金枪鱼肉中砷检测方案

北京同立在线系统集成有限公司 电话：010-68228642 性能参数测试报告 摘要 以As3+ 为例 线性范围 Y=2.596216e-003（x）+1.487372 R = 0.9936738 检出限 1.7 ppb 标准偏差(n=5) 508.1 相对标准偏差％ 3.24 1实验试剂与仪器 1.1 试剂 配制四种形态砷的标准试剂MMA、DMA、As3+、As5+， 流动相：磷酸氢二氨缓冲溶液，用于阴离子色谱柱。 0.7% HNO3 溶液，用于阳离子色谱柱。K2S2O8和NaOH混合溶液、KBH4和NaOH混合溶液、HCl溶液。化学试剂均为分析纯。 1.2 仪器 岛津公司砷元素形态分析仪，测量波长为193.7nm, 低压紫外灯(8w)，Hamilton PRP－X100（250mm×4.1mm）的阴离子色谱柱、Dionex Ionpac CS 10 （4mm×250mm）的阳离子柱、六通阀定量管（100微升）; 原子化器的工作温度为850℃。 2分析过程 2.1 阴离子柱的分析过程 依次启动原子吸收光谱仪、HPLC和在线消解氢化物发生器。待基线平稳后，开始工作。 100微升样品注入HPLC,经分离后的馏出液经在线消解氢化物发生器产生氢化物，由原子吸收光谱仪测量砷化氢的吸收信号。 2.2 阳离子柱的分析过程 依次启动原子吸收光谱仪、HPLC和在线消解氢化物发生器。待基线平稳后，开始工作。 100微升样品注入液相色谱仪, 经分离后，馏出液经在线消解氢化物发生器，由原子吸收光谱仪测量砷化氢气体。 3结果 3.1阴离子柱的分离度结果 3.1.1分离度 取浓度为60ppb的混合标样溶液。按分析过程2.1 操作。依据如下公式计算联用系统的分离度：R＝2(t2-t1)/(w1+w2) 其中R为分离度，t为色谱峰的保留时间，w为峰底宽度。 结果见表1 表1 阴离子柱分离度（测量次数: n=5） 形态 As(III) DMA MMA As(V) T 143.2 189.7 278.0 465.7 R 2.23 3.83 6.92 图1 阴离子柱色谱分离度测试图（60ppb） 结果表明：四种形态砷分离良好，其分离度R值均大于1。 3.1.2线性范围 分别取浓度为20ppb， 40ppb, 60ppb的As（III），As（V），DMA，MMA混合标样进样，按分析过程2.1 操作。用随机的数据处理系统计算峰面积。结果见表2、图2。 表2 各组分线性范围 Y = aX + b a b R^2 R As3+ 2.596216e-003 1.487372 0.9873877 0.9936738 DMA 7.754685e-003 8.9017 0.9999431 0.9999716 MMA 5.482422e-003 2.926672 0.9999596 0.9999798 As（V） 1.078845e-002 9.112548 0.9999882 0.9999941 图2 MMA 20~60 PPb 线性图 3.1.3 检出限 测量系统噪声平均值（空白重复7次），另根据四种形态砷的线性图分别得到了对应形态砷仪器的灵敏度，按照检出限大于等于三倍的噪声值（IUPAC），计算出四种形态砷的检出限。结果见表3： 表3 四种形态砷的检出限 砷形态 检出限 As（III） 1.7 ppb As（V） 5.9 ppb DMA 3.3 ppb MMA 8.5ppb 3.1.4 重复性测试 取浓度为60ppb的混合标样溶液，重复进样5次。结果见表4 。 表4 重现性及精密度考察 形态浓度 As(Ⅲ) DMA MMA As（V） 60ppb 15860 5429 9544 4560 60ppb 16423 5756 10257 4750 60ppb 15124 5431 10229 5593 60ppb 15586 5696 10136 5394 60ppb 15318 5539 10100 5427 平均值 15662 5570 10053 5145 SD 508.1 150.4 292.1 458.2 RSD(%) 3.24 2.71 2.91 8.91 由表4可以看出，试验的RSD均小于9 %。 3.2阳离子柱的分离度结果 3.2.1分离度 取浓度为100ppb的混合标样溶液（DMA，MMA，AsB, AsC）。100微升进样，按分析过程2.2 操作。依据如下公式计算联用系统的分离度：R＝2(t2-t1)/(w1+w2) 其中R为分离度，t为色谱峰的保留时间，w为峰底宽度。 结果见表5 表5 阳离子柱分离度表 MMA DMA AsB AsC T 103.2 270.6 451.9 696.9 R 4.82 3.55 3.53 图3 阳离子柱色谱分离度测试 从表中数据可知，四种砷的R值均大于1。 3.2.2 线性范围 分别取浓度为100ppb， 200ppb, 400ppb的DMA，MMA，ASB,ASC混合标样进样，按分析过程2.2 操作。岛津色谱数据处理软件计算峰面积。结果见表6、表7、图4。 