正常大鼠肾细胞的应用与培养步骤及实验方法！ 一、背景 正常大鼠肾细胞是一种常用的细胞系，源自大鼠肾脏组织，并通过克隆培养而得来。该细胞系具有上皮细胞样的形态，并具有贴壁生长的特性。 正常大鼠肾细胞在体外培养时，推荐使用DMEM培养基，并添加5%的胎牛血清和1%的双抗。该细胞系的传代比例通常为1:2，并在消化2-3分钟后进行。 正常大鼠肾细胞的生长特征是每周可以倍增2至3次，其冻存条件为使用90%的FBS和DMSO的混合液作为冻存液，温度为液氮。 正常大鼠肾细胞广泛用于科学研究，特别是在肾病研究领域中具有重要作用。然而，它并不应用于动物或人类疾病的治疗。 二、正常大鼠肾细胞培养步骤 1、培养基及培养冻存条件准备： 1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、正常大鼠肾细胞处理： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。 3）正常大鼠肾细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； 1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。 3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 正常大鼠肾细胞可以用于内质网应激和自噬对顺铂诱导NRK-52E细胞凋亡的影响： 通过体外复制“顺铂(Cisplatin)致NRK-52E细胞损伤模型”来模拟顺铂肾毒性,探究顺铂致肾小管上皮细胞凋亡的可能机制,并观察利用内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸钠(TUDCA)、自噬抑制剂氯喹(CQ)后肾小管上皮细胞的凋亡情况,为研究其医治靶点奠定理论基础。 实验方法： 1、MTT法检测Cisplatin对NRK-52E细胞活性的影响; 2、Annexin V-FITC/PI双染、流式细胞术检测NRK-52E细胞凋亡率; 3、Western blot检测cleaved caspase-3、GRP78、CHOP、LC3-Ⅱ的表达; 4、RTCA检测细胞增殖;5.Hoechst染色观察细胞核形态。 实验结果：MTT法检测结果显示,顺铂对细胞活性的影响呈剂量依赖性;流式细胞术结果显示,Cisplatin及联合TUDCA、CQ能增加NRK-52E细胞凋亡率;Western blot结果显示,顺铂组凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP、自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达高于对照组;RTCA检测结果显示,与对照组的生长曲线相比,顺铂组、TUDCA+顺铂组、CQ+顺铂组的生长曲线明显下降,且TUDCA+顺铂组、CQ+顺铂组下降更明显;Hoechst染色结果显示,顺铂组、TUDCA+顺铂组、CQ+顺铂组,与对照组相比,凋亡核阳性细胞数目明显增加。 实验结论： 1、顺铂致肾小管上皮细胞损伤引发内质网应激、自噬。 2、抑制内质网应激、抑制自噬,明显增加了顺铂对肾小管上皮细胞的损伤,诱导细胞凋亡。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   小鼠肾足突基底膜组织提取物的背景与应用！ 一、背景 小鼠肾足突基底膜组织提取物是小鼠肾足突基底膜组织提取产物包含小鼠肾足突基底膜组织不同种类的细胞可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。肾足突基底膜是肾小球过滤膜的一部分，组成滤膜的中层。 足细胞（podocyte），即肾小囊脏层上皮细胞，它附着于肾小球基底膜（GBM）的外侧，连同血管内皮细胞和肾小球基膜一起构成了肾小球血液滤过屏障。足细胞特殊的解剖位置，使得其体内研究较为困难；又由于正常成年机体的肾脏足细胞是一种终末分化细胞，体外培养的原代细胞不能增殖。足细胞呈星型多突状，胞体较大，由胞体伸出许多突起，又称足突（FP），呈指状交叉覆盖于GBM外表面，并通过黏附分子和蛋白多糖分子与GBM相连。 扫描电镜观察，可见胞体伸出几个大的初级足突，进而分出许多指状的次级突起。相邻两个足细胞之间的次级突起相互交错穿插，形成栅栏状，紧贴于毛细血管基膜外面。两相邻的足细胞之间的裂隙称为裂孔，直径约为25nm(也有的书刊标注为40nm)，其表面覆盖着一层拉链状的结构-裂孔膜，厚度约为4-6nm，是血浆蛋白滤液的最后屏障，也是液体进出足细胞的地方。裂孔表面有硫酸蛋白多糖等组成阴离子外衣，是肾小球电荷屏障的重要组分之一。 足突通过肌动蛋白、肌球蛋白等结构蛋白组成的动态的舒张系统调调解着GBM的肌原张力，从而使足细胞连同肾小球内皮细胞和其基膜一起共抵抗毛细血管内的静水压，维持着毛细血管襻的结构稳定。并且足突也可以通过其收缩与扩张改变裂孔的大小和滤过膜的面积，即而改变超滤稀疏，调节肾小球的过滤功能。 足细胞在正常情况下可以分泌GBM的主要组成成分IV型胶原和纤维连接蛋白（FN）,在促肾纤维化引资等刺激下还能分泌具有降解GBM作用的基质金属蛋白酶（MMPs）和组织蛋白酶，从而在GBM的代谢平衡中发挥重要作用。 二、应用 小鼠肾足突基底膜组织提取物可用于NOD2通过调控TRPC6离子通道的表达及活性参与高同型半胱氨酸血症引起的肾损伤研究： 同型半胱氨酸是体内甲硫氨酸循环的中间产物,其代谢异常所导致的高同型半胱氨酸血症是终末期肾病(end stage renal disease,ESRD),以及心血管疾病并发症导致的终末期肾病发生发展中的一个独立危险因子,但是高同型半胱氨酸所致肾损伤的发生发展机制迄今尚未完全明确。NOD2(nucleotide binding oligomerzation domain2)属于模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRRs)家族中的NLRs(NOD-1ike receptors,NLRs)亚家族成员,在免疫调控与炎性反应中起着重要的作用,前期研究证实其在肾脏多种细胞中表达并且有实验证明小鼠NOD2缺失对肾脏缺血再灌注和糖尿病肾病中具有保护作用。 TRPC6(transient receptor potential cation channe6,TRPC6)是具有钙离子高选择性的瞬时电位阳离子通道,作为足细胞裂孔膜的重要组成蛋白之一,其过度活化可致足细胞内钙离子浓度增高,从而导致足细胞损伤和功能障碍,引起肾小球疾病发生。但是,高同型半胱氨酸血症中,NOD2是否参与了肾损伤的发生发展,及其是否与TRPC6存在调控关系并参与此病理过程,至今尚未见报道。 为此,本课题分别从体内和体外两方面探讨在高同型半胱酸血症中,细胞内固有免疫受体NOD2在肾小球硬化中的作用以及对TRPC6的调控机制,为防治高同型半胱氨酸症导致的终末期肾病提供新的治疗策略。采用PAS染色观察肾脏的形态学变化和电镜观察足细胞形态学变化；ELISA检测相关致炎因子和趋化因子的水平。分别采用定量RT-PCR、蛋白免疫印迹法和免疫组织荧光化学法,检测NOD2在小鼠肾皮质以及肾小球足细胞中的表达变化。 NOD2对TRPC6通道的调控及小鼠足细胞损伤中的作用体外培养肾小球上皮细胞(足细胞),并经同型半胱氨酸刺激后,分别利用实时定量RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测足细胞中NOD2、TRPC6和nephrin的表达变化；MDP诱导足细胞内NOD2活化,以及高同型半胱氨酸刺激转染shRNA-NOD2质粒获得的NOD2基因沉默足细胞后,重复检测上述指标。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                                      单细胞增生李斯特菌的危害与症状及预防与治疗！ 百欧博伟生物：本文介绍了李斯特菌的危害以及患病症状、易感人群等等，对李斯特菌的防治提供了支持。 1、名称生物体 单细胞增生李斯特菌，革兰氏阳性菌，依靠鞭毛运动。研究表明，1～10％的人中的可能肠道中携带单细胞增生李斯特式菌。已发现至少37种哺乳动物，包括驯养的和野生的，以及至少17种鸟类，可能还有一些鱼类和贝类体内存在这种菌。它可从土壤、青贮饲料和其他环境资源中分离出来。单细胞增生李斯特菌对冷冻和干燥的有害影响能够产生较强的抵抗力。大部分单细胞增生李斯特菌一定程度上是致病菌。 2、急性病名称 李斯特菌病室以单细胞增生李斯特氏菌引起的疾病的统称。 3、患病症状 李斯特菌病是从血液、脑脊液，或其他正常情况应该无菌的部位（例如胎盘、胎儿）分离的李斯特菌体的临床上的定义。 李斯特菌病的表现形式包括败血症、脑膜炎（或脑膜脑炎）、脑炎，以及感染孕妇的子宫或宫颈可能引发自然流产（在妊娠末期或者晚期妊娠）或死胎。上述疾病的发作之前通常是有流感样症状包括持续发烧。 