禽类中戊型肝炎检测方案

禽类戊型肝炎(HEV)酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 96T 使用目的： 本试剂盒用于测定禽类血清、血浆及相关液体样本中戊型肝炎(HEV)表达。实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中禽类类型肝炎(HEV)表达。用纯化的禽类戊型肝炎(HEV)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中戊型肝炎(HEV)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP标记的戊型肝炎(HEV)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中禽类戈型肝炎(HEV)的存在与否。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 阳性对照 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 阴性对照 0.5ml×1瓶 4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2.不能检测含 NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP) 活性。 操作步骤 1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同) 2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50ul。然后在待测样品孔先加样品稀稀液 40pl， 然后再加待测样品 10pl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀， 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50pl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3. 8. 洗涤：操作同5. 9. 显色：每孔先加入显色剂 A50ul， 再加入显色剂 B50ul， 轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 10.线终止：每孔加终止液50ul，终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 计算和结果判定： 试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00；阴性对照平均值≤0.10 临界值 (CUTOFF)计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定：样品OD 值<临界值(CUTOFF)者为戊型肝炎(HEV)阴性 阳性判定：样品OD值临界值 (CUTOFF) 者为戊型肝炎 (HEV)阳性 注意事项 1.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。 2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 5.底物请避光保存。 6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm 7.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M 的硫酸，使用时必须注意安全。 保存条件及有效期 1.试剂盒保存：；2-8℃。 2.有效期：6个月