肉制品中农兽药残留检测方案

Best ValueGuaranteed Product QualityInnovation to Benefit Customers Agela Technologies 畜禽肉中替米考星残留量检测 LC-MS/MS 法 替米考星(Tilmicosin)是一种较新的以泰乐菌素为前体半合成的畜禽专用大环内酯类抗生素，20世纪80年代由英国Elanco动物保健品公司首先开发成功，主要用于牛、奶牛、山羊、绵羊、猪、鸡等动物由敏感菌引起的感染性疾病，特别是畜禽呼吸道疾病如猪放线杆菌性胸膜肺炎、牛溶血性及多杀性巴氏杆菌病和鸡支原体病，，同时对奶牛乳房炎主要菌系具有良好的抗菌作用。GB/T20762-2006规定了在畜禽肉中替米考星方法检出限为1 ug/kg。 1.样品提取 称取5.00g(精确到0.01g)均质好的样品，置于50.0 mL离心管中，加入15.0 mL乙腈，用均质器均质1 min， 在振荡器上振荡10 min， 4200 rpm离心5 min， 取上清液加入2g氯化钠和10.0mL正己烷，振荡器上振荡10 min， 4200 rpm离心10 min， 小心吸取中间乙腈层12.0mL于另一离心管中，氮气吹至近干。 2.净化方法 先将Cleanert" PEP-2(500mg/6mL)小柱分别用10.0 mL甲醇、10.0mL水、5.0 mL 2%氯化钠溶液和5.0 mL磷酸二氢铵缓冲溶液活化平衡，然后用7.0 mL磷酸二氢铵缓冲溶液分两次溶解残液过柱(流速控制在2~3 mL/min)， 弃去滤液；再用10.0 mL水和5.0mL甲醇-水(2：3. v/v)淋洗SPE柱，弃去淋洗液，将小柱负压抽干；最后用10.0 mL甲醇洗脱于锥形试管中，45℃氮气吹干。用1 mL 0.1%乙酸铵水溶液溶解残留物，过0.22 um滤膜后待测。 3.检测方法 3.1色谱条件 色谱柱： VenusilASB C18，2.1×100mm， 5 um， 150A； 流动相：A相-10mM乙酸铵溶液， B相-乙腈柱 温：35℃：进样量：5uL； 梯度洗脱：见表1 表1液相色谱梯度洗脱条件 时间(min) 流速(mL/min) A/% B/% 0.00 0.35 95.0 5.0 1.50 0.35 95.0 5.0 2.00 0.35 60.0 40.0 4.00 0.35 60.0 40.0 4.01 0.35 10.0 90.0 5.00 0.35 10.0 90.0 5.01 0.35 95.0 5.0 7.00 0.35 95.0 5.0 3.2质谱条件 离子源：电喷雾离子源 扫描方式：正离子扫描 电喷雾电压：5500V 雾化气压力：60psi 气帘气压力：13psi 辅助气压力：65 psi 离子源温度：600℃ 采集方式：多反应监测(MRM) Q1、Q3均为单位分辨率 质谱参数(见表2) 表2替米考星的质谱参数 化合物 Q1 Q3 CE/V 替米考星 (Tilmicosin) 869.8 696.7 58 174.5 60 4.实验结果及结论 由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测替米考星，加标量为1.0 ug/kg、20.0 ug/kg加标回收率在90%~100%之间， RSD值小于10%，能够满足检测要求。由图1和图2可看出经Cleanert"PEP-2固相萃取柱净化，采用Venusil ASB C18色谱柱检测得到的替米考星峰形良好，且保留时间稳定。 表3替米考星加标回收实验结果(n=3) 物质名称 加标量/(ug/kg) 处理加标回收率/% RSD/% RT/min 替米考星 (Tilmicosin) 1.0 92.52 3.88 2.50 20.0 91.91 4.21 图1替米考星考品加标 1.0 u g/kg 液相色谱/串联质谱质量色谱图 图2替米考星样品加标 20.0 pg/kg 液相色谱/串联质谱质量色谱图 本实验建立了替米考星残留量量测的LC-MS/MS检测方法，并结合固相萃取技术对禽畜类肉中替米考星的残留量进行了测定。对于加标量为1.0 pg/kg、20.0 ug/kg的样品进行了检测，回收率在90%~100%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中的替米考星残留量 5.订货信息 产品名称 规格包装 订货号 VenusilASB C18 5 um， 150 A， 2.1×100 mm VS951002-0 Cleanert"PEP-2 500mg/6mL， 30/pk PE5006-2 保护柱套 适用于4.6×10mm和2.1×10 mm SH-100 直联式保护柱芯 5 um， 150 A，2.1×10 mm VS950102-0S 1.5mL样品瓶 短螺纹透明带书写32×11.6 mm， 100/pk 1109-0519 1.5mL样品瓶盖 9mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色PTFE隔垫， 45. Shore A1.0 mm， 100/pk 0915-1819 针式过滤器(Nylon) 13 mm， 0.22 um， 200/pk AS021320 一次性注射器 2mL两件式无针头， 100/pk LZSQ-2ML 乙腈UV级 4L/瓶，色谱纯 015-4 正己烷HPLC 4L/瓶，色谱纯 AH216-4 甲醇 4L/瓶，色谱纯 S230-4 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载! www.agela.com.cn—