据报道，恶心、呕吐、腹泻等胃肠症状可能产生于更严重的李斯特菌病症之前，也可能是唯一的症状表现。胃肠症状的流行病学涉及到使用解酸剂或西咪替丁。严重的李斯特菌病发病时间尚不清楚，可能从数天到三周。胃肠道症状的表现时间也不明，但可能超过12小时。 单增李斯特菌的感染剂量未知，但应该是随菌株和患者的敏感性而异的。案例涉及到原料奶或者可能未巴氏杀菌过的奶，保守地说在较敏感的人中可引发疾病的少于1000例。单增李斯特菌会侵入肠胃上皮组织。它是血源性（败血症）细菌，一旦进入主体的单核细胞、巨噬细胞或多型核白细胞就能增长。它存在于吞噬细胞的胞内，能进入大脑，也能通过胎盘由孕妇传染给胎儿。李斯特菌病的发病机制在于它在吞噬宿主细胞的存活和繁殖能力。 4、人类疾病的诊断 李斯特菌病只能通过培养机体的血液，脑脊液，或大便（尽管后者有困难和局限）来诊断。 5、相关食物 与单增李斯特菌有关的食物有：生牛奶、未经巴氏杀菌液体奶、奶酪（特别是软质成熟奶酪）、冰淇淋、生蔬菜、生的发酵香肠，生的和熟的禽肉、所有的生肉、生鱼和熏鱼。单增李斯特菌能够生长在温度低至3℃的冷冻食品中。 6、发病的频率 疾病预防控制中心收集的1987年预期发病数据表明，在美国每年至少有1600例李斯特菌病中有415死亡。其中大部分是突发案例，很难将流行病学与食品联系起来。 7、并发症 大多数健康的人可能不表现出任何症状。该病一般临床表现为“并发症”。当李斯特氏脑膜炎发生时，整体死亡率可高达70％，败血症的50％并发脑膜炎，而产期/新生儿感染后并发脑膜炎的超过80％。妊娠期间感染的妈妈通常幸存。有报道指出青霉素或氨苄青霉素能治愈该病，效青霉素过敏患者可使用甲氧苄氨嘧啶和磺胺甲基异恶唑。 8、目标人群 孕妇/胎儿——围产期和新生儿感染； 因为激素、抗癌药物，移植抑制治疗和艾滋病等导致的免疫功能低下者； 癌症患者——特别是白血病患者； 不经常报道——糖尿病，肝硬化，哮喘，和溃疡性结肠炎的病人； 正常的人——有报告表明，正常、健康的人虽然可使解酸剂或西咪替丁预防但是也有风险。一起瑞士奶酪引发李斯特菌病的表明，一个完全健康的人如果食用被菌体严重污染的食品也可以被感染。 9、食品分析 用于食品分析的方法是复杂和费时。现在的FDA方法，1990年9月修订，要求富集24和48小时，之后需要大量的其他实验。鉴定总时间要5至7天，但关于非放射性标记的DNA探针技术的特定声明指出应尽快允许简单和快速的方法来分离并确认可疑菌株。重组DNA技术将来可能需要2～3天阳性分析。目前，FDA正在修订使其方法能适用于含菌量极低的食品。 10、数据来源 欲了解最近的更多信息，请看CDC的Morbidity and Mortality Weekly Reports。 11、文献资源 The FDA health alert for Hispanic pregnant women concerns the risk of listeriosis from soft cheeses. The CDC provides similar information in Spanish. FSIS also has updated consumer information on Listeria monocytogenes. The CDC produces an information brochure on preventing Listeriosis. 12、其他资源 A Loci index for genome Listeria monocytogenes is available from GenBank. 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  金黄色葡萄球菌在食品中的来源及流行性病学研究！ 百欧博伟生物：本文介绍了引起食源性疾病的金黄色葡萄球菌的生物学特性、引发的疾病及病症、食品中的来源以及流行性病学研究。 1、微生物名称 金黄色葡萄球菌是一种球形细菌（球菌），显微镜下成对、短链或成串、葡萄状群集。该菌是革兰氏阳性菌。有些菌株是蛋白质能生产高耐热的致病性毒素。 2、金黄色葡萄球菌引起的食物中毒（金黄色葡萄球菌肠毒素中毒、金黄色葡萄球菌肠毒血症）是以某些金黄色葡萄球菌菌株产生肠毒素的情况来命名的。 3、疾病症状 金黄色葡萄球菌食物中毒症状一般发病迅速，很多时候是急性的，关键看个体对于毒素的易感程度、食品被污染程度、摄入毒素的量、受害人的健康状况。 最常见的症状是恶心、呕吐、干呕、腹痛和虚脱。有些人可能并不表现相关病状。严重的出现头痛、肌肉抽筋、血压和脉冲瞬变。恢复一般需要两天，但异常情况下需要三天，严重时更长。 感染剂量——被污染的食物中不足1.0微克毒素就会达到金黄色葡萄球菌中毒症状的剂量。 每克食物中金黄色葡萄球菌超过10万时就能达到这样的毒素水平。 4、人类疾病的诊断 在金黄色葡萄球菌引起的食源性疾病诊断中，对受害人适当的访谈和收集和分析流行病学数据是必不可少的。有毒食物应该被收集并进行葡萄球菌检验。葡萄球菌肠毒素的大量存在很好地间接证明了食物中含有毒素。最有说服力的试验是疾病与特定的食物有联系，或者有多种载体的情况下，从食品样品中检测出毒素。食物进行处理可以杀死葡萄球菌，如巴氏杀菌或加热，直接用显微镜观察被污染的食物有助于诊断。大量血清学方法可以测定从食物中分离出的金黄色葡萄球菌产生的肠毒素，分离和检测食物中肠毒素的方法已成功地开发并用于疾病的诊断。当活的金黄色葡萄球菌从被污染的食物中、患者和疑似携带病原菌的食品工人中分离出来时，噬菌体定型就非常有用了。 5、食品污染 常引起金黄色葡萄球菌食物中毒的食物包括肉类和肉类制品、家禽、蛋制品；沙拉如鸡蛋，金枪鱼，鸡肉，马铃薯，通心粉；面包制品如奶油夹心点心、奶油馅饼、巧克力饼、夹心三明治，奶及奶制品。哪些制备过程中需要大量的操作和制备后存放在温度略高的环境中的食品常常与金黄色葡萄球菌引发的食物中毒有关。葡萄球菌存在的环境有空气、粉尘、下水道、水、牛奶、食品或食品设备、环境表面、人类和动物。人类和动物是主要的储主。葡萄球菌存在于健康人的鼻腔、喉咙、头发和50%皮肤或更多机体组织内。对于与患者和医院环境有关或者有接触的人发病率更高。虽然食品加工者通常是引发食物中毒的食品污染的主要来源，但是设备和环境表面也可以是金黄色葡萄球菌的污染源。人中毒是由于摄入了在食品中的某些金黄色葡萄球菌菌株产生的肠毒素，通常是这些食物有没有保存在够热（60℃，140℉或以上）或够冷（7.2℃，45 ℉或以下）的条件下。 6、患病频率 金黄色葡萄球菌食物中毒的真正发生率不清楚因为很多的因为，包括在卫生官员同患者做访谈的时候得到较贫瘠的回信，食物中毒的类似症状的疾病误诊（像蜡状芽孢杆菌的毒素），用于实验室分析的样品采集不充分和实验室检查不当。在美国的细菌病原体引发的食源性疾病（127起，7,082个例，1983年）中，14起有1,257例是因为金黄色葡萄球菌。随后1984年发生11起（1,153例），1985年发生14起（421例），1986年7起（250例），1987年有1例发生报告（100例）。 7、并发症 由金黄色葡萄球菌食物中毒死亡很罕见，尽管其多发生在老年人、婴幼儿和严重衰弱的人。 8、目标人群 所有的人都可能发生这类细菌中毒，但症状的强度可能会有所不同。 9、分析食品 为了检测食物中的痕量的金黄色葡萄球菌肠毒素以确定食物被污染，必须从食物中分离出毒素并加以浓缩，然后通过特异抗血清凝集。为达到目的要遵循两个原则：（1）从食品提取的肠毒素在离子交换树脂中选择性吸附（2）通过化学或物理过程选择性去除其中的食品成分，使溶液中剩下肠毒素。这些技术的使用和（尽可能）浓缩样品使检测食物中的少量肠毒素变成可能。 在单株抗体（如酶联免疫吸附试验，逆向被动乳胶凝集法）的基础上，发展起来很多快速检测方法用于食品中肠毒素的评估检测中。这些快速的方法检测限大约为1.0纳克毒素 /克食物。 10、典型的爆发 得克萨斯州 16所小学5,824吃了供应的午餐，有1,364儿童生病。午餐是在共同的一个厨房准备的然后用卡车运到学校。流行病学研究显示，95％的生病的孩子吃了鸡肉沙拉。午饭前一天下午，冷冻鸡煮3小时。鸡煮熟后，去骨，用风扇冷却到室温，分成小块，放置到二级英寸深的铝盘，在冰箱（42-45华氏度）存储过夜。 第二天早晨，其余的沙拉配料加入，混合物用电动搅拌机混合。食物被放在保温箱，在上午9:30到10:30运到各学校，室温下放置，直到11:30到中午的时间发放。对鸡肉沙拉的细菌学检查的人数显示存在大量的金黄色葡萄球菌。 鸡肉的污染可能发生在去骨的时候。因为存放在二寸深的盘里，鸡冷却不够快速。此间在温暖的室内，葡萄球菌可能生长。为防止再次调查去骨操作中谁是哪个葡萄球菌带菌者，必须使沙拉从准备到消费之间有足够的冷冻时间。 11、非典型案例 最新案例请看CDC的 the Morbidity and Mortality Weekly Reports。 12、其他资源 A Loci index for genome Staphylococcus aureus is available from GenBank。