表6 四种形态砷的工作曲线数据（面积值） 形态浓度 MMA DMA ASB ASC 100ppb 3713 7647 5022 4160 200ppb 6750 13414 8715 7785 400ppb 13547 27856 17728 14761 r2 0.999 0.999 0.999 0.999 表7 各形态砷线性方程及偏差 Y = aX + b a b R^2 R 平均RF RF标准偏差 RF相对标准偏差 MMA 3.032503e-002 -9.362953 0.9992661 0.9996330 2.869708e-002 1.527224e-003 5.321878 DMA 1.465263e-002 -5.5868 0.9972155 0.9986068 1.411562e-002 9.399988e-004 6.659282 ASB 2.33455e-002 -11.52793 0.9977885 0.9988936 2.180744e-002 1.653262e-003 7.581182 SC 2.83474e-002 -19.01507 0.9999084 0.9999542 2.560941e-002 1.530982e-003 5.978199 图4 MMA线性方程图 3.2.3检出限 测量系统噪声平均值（空白重复7次），另根据四种形态砷的线性图分别得到了对应形态砷仪器的灵敏度，按照检出限大于等于三倍的噪声值（IUPAC），计算出四种形态砷的检出限。结果见表8： 表8 四种形态砷的检出限 砷形态 检出限 MMA 7.5 ppb DMA 4.6ppb ASB 9.7 ppb ASC 17 ppb 3.2.4重复性测试 取浓度为300ppb的混合标样溶液，重复进样5次。结果见表9 表9 联用系统的标准偏差 （面积值） 形态浓度 MMA DMA ASB ASC 300ppb 9386 18189 11406 8231 300ppb 8960 17875 11366 8716 300ppb 8748 17235 10755 8447 300ppb 8624 17645 10831 8392 300ppb 8855 17629 10852 9177 平均值 8914 17714 11042 8593 SD 290.37 351.20 316.54 370.45 RSD(%) 3.26 1.98 2.87 4.31 由表9可知，试验的RSD均小于5 %。 4．样品测试 HPLC-在线消解氢化物发生器-AA联用系统测定金枪鱼中甜菜碱的含量。 4.1实验部分 4.1.1所用仪器及参数： 岛津公司砷元素形态分析仪。原子吸收灯电流：12mA；石英管温度：850 OC。 Dionex Ionpac CS 10 （4mm×250mm）的阳离子柱。 同立公司 LA-510 在线消解氢化物发生器。6W 253.7nm 光管 流动相为0.7%的HNO3; 流速1.2ml/min；1OO微升的采样环进样。 紫外消解：3％Na2S2O4 和2％的NaOH混合溶液。 氢化物发生：1.5％的NaBH4和0.5％的NaOH混合溶液；15％的盐酸。 4.1.2实验方法 配制浓度为100 ppb，200ppb和 400ppb的DMA，MMA，AsB, AsC混合标准溶液。绘制标准曲线。 样品前处理： 首先将金枪鱼肉粉碎，冻干。称取0.5g样品，加入 1：1的甲醇和水浸泡过夜，用超声波辅助萃取十五分钟，离心机离心得到上清液。转移清液至烧杯，重复萃取三次。将上清液在较低温度（50℃以下）用N2进行吹扫甲醇。最后将清液转移至25ml容量瓶定容。取100微升进样分析。 4.1.3实验结果 图5 样品色谱图 （峰面积 10131.2 , 浓度为 227.74ppb） 讨论：实验全过程从HPLC进样开始到得到测试结果，仅10余分钟。若按传统的方法，依次收集馏分，逐一浓缩至干。在分别消解、浓缩、氢化物发生…… 至少需要数小时。在线消解氢化物发生器将高压液相色谱仪与原子吸收光谱仪共同组建成HPLC-AA联用系统，大大提高了测定元素可挥发性化合物的速度。 Y = aX + b a = 5.482422e-003 b = 2.926672 R^2 = 0.9999596 R = 0.9999789 R = 0.9999798 R = 0.9999798 R = 0.9999798 MMA Y = aX + b a = 3.032503e-002 b = -9.362953 R^2 = 0.9992661 R = 0.9996330 平均RF : 2.869708e-002 RF标准偏差: 1.527224e-003 RF相对标准偏差: 5.321878 RF相对标准偏差: 5.321878 平均RF : 2.869708e-002 R = 0.9996330 R = 0.9996330 = 3.032503e-002 地址：北京市海淀区太平路甲18号西南饭店写字楼321室, 100039 www.vv-online.com