌素样品加标 20.0 pg/kg 液相色谱/串联质谱质量色谱图 结论： 本实验建立了泰乐菌素残留量的LC-MS/MS检测方法，并结合固相萃取技术对猪肉中泰乐菌素的含量进行了测定。对于加标量为4.0 ug/kg、20.0 ug/kg的样品进行了检测，回收率在80%~100%，符合国标要求。固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中泰乐菌素的残留量。 产品名称 规格包装 订货号 VenusilMP C18 5um，100A，2.1×50mm VA950502-0 Cleanert PEP-2 500mg/6mL，30/pk PE5006-2 保护柱套 适用于4.6×10mm和2.1×10mm SH-100 直联式保护柱芯 5um，100A，2.1×10mm VA950102-0S 1.5mL样品瓶 短螺纹透明带书写 32×11.6mm，100/pk 1109-0519 1.5mL样品瓶盖 9mm中心孔蓝盖，红色橡胶/ 米色PTFE隔垫，45. Shore A 1.0mm，100/pk 0915-1819 微孔滤膜(Nylon) 13mm，0.22um，200/pk AS021320 -次性注射器 2mL两件式无针头，100/pk LZSQ-2ML 乙腈UV级 4L/瓶，色谱纯 015-4 正己烷HPLC 4L/瓶，色谱纯 AH216-4 甲醇 4L/瓶，色谱纯 S230-4 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载! Www.agela.com.cn—