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 嘴突凸脐蠕孢的形态特征与培养方法及实验内容！ 一、菌种简介平台编号：Bio-14292提供形式：斜面培养物英文名称：Exserohilum rostratum中文名称：嘴突凸脐蠕孢属名：Exserohilum种名加词：rostratum来源历史：←中国农业科学院农业资源与农业区划研究所←山东农业大学收藏时间：2006-12-31原始编号：BDS fungi 054原产国：中国资源归类编码：15151520106模式菌株：非模式菌株主要用途：a:1:{i:0;s:4:研究;}特征特性：自来水琼脂麦秆培养基（TWA+W）上菌落圆形，铺展，因菌丝体而灰褐色、青灰色或黑褐色，有气生菌丝，气生菌丝顶端或麦秆、培养基上产生分生孢子梗产孢，孢子量大。分生孢子梗黑褐色，单生或少数丛生，柱状，不分枝，基部稍膨大，顶端屈膝状延伸，较中下部略粗，多隔膜（培养中可达23个），培养中长度可达500µm，宽5-7µm，基部宽达13µm。分生孢子浅褐色到深褐色，椭圆形，近柱状或长喙状，两端钝圆，通常3-14假隔膜，两端或仅基部隔膜加厚，两端细胞颜色浅，脐点周围和顶端部位半透明；培养中分生孢子变小40-109.5×13-22µm。脐点明显凸出；第一隔膜产生在近基部，第二隔膜产生在近顶部，第三隔膜产生在中部。具体用途：研究生物危害程度：四类致病对象：不清楚分离基物：叶片采集地：山东徂徕山培养基编号1：0014资源保藏类型：a:1:{i:0;s:6:培养物;}保存方法：a:2:{i:0;s:15:-80℃冰箱冻结法;i:1;s:8:矿物油法;}共享方式：a:1:{i:0;s:10:公益性共享;}保藏条件：斜面菌种和冻干菌种应在2~8℃保存。用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征PDA上，菌落灰褐色，中央隆起，棉絮状，边缘气生菌丝绒毛状，背面褐色，容易产孢。TWA+W上，菌落正圆形，平铺，生长快，25℃下，一周，扩展满皿，褐色，边缘或培养基中麦杆上产孢较多。菌丝淡褐色，光滑，具隔膜，多分枝，宽3－6μm。分生孢子梗单生或簇生于菌丝，褐色，光滑，多隔膜，长可达500μm。分生孢子淡褐色至中等褐色，椭圆形或近圆柱形，端部钝圆，基部有明显突出的脐点，3－10隔膜，常在两端有隔膜增厚现象，中等褐色，两端细胞颜色稍浅，65－95×18－25μm，平均80×22μm。 三、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项 1、复苏后，微生物菌种应保藏于建议的温度、清洁和干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退。2、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我司不负责任。3、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    NCI-H446/VP人肺癌依托泊苷耐药株上皮细胞 一、细胞简介平台编号：Bio-132752规格：1×10^6cells/T25培养瓶细胞信息：NCI-H446/VP细胞名称：人肺癌依托泊苷耐药株上皮细胞产品类别：人源细胞系生长特性：贴壁生长培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS传代方法：1：2传代细胞形态：上皮细胞样  用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：甲状腺2）形态：上皮细胞样3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 三、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）   四、细胞培养步骤  1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。  2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。  3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：  1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。  2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。  3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。  4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。  PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。 五、注意事项1、细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；2、细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；3、常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片）；4、干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染；5、细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力；6、细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    麦芽香肉杆菌PCR试剂盒的知识与应用及使用方法！ 一、背景 麦芽香肉杆菌PCR试剂盒采用PCR技术，针对麦芽香肉杆菌的基因高度保守区域设计特异性引物，用PCR技术对麦芽香肉杆菌的核酸进行体外扩增检测，在反应体系中含麦芽香肉杆菌核酸模板的情况下，PCR反应进行特异性扩增，利用琼脂糖凝胶电泳技术对PCR扩增产物进行检测，依据特异性扩增片段的结果，判断待检样品中是否含有猪细小病毒源性成分，实现检测结果的定性分析。 二、麦芽香肉杆菌PCR试剂盒使用方法 1、样品处理（样本处理区） 1.1样本前处理 取悬浮的口腔样本或粪便样本100ul，加入1.5ml离心管中，用DNA核酸提取试剂盒进行提取即可。 1.2 DNA提取 根据您实验室的具体情况和样品类型，选择适当的提取策略方法。为了使实验结果稳定、有效、可靠，建议使用商品化的试剂盒进行提取，严格按照对应试剂盒说明书进行操作，样本核酸提取过程中应避免污染，提取好的模板样品如不能立即检测，建议-15℃以下保存。 2、试剂配制（试剂准备区） 2.1从-15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温（20～25℃），注意避免强光照射，待完全溶解后振荡混匀并低速离心10 s，使用低吸附吸头分液取样，避免试剂损失和浪费。 2.2根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满7份，多配制1份)， 2.3在适当容积的无菌离心管中加入上述试剂，充分振荡混匀后2000 rpm离心10 s，按照20μL/管分装量将试剂分装至八联PCR反应管中。 2.4盖紧八联PCR反应管盖,并注意做好相应标识（请标记在八联PCR反应管盖两端突出部位，切勿标记在八联PCR反应管盖中间）。将PCR反应管转移至样本准备区，剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。 3、加样（样本处理区） 将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取5μL，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心，核酸加样过程中应避免污染。 备注：模板浓度高或存在PCR抑制物，需用超纯水稀释模板DNA，DNA浓度低于50ng/ul，可加5μL模板，高浓度DNA可能抑制PCR反应。 4、PCR扩增（核酸扩增区） 4.1将待检测反应管置于PCR仪反应槽内,并记录放置顺序； 5、结果分析判定 5.1电泳检测 取10-20μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本产品提供的扩增液在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。 5.2麦芽香肉杆菌PCR试剂盒电泳结果判断 PCR产物阳性对照必须有目的片段大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。 三、应用 麦芽香肉杆菌PCR试剂盒可以用于猪源沙门菌分离鉴定及鼠李糖乳杆菌预防断奶仔猪腹泻效果研究： 研究主要从沙门菌临床株分离鉴定、沙门菌ELISA(Enzyme linked immuno sorbentassay)检测方法建立与应用、LGG对沙门菌感染仔猪肠道菌群影响,以及实际生产中LGG对断奶仔猪生长性能和免疫功能影响等方面进行研究, 主要结果如下： (1)断奶仔猪腹泻沙门菌的分离鉴定与耐药性检测。从全国26个省市,123家养殖场采集的806份腹泻仔猪肠道内容物、粪便样品中,分离得到173株沙门菌,分离率比较高的省市是河北、山东、湖南、湖北、重庆;鉴定出7种血清型,以鼠伤寒沙门菌为主(125株),16种毒力基因的阳性率为100%;氨苄西林、四环素、氯霉素和氟苯尼考的耐药率大于70%,复方新诺明的耐药率为100%,但均对阿米卡星敏感。 (2)鼠伤寒沙门菌FljB抗体间接ELISA建立与应用。对分离的鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FljB进行原核表达,建立了沙门菌间接ELISA检测方法。建立的程序为pET-32a-FljB重组蛋白,以6μg/mL包被酶标板,37℃孵育1 h后4℃过夜,5%BSA封闭2h,待检血清100μ/孔,37℃作用30min,1:10000稀释的酶标二抗,100μL/孔,37℃作用30min,TMB显色10min,加入终止液,酶标仪OD450读取数值,并确定了OD450的阴阳临界值为0.34。建立的ELISA方法能特异性识别沙门菌,灵敏度高,三次的重复试验变异系数为1.0%～9.1%,且与商品试剂盒符合率达到93.4%。 (3)LGG对临床分离沙门菌感染断奶仔猪肠道菌群结构的影响。利用高通量测序技术分析回肠黏膜菌群,结果显示,仔猪回肠黏膜的优势菌群是厚壁菌门、变形菌门、放线菌门,分别占总丰度的85.00%、8.23%、6.15%。经对比,鱼乳酸杆菌、土壤芽胞杆菌、乳酸乳球菌是相对丰度最高的种,分别为43.63%、8.50%、8.00%,另外,盖氏假单胞菌(2.06%)、大洋沉积物芽胞杆菌(1.49%)、微杆菌AT1b(1.27%)、麦芽香肉杆菌(1.11%;使用商品化的麦芽香肉杆菌PCR试剂盒检测)的相对丰度也超过1%。 (4)LGG对断奶仔猪生产性能和免疫功能的影响。按照1 kg/1000 kg饲料的比例添加LGG冻干粉(1010CFU/g),断奶仔猪连续饲喂3周,LGG停止添加后再继续观察2周。添加LGG提高仔猪终末重,提高平均日增重及饲料转化率,降低腹泻发病率。添加LGG显著提高第4、5周的仔猪体重,增加第3、4、5周的平均日增重及饲料转化率,可以显著降低第3、4、5周的仔猪腹泻率。对血液免疫球蛋白分析发现,LGG提高了第1周仔猪血液IgM及第3、4、5周仔猪血液IgG的浓度,第5周仔猪血液IgA浓度明显升高。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  罗伊氏粘液乳杆菌——用于益生菌类保健食品生产 一、菌种简介罗伊氏粘液乳杆菌（Limosilactobacillus reuteri）是一种天然存在于人和动物肠道内的优势乳酸菌，具有抑制病原菌、改善肠道环境、调节肠道菌群等诸多优良益生功能，是广泛应用于食品、药品和饲料添加剂的一种重要微生物，具有很高的理论研究和生产应用价值。 二、产品信息平台编号：Bio-67184规格：冻干物拉丁属名：Limosilactobacillus Reuteri中文名称：罗伊氏粘液乳杆菌拉丁名称：Limosilactobacillus reuteri曾用名：罗伊氏乳杆菌 Lactobacillus reuteri模式菌株：是其它保藏中心编号：=NBRC 15892=ATCC 23272=CCUG 33624=CIP 101887=DSM 0来源历史：←IFO←JCM←DSM←G．Reuter，F275收藏时间：2007/1/1特征特性：革兰氏阳性 ，细胞杆状。参考用途：分类学研究。用于益生菌类保健食品生产。生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：人的肠内培养基编号：培养基名称：DSMZ11培养基成分：酪蛋白胨(胰酶消化) 10g，肉汤提取物 10g，酵母粉 5g，葡萄糖 20g，吐温80 1g，K2HPO4 2g，醋酸钠 5g，柠檬酸二铵 2g，MgSO4・7H2O 0.2g，MnSO4・H2O 0.05g，pH6.2～6.5。培养温度：37 ℃需氧类型：厌氧用途：分类；研究；生产；分类学研究。用于益生菌类保健食品生产。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、菌株性状性状呈轻微不规则、圆形末端的弯曲杆菌。罗伊氏乳杆菌属专性异型发酵菌种,能发酵糖产生CO2、乳酸、乙酸和乙醇。 四、应用领域罗伊氏粘液乳杆菌在食品添加剂方面的用途主要是作为保鲜剂和营养强化剂。在工业方面，罗伊氏粘液乳杆菌可以被用于生产纤维素和乳酸等有机酸。在农业方面，罗伊氏粘液乳杆菌可以被用于土壤改良和有机肥料生产。在饲料行业方面，罗伊氏粘液乳杆菌可以被用于动物饲料中，以增强动物的免疫系统和促进消化。用法用量的具体情况需要根据具体行业和产品来确定。在食品添加剂方面，罗伊氏粘液乳杆菌的使用量通常为每千克食品中0.01-0.1克。在工业方面，罗伊氏粘液乳杆菌的使用量会因生产工艺和产品用途而有所不同。在农业方面，罗伊氏粘液乳杆菌的使用量通常为每亩土地中100-200克。在饲料行业方面，罗伊氏粘液乳杆菌的使用量通常为每吨饲料中1-2千克。 五、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

              MOVAS-1小鼠主动脉平滑肌细胞的功能及使用方法！ 小鼠主动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经alpha-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 一、细胞简介平台编号：Bio-53998规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：MOVAS-1产品简称：MOVAS-1中文名称：小鼠主动脉平滑肌细胞细胞数量：1*10^6组织来源：成年C57BL/6小鼠，心，主动脉，平滑肌形态特征：纺锤形生长方式：贴壁生长背景描述：1999年12月用胶原酶-弹性蛋白酶消化法分离的原代血管平滑肌细胞，用SV40大T抗原和新霉素耐药基因的逆转录病毒进行了转染。在0.4mg/mlG418存在下选择克隆并通过限制稀释进行亚克隆。培养条件：DMEM高糖，10%胎牛血清，丙酮酸钠；空气95%，二氧化碳5%；37℃培养换液频：率2-3天传代比例：1:5-1:8冻存液配方：95%完全培养基，5%DMSO安全性：BSL-1供应限制：仅供科研运输方式：常温运输（T25培养瓶）用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常主动脉组织。2)细胞鉴定:平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 -1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式:上皮样,多角形细胞,贴壁培养。 三、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 四、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 五、细胞收货处理T25:收货→观察细胞状态→酒精消毒→37度平衡2h→取培养基备用→传代或者继续培养。血清:收货→酒精消毒→37度平衡2h→接种到完全培养基→ 观察细胞状态→继续培养。离心管:收货→酒精消毒→37度平衡2h →离心收集细胞→新培养基重悬→接种观察细胞状态→继续培养。干冰:收货→放液氮或-80冰箱→复苏→观察细胞状态→继续培养。 六、小鼠主动脉平滑肌细胞主要功能（1）血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。（2）表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1，参与血管壁的炎症反应。（3）与血管疾病的进展和稳定有关。小鼠主动脉平滑肌细胞与主要病生理变化：（1）主动脉硬化。（2）主动脉瘤（3）主动脉钙化。丰晖生物小鼠主动脉平滑肌细胞的基本特性：（1）组织来源于正常小鼠大动脉组织。（2）鉴定：肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色。（3）原代细胞培养末期液氮冻存。（4）每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。（5）肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色验证。（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。丰晖生物小鼠主动脉平滑肌细胞的其它：（1）推荐培养基：丰晖生物。编号：M-0003和S-0003。（2）产地：中国。（3）品牌：丰晖生物。（4）储存：液氮。（5）运输：干冰。（6）用途：只可用于科研。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               神经干细胞程序冻存液的特点及复苏与冻存操作步骤！ 一、概述 神经干细胞程序冻存液是神经干细胞的无血清细胞冷冻培养基。该产品仅用于实验室研究，不能用于临床和家庭用途或其他用途。 质量控制： 经过了细菌、真菌、支原体检测； 运输： 采用冰袋保存运输； 保存： 保存于2-8°C，有效期维持三年； 为了维持产品稳定性，请勿反复冻融相关产品。 二、特点 即用型产品，方便快捷； 复苏率更高达 90%，远超普通冻存液的70%的效率； 无需程序冻存，细胞可直接置于- 80°C冰箱，省事省时。 三、冻存步骤 1、选择处于对数生长期的细胞，按照常用的方法收集细胞于离心管中，按照培养细 胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数（参考数量：5×10 5 至 5×10 6 cells/mL）。 2、取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量，置于离心管中，离心收集培养细胞（参考 离心条件：4℃，250 g，离心3-5 min）。 3、吸去上清液。 4、加入适量程序冻存液于离心管中，混合均匀，制成细胞混合液。 5、将离心管中的细胞混合液分装于已标示完全的冷冻保存管中。 6、将冻存管直接置于-80℃冰箱中，24 h后移入液氮长期保存。 四、复苏 1、从液氮中取出冻存的细胞，立即放入37℃水浴锅中快速解冻。 2、待冻存管中细胞混合液完全融化后，立即逐滴加入少量细胞完全培养基于该冷冻 管中与细胞混合，再将细胞混合液从冻存管中移入含有8~10 mL该细胞完全培养 基的试管中，轻轻混合均匀。 3、离心收集培养细胞（参考离心条件：4℃，250 g，离心3~5 min)，吸去上清液。 4、加入1~2 mL完全培养基重悬细胞。 5、按照合适的接种密度将细胞接种到细胞培养容器中，加入适量的已预热的新鲜的 细胞完全培养基。 6、轻轻摇晃培养器皿，使细胞分布均匀。 7、镜检后放置于37℃ ，5% CO2，饱和湿度的培养箱中继续培养。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                MIA PaCa-2人胰腺导管癌贴壁细胞系的知识与应用！ 一、背景 MIA PaCa-2人胰腺导管癌贴壁细胞系是由A.Yunis等人于1975年从一名65岁的高加索男性获得的胰腺肿瘤组织中建立的。据报道，该细胞系倍增时间约40小时，在软琼脂中的集落形成效率约19％。该细胞系对天冬酰胺酶敏感。 二、MIA PaCa-2人胰腺导管癌贴壁细胞系培养步骤 （一）MIA PaCa-2人胰腺导管癌贴壁细胞系细胞复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 （二）MIA PaCa-2人胰腺导管癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a）对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。 3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。 （三）MIA PaCa-2人胰腺导管癌贴壁细胞系细胞冻存： 1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次； 2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中； 4、先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃ 三、应用 MIA PaCa-2人胰腺导管癌贴壁细胞系可以用于Linc00152对胰腺癌细胞MIA PaCa-2增殖侵袭及迁移的影响： 探讨长链非编码RNA Linc00152对人胰腺癌细胞株MIA PaCa-2增殖、侵袭和迁移能力的影响。 方法：于医院胆胰科采集到20对胰腺癌组织和其对应的癌旁正常的胰腺组织;人正常胰腺细胞HPDE及各组胰腺癌细胞系MIA PaCa-2细胞、BxPC-3细胞、Capan2细胞购于美国ATCC细胞库。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)验证组织及各组细胞中Linc00152的表达水平。 人胰腺癌细胞株MIA PaCa-2细胞随机分为阴性对照组(si-NC组)和Linc00152下调组(si-Linc00152组)。设计Linc00152的siRNA(small interfering RNA)干扰模型,si-NC组和si-Linc00152组分别转染阴性对照序列(Negative control)、siRNA抑制序列,采用RT-qPCR验证两组MIA PaCa-2细胞中Linc00152的转染效率并进行后续实验。 采用CCK-8法和集落形成实验检测两组MIA PaCa-2细胞的增殖能力;流式细胞术检测两组MIA PaCa-2细胞的细胞周期;Western-blot检测两组胰腺癌细胞MIA PaCa-2的细胞周期相关蛋白cyclin D1、CDK4的表达: 采用Transwell实验和细胞划痕实验测两组MIA PaCa-2细胞的侵袭、迁移能力;Western-blot检测两组MIA PaCa-2的细胞相关蛋白vimentin及N-cadherin的表达水平。结果:与癌旁正常的胰腺组织相比,Linc00152在胰腺癌组织中表达明显增加(P 成功设计siRNA干扰模型,将阴性对照序列、siRNA抑制序列转染48 h后,RT-qPCR结果显示,与对照组si-NC组对比,si-Linc00152组中的Linc00152表达明显降低(P 集落形成实验8天后,si-NC组的集落形成数目是(412±12),而si-Linc00152组的集落形成是(226±8),结果显示沉默Linc00152后细胞克隆数目明显减少(P Transwell侵袭实验显示,沉默Linc00152后细胞侵袭的数目明显减少(P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    异常威克汉姆酵母：用于清香型白酒的酿制研究 异常威克汉姆酵母是Wickerhamomyces属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为酿造曲酒。 一、菌种简介平台编号：Bio-63741提供形式：冻干物拉丁属名：Wickerhamomyces Anomalus中文名称：异常威克汉姆酵母属名：Wickerhamomyces种名加词：anomalus来源历史：←北京工商大学（20012）←内蒙古轻工研究所收藏时间：2006.3.26资源归类编码：15151113000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究具体用途：用于清香型白酒的酿制研究。特征特性：发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖；不发酵乳糖、菊糖、淀粉；不同化木糖、木醇。化能异养型，pH4.8～6.0，好氧。出芽繁殖为主，酯化性能高.    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：28℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：31559用途：研究；用于清香型白酒的酿制研究。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养条件1、培养基编号：CM0077 5 °Bé麦芽汁琼脂2、培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L（或用 MEB 代替），琼脂 15.0g，自然 pH。推荐使用商品化成品培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：25℃ 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中的 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养，以液体培养结果为准。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    小鼠角膜基质细胞永生化的运输与保存及使用！ 小鼠角膜基质细胞是存在于小鼠角膜中层的结缔组织，这些细胞是呈正方形的，具有完全透明的特点。这些细胞可以被提取并进行体外培养，以用于各种生物医学研究。 细胞简介平台编号：Bio-116508规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：永生化细胞细胞名称：小鼠角膜基质细胞永生化用途：（免疫荧光鉴定）注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞详述角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不同，中央部最薄。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。角膜基质为中层结缔组织，完全透明，角膜基质层中的主要细胞成分是角膜基质细胞，它能合成和分泌纤维，并且对胶原束的排列和平衡都起作用。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。注意事项：收到细胞后第一次传代建议1：2传代，充液培养基是维持培养基，不能用来培养细胞。 细胞特性1)组织来源于实验动物的正常眼组织。2)细胞鉴定：波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。 产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 产品使用（1）本产品仅能用于科研（2）本产品未通过直接用于活体动物和人的审核（3）本产品未通过用于活体诊断的审核 推荐培养基我们推荐使用原代基质细胞培养体系作为体外培养小鼠角膜基质细胞的培养基。名称 体积 浓度 保存条件 原代基质细胞基础培养基 500ml 1× 4℃、避光 原代基质细胞培养添加剂 5ml 100× -20℃、避光 胎牛血清（FBS） 10ml 终浓度2% -20℃、避光 双抗（青霉素/链霉素，P/S） 5ml 100× -20℃、避光  北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  TCCSUP人膀胱移行细胞癌贴壁细胞系的知识与应用！ 一、背景 TCCSUP人膀胱移行细胞癌贴壁细胞系于1974年从一个未分化的移行细胞癌建系，该患者在切除肿瘤之前有4个月的血尿病史。后来发现了向骨髓的转移。超微结构研究表明存在微绒毛和脂质体，但未观察到桥粒。 二、TCCSUP人膀胱移行细胞癌贴壁细胞系培养基及培养冻存条件准备 1）准备MEM（推荐YJ-0012）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）TCCSUP人膀胱移行细胞癌贴壁细胞系培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 3）TCCSUP人膀胱移行细胞癌贴壁细胞系冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 三、TCCSUP人膀胱移行细胞癌贴壁细胞系细胞处理 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）TCCSUP人膀胱移行细胞癌贴壁细胞系细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 四、应用 TCCSUP人膀胱移行细胞癌贴壁细胞系可以用于顺铂相关cGAS-STING信号激活对膀胱癌增殖的影响及其机制研究： 探讨膀胱癌顺铂治疗免疫效应,有助于深入理解顺铂的综合作用机制。 研究目的： 1、探讨顺铂相关免疫效应与膀胱癌内源性c GAS-STING通路激活的相关性及其调控机制； 2、探索顺铂诱导的膀胱癌内源性c GAS-STING信号激活对膀胱癌增殖的影响及其机制； 研究方法： 1、首先通过RNA转录组测序联合生物信息学分析发现,顺铂处理激活了T24膀胱癌细胞系中多种免疫炎症相关通路,且这些免疫炎症通路的激活可能与c GAS-STING信号的激活相关。结合公共数据库我们探索了STING蛋白在膀胱癌中的基础表达水平。通过实时荧光定量PCR,蛋白印迹实验,酶联免疫吸附实验,报告基因实验,免疫荧光以及流式细胞分析技术等来验证了顺铂处理后膀胱癌细胞系中c GAS-STING通路及其下游信号是否激活。通过小干扰沉默STING或使用STING特异抑制剂H151来验证T24、TCCSUP膀胱癌细胞系顺铂相关的免疫效应是否显著减弱。 2、结合公共数据库探索膀胱癌中STING激活上游蛋白c GAS的基础表达水平。通过免疫荧光,亚细胞组分蛋白印迹试验探索顺铂处理后膀胱癌细胞系的DNA损伤修复状态;探索顺铂处理后膀胱癌细胞系中c GAS的总体表达水平,细胞定位以及染色质绑定c GAS蛋白水平是否改变。 3、使用CCK-8试验以及克隆形成试验探索STING蛋白敲低后膀胱癌细胞系的体外增殖水平是否改变。结合TCGA数据库分析c GAS-STING中关键蛋白的中位数表达水平是否与患者的整体生存以及无病生存相关。 4、使用慢病毒转染构建STING-Knockdown及STING-WT稳转MB49小鼠来源膀胱癌细胞株。在C57BL/6J小鼠中构建MB49膀胱癌皮下移植模型,比较PBS联合STING-Knockdown组,PBS联合STING-WT组,顺铂联合STING-Knockdown组,顺铂联合STING-WT组小鼠皮下瘤增殖情况,并通过流式细胞技术分析CD3+CD45+,CD8+CD45+,CD11c+MHCII+以及F4/80+CD11b+免疫细胞浸润比例。结合上述结果分析顺铂相关STING信号激活对小鼠膀胱癌皮下移植瘤增殖的影响及其可能机制。 最后使用CIBERSORT分析TCGA数据库中接受过膀胱癌顺铂化疗患者的预后与肿瘤微环境免疫细胞浸润水平的相关性。 研究结果： 1、顺铂诱导膀胱癌细胞产生免疫效应,主要体现为I型干扰素分泌等免疫通路的富集以及包括IL-6,INF-β等细胞因子、趋化因子分泌显著增加,这种免疫效应和c GAS-STING通路的激活密切相关。顺铂诱导的T24、TCCSUP膀胱癌细胞系中ds DNA累积以及染色质绑定c GAS蛋白的释放可能是激活c GAS-STING信号并导致下游特殊免疫效应的重要原因。 2、沉默或抑制STING不影响T24、TCCSUP膀胱癌细胞系体外增殖水平。在C57BL/6J小鼠皮下移植瘤实验中,顺铂激活的膀胱癌细胞内源性c GAS-STING信号抑制了的小鼠膀胱癌皮下瘤的增殖。同时膀胱癌内源性c GAS-STING信号的激活诱导了小鼠膀胱癌皮下瘤免疫微环境浸润性CD11c+MHCII+和CD8+CD45+细胞增加。 研究结论：顺铂可通过诱导DNA损伤以及促进染色质绑定c GAS蛋白释放等方式激活膀胱癌内源性c GAS-STING信号。顺铂诱导的膀胱癌内源性c GAS-STING信号的激活促进了包括IL-6,INF-β在内的细胞因子分泌,并诱导了小鼠膀胱癌皮下瘤肿瘤微环境中浸润性CD11c+MHCII+和CD8+CD45+细胞增加。这些结果将为晚期膀胱癌治疗中顺铂联合免疫疗法的尝试提供新的思路。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  微生物实验室装修需要遵循的基本原则有哪些？ 微生物实验室是一个专门研究微生物的科学实验室，通常用于进行微生物培养、鉴定、检测和研究等方面的工作。 该实验室通常配备有各种微生物培养设备、显微镜、分离纯化设备、PCR仪器、生物安全柜等实验室设备，以及各种微生物相关试剂和培养基。 在该实验室中，研究人员可以进行微生物的分离、鉴定和培养，研究微生物的生长规律、代谢途径、致病机理等方面的问题，并且还可以开展抗菌药物筛选、基因工程和微生物遗传学等方面的研究。 由于微生物实验室中的微生物具有潜在的危险性，因此需要遵守一系列的生物安全操作规范，确保实验室的安全。 微生物实验室的装修需要遵循一些基本原则，以确保实验室的安全性和实验结果的准确性。以下是几个关键的原则： 一、分隔区域：微生物实验室应该被分成不同的区域，以便进行不同类型的实验。例如，分离区、培养区、PCR区等。每个区域都应该有明确的标识和规定的操作程序。 二、防护措施：微生物实验室应该配备必要的防护设施，如生物安全柜、手套箱、防护眼镜等，以防止微生物污染和实验人员受到伤害。 三、通风系统：微生物实验室应该配备高效的通风系统，以确保实验室内空气质量的良好，并将可能存在的微生物和化学物质排出实验室。 四、材料选择：微生物实验室中使用的材料应该具有抗菌性能，易于清洁消毒，并且不会对实验产生干扰。 五、管理规定：微生物实验室应该建立完善的管理规定，包括实验室进出规定、实验室卫生规定、实验室操作规定等，以确保实验室的安全性和实验结果的准确性。 总之，微生物实验室装修需要综合考虑实验室的功能、安全性和实验结果的准确性等多个方面，以确保实验室的正常运行和实验结果的可靠性。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 绿脓菌素测定用对照培养基基础的检验原理及应用！ 一、背景 绿脓菌素测定用对照培养基基础可用于绿脓杆菌的绿脓菌素测定试验。 绿脓菌素（pyocyanin）是由绿脓假单胞菌培养物中产生的绿色色素。 绿脓假单胞菌Pesudomonas pyocyaneum一种细菌。因其寄生在伤口产生色素（绿脓菌素）而使脓汁呈暗绿色。 绿脓杆菌（p.aeruginosa）属假单胞菌属(pseudomonas)，广泛分布于自然界及正常人皮肤、肠道和呼吸道，是临床上较常见的条件致病菌之一。 大小为1.5～3.0×0.5～0.8um，g-杆菌。菌体一端一般有一根鞭毛，运动活泼。 无芽胞，米液型菌株有多糖荚膜或糖萼，具有抗吞噬作用。在普通培养基上生长良好，专性需氧。菌落形态不一，多数直径2～3mm，边缘不剂齐，扁平湿润。在血琼脂平板上形成透明溶血环。液体培养呈混浊生长，并有菌膜形成。 绿脓杆菌能产生两种水溶性色素：一种是绿脓素，为蓝绿色的吩嗪类分合物，无荧光性，具有抗菌作用。另一种为荧光素，呈绿色。绿脓素只有绿脓杆菌产生，故有诊断意义。但广泛使用有效抗生素后筛选出的变异株常丧失其合成能力。 二、检验原理 蛋白胨和甘油提供碳氮源；氯化镁和硫酸钾促进绿脓色素和荧光素的产生；琼脂是培养基的凝固剂。 用法：称取本品49.4g,另称取10g甘油,溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15分钟,备用。 方法：挑取可疑菌落接种在在绿脓菌素测定用培养基（PDP）斜面上，培养24小时，观察斜面有无色素。如有色素，在试管内加氯仿3.0～5.0mL，充分震摇，使培养物中的绿脓菌素提取在氯仿中，待氯仿提取液呈现绿色时，加1mol/L盐酸约1mL，震摇后静置片刻，上层盐酸溶液中呈现粉红至红色实验结果为阳性，否则为阴性。 原理：铜绿假单胞菌能产生的绿脓菌素能被氯仿提取，且在水中溶解度比氯仿大，并且会发生可逆的氧化还原反应，氧化时碱性呈蓝色，酸性呈红色。所以加入盐酸溶液并震摇后，绿脓菌素会由氯仿转移至盐酸溶液中，并在酸性环境中呈红色。 三、应用 用于一株临床菌通过PA2228基因促进铜绿假单胞菌PAO1绿脓菌素产生研究： 每一种微生物都能进行种间或种内的信号传递。通过这种信号传递,不同菌株之间会产生一种相互作用,在感染过程中绝大多数相互作用都会对宿主产生不利影响,加大治疗的难度。因此,研究多种致病菌之间的作用机制对于研发新的治疗药物及治疗策略具有重要意义。 实验前期,将铜绿假单胞菌PAO1和实验室保存的100株临床菌分别进行共培养筛选,发现一株临床菌,在共培养情况下能够促进PAO1绿脓菌素的产生,将其命名为E9。为了找出E9作用于PAO1中的基因,构建了转座突变体库,最终筛选出17株目的菌株。共培养时,E9不能促进其绿脓菌素产生,但纯培养时绿脓菌素产量与野生型相似或更高。最后进行测序。 根据筛选的结果,选择表型最为明显的PA2228基因,将其进行缺失突变,得到突变体PAO1（PA2228）。然后,将其与E9进行共培养。结果显示:在E9和PAO1（PA2228）共培养时绿脓菌素产量与PAO1（PA2228）纯培养时一致。 为了排除E9和PAO1（PA2228）共培养时,绿脓菌素不增加是由于PAO1（PA2228）生长劣势的可能性,分别对野生型与突变体的共培养体系中两种菌的比例进行监测。发现两种共培养体系中菌数比例相似。表明在临床菌E9和铜绿假单胞菌共培养时作用于PA2228基因,导致绿脓菌素产量增加。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

               SNU-398人肝癌贴壁细胞系的培养条件与操作步骤！ 一、背景 SNU-398人肝癌贴壁细胞系于1990年由J.-G.Park及其同事取自一名韩国患者的间变性肝细胞癌，该患者已通过脂质体加多柔比星和丝裂霉素-C的组合进行了经导管动脉栓塞治疗。既可以附着细胞也可以悬浮细胞。悬浮的细胞是可行的，不应丢弃。通过温和离心(125 xg)回收悬浮细胞，以与贴壁细胞群一起进行继代培养。 二、SNU-398人肝癌贴壁细胞系培养基及培养冻存条件准备 1）准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 注：上皮样细胞，多数贴壁，悬浮细胞和贴壁细胞同时存在。传代冻存时请收集悬浮细胞。 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 三、SNU-398人肝癌贴壁细胞系培养操作 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）SNU-398人肝癌贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）SNU-398人肝癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 SNU-398人肝癌贴壁细胞系可以用于SKA3促进肝癌细胞“干性”的实验研究： 观察SKA3对肝癌细胞“干性”的影响并初步探讨其分子机制。 方法： (1)首先依据对TCGA数据库分析后的结果,采用Western blot检测32例肝癌患者中SKA3在癌和癌旁组织中的表达差异,并进行临床预后的相关性分析; (2)分别用si RNA、SKA3过表达质粒下调或上调肝癌细胞中SKA3的表达,通过浮球培养实验、Sorafenib抵抗实验、平板克隆实验、CCK8实验及Transwell迁移侵袭实验观察肝癌细胞“干性”生物学行为的变化; (3)病毒构建稳定转染SKA3低表达或高表达的MHCC-97h细胞后,我们利用有限稀释法进行了裸鼠皮下成瘤实验,体内实验进一步观察SKA3对肝癌细胞“干性”生物学行为的影响; (4)最后采用Western blot检测上调或下调SKA3后肝癌细胞Notch信号通路关键分子如Notch1、NICD等表达的变化;再使用慢病毒敲低MHCC-97h中的Notch1,检测SKA3对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响,初步探讨其分子机制。 结果： (1)发现SKA3在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织,且通过生物信息技术分析发现SKA3与肝癌患者生存时间、临床病理分期呈正相关; (2)在肝癌细胞MHCC-97h、SNU-398人肝癌贴壁细胞系下调SKA3表达后,si SKA3组与NC组相比,其自我更新能力(SNU-398人肝癌贴壁细胞系:P (3)裸鼠成瘤实验显示,MHCC-97h下调SKA3表达后,裸鼠皮下瘤体积小于对照组(P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      弓形杆菌属通用PCR试剂盒的知识与特点及应用！ 一、背景 弓形杆菌属通用PCR试剂盒采用SYBR Green染料法实时荧光PCR技术，针对弓形杆菌属的基因高度保守区域设计特异性引物，用荧光PCR技术对弓形杆菌属的核酸进行体外扩增检测，在反应体系中含弓形杆菌属核酸模板的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号，利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出，实现检测结果的定性、定量分析。 二、弓形杆菌属通用PCR试剂盒产品及特点 实时荧光定量PCR技术（Arcobacter spp.PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团(包括荧光染料或荧光标记的特异性探针)，对PCR产物进行标记跟踪，随着PCR反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样即可通过荧光信号强度的变化实时监测整个PCR过程中产物量的变化，并结合相应软件对产物进行分析，可以得到荧光扩增曲线，从而计算待测样品中目的基因初始模版的量，常用于分析目的基因的表达水平的变化。它具有下列特点： 1、即开即用，用户只需要提供病毒样品。 2、根据弓形杆菌属通用保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。 3、灵敏度可以达到几百拷贝/反应。 4、一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。 5、弓形杆菌属通用PCR试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。 三、应用 弓形杆菌属通用PCR试剂盒可以用于文蛤体内细菌的分离鉴定和群落结构分析： 通过纯培养方式对文蛤鳃组织内共生细菌进行了分离、筛选与鉴定,在此基础上对内共生细菌的种类和数量进行了统计和分析。 通过16S r RNA扩增子测序方法,对处于不同健康状态的文蛤鳃及肝胰腺组织的细菌群落结构组成进行了分析,发现文蛤的细菌种群丰度在不同的健康状态下及不同的组织中均有变化,同时发现了不同健康状态下文蛤肝胰腺组织中具有显著性差异的细菌类群。 此外,利用前期筛选到的潜在致病菌弓形杆菌MP43对文蛤进行了攻毒实验,评估了对文蛤可能的致病能力及其对免疫的影响。 主要结果如下： 1、通过采用纯培养方式,对文蛤鳃组织内共生细菌进行了多批次的分离与筛选。对得到的纯培养细菌进行了16S r RNA基因序列测序及比对分析,共得到了变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和放线菌门(Actinobacteria)等6个纲、13个目、23个科、47个属的215株细菌。分离细菌较多的属级类群有交替单胞菌属(Alternomonas)、Nautella属、葡萄球菌属(Staphylococcus)和假单胞菌属(Pseudomonas),分别分离到20株、18株、15株以及13株细菌。该研究统计了纯培养方式鉴定得到的文蛤鳃组织中内共生微生物的种类及数量,为后续对文蛤内共生菌群的深入探究提供了参考。 2、采用16S rRNA扩增子测序,对处于不同健康状态的文蛤鳃及肝胰腺组织的细菌群落结构进行了分析。对得到的OTU数据进行聚类分析和物种注释,结果显示文蛤体内的细菌组成在不同的健康状态以及不同的组织中均有差异。健康状态的文蛤鳃及肝胰腺组织中,变形菌门均为丰度最高的类群,肝胰腺中放线菌门、厚壁菌门和拟杆菌门的丰度明显高于鳃组织;在属级单元,文蛤鳃组织中细菌丰度最高的类群为弓形杆菌属(Arcobacter),而肝胰腺中丰度最高的属级类群为红球菌属(Rhodococcus)。发病状态的文蛤鳃组织中的细菌种类在门级单元上远少于肝胰腺组织,在属级单元上鳃组织中Endozoicomonas属占据着极高的丰度,而肝胰腺中丰度最高的类群为不动杆菌属(Acinetobacter)。对两种不同健康状态下的文蛤进行比较,肝胰腺中细菌组成的Alpha多样性和Beta多样性均无显著性差异,但进一步分析发现两组样品中有4个具有显著性差异的细菌类群,可作为文蛤健康状态指示的微生物参考指标。 3、不同温度条件下利用不同浓度的MP43对文蛤的人工感染实验结果表明,致死率与对照组之间均无显著差异,显示该菌株对文蛤不具有直接致病性;通过对攻毒后文蛤肝胰腺组织进行免疫相关基因的表达分析,显示文蛤的免疫系统对于MP43菌株未产生明显响应,肝胰腺弧菌载菌量也未呈现显著变化。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   微生物对碳源的利用顺序与特点及策略是什么？ 微生物对碳源的利用顺序是一个重要的研究领域。通过对微生物在碳源利用过程中的不同阶段进行分析，可以更好地了解微生物的代谢机制和生态功能。本文将从微生物对碳源利用的三个方面进行阐述，包括碳源利用的顺序、不同碳源的利用特点以及微生物对碳源的利用策略。通过深入研究微生物对碳源的利用顺序，可以为微生物生态学、环境科学等领域的研究提供理论基础。 一、微生物碳源利用的顺序 微生物在利用碳源时，通常会按照一定的顺序进行代谢。一般来说，微生物对碳源的利用会首先选择易溶性有机物，例如简单的糖类和有机酸。这些碳源易于微生物直接利用，并可以快速产生能量。 当易溶性有机物逐渐消耗完毕时，微生物会转向利用复杂的碳源，如纤维素、蛋白质和脂肪等。这些复杂的碳源需要微生物通过产酶分解成较小的分子，然后再进行利用。这个过程需要相对较长的时间，但可以提供更大量的能量。河南汉成环保公司 二、不同碳源的利用特点 微生物在利用不同碳源时，会表现出不同的代谢特点。例如，对于碳水化合物，微生物通常会通过糖酸循环代谢产生能量。而对于蛋白质和脂肪，微生物会利用蛋白酶和脂肪酶来分解，并通过氨基酸途径和β-氧化途径产生能量。 此外，不同的微生物对于碳源的利用也有所差异。有些微生物在利用碳源时，会产生大量的酸，导致环境酸化。而另一些微生物则会通过产生气体，如甲烷和氢气等，来产生能量。 三、微生物对碳源的利用策略 微生物对碳源的利用是一个高度调控的过程。微生物会根据环境条件和碳源的特性，选择最适合自身生存和繁殖的利用策略。例如，一些微生物可以通过利用多种碳源形成互补性，提高能量利用效率。 此外，微生物还可以通过合成和分解复合物的方式，将碳源固定在细胞外或细胞内，以便更好地利用。一些微生物甚至可以通过与其他微生物的合作，共享碳源，提高整个群体的生存能力。 总结：微生物对碳源的利用顺序是从易溶性有机物到复杂碳源，不同碳源的利用特点和微生物的策略也有所不同。通过研究微生物对碳源的利用顺序，可以更好地理解微生物的代谢机制和生态功能，为相关领域的研究提供理论基础。 微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！ 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   小不整球壳属的菌株培养与使用范围及保藏方法！ 小不整球壳属是有性态产生子囊壳的一类真菌，属子囊菌亚门、核菌纲。主要用于教学，研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-85421规格：冻干粉拉丁属名：Plectosphaerella Sp.中文名称：小不整球壳属拉丁名称：Plectosphaerella sp.来源历史：←分离收藏时间：2014/9/9原始编号：1原产国：中国资源归类编码：15151528000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究生物危害程度：四类培养基编号：CM0014培养基名称：马铃薯、葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养基成分：马铃薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，琼脂 15.0g，pH自然。[注] 马铃薯提取液：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。培养温度：25℃需氧类型：好氧分离基物：空气采集地：北京市朝阳区保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、培养基 乳酸菌培养基 Ⅱ:Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (牛肉膏) 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8。121℃,15min。2、传代方法 ①冻干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂轮在冻干管壁划两圈,掰断,用200μL无菌水或培养基充分溶解,平板涂布,活化培养。 ②斜面:试管口用75%酒精擦拭后,火焰灼烧,后用无菌接种铲切块,挑取接入平板或斜面,培养。 三、菌种具有两大功能1、通过灌根可有效防治植物和真菌性土传病害,同时可使植物叶部的细菌和真菌病害明显减少；2、对土传病害 ―― 植物青枯病具有很好的防治效果,在收获后期,对番茄、茄子、辣椒、烟草、马铃薯、罗汉果和生姜青枯病(姜瘟病)的田间防效可达 70 ~ -- %,*增产率达 493 %,甚至当对照高达 -- %时防效也是如此。对芋头软腐病、大白菜软腐病、辣椒 根腐病 、花卉根腐病、玉竹根腐病、沙参根腐病、番茄猝倒病、番茄立枯病以及辣椒疫病等土传病害也具有较好的。此外,多粘类芽孢杆菌对植物具,可使田间植株高度比空白对照区增加 10-30cm ;甚至在植物不发青枯病时,也可使植物的产量增加 27.5% ,且增产主要表现为收获前期。 四、菌种的使用范围（1）产品仅用于科研合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，酿酒酵母菌组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     宇佐美曲霉——生产酸性蛋白酶应用于毛皮软化 宇佐美曲霉（Aspergillus usamil），以野生植物为原料酿酒的糖化用菌。具有解磷、解钾的功能；具有活化土壤中硅、钙、镁等元素的作用；具有提高铁、锰、铜、锌、钼、硼供应的功效；提高或延长肥效，减少化肥用量；提高作物抗逆性，预防或减轻病害。 一、菌种简介平台编号：Bio-12432规格：冻干物拉丁属名：Aspergillus Usamii中文译名：宇佐美曲霉拉丁学名：Aspergillus usamii原始编号：537菌株来源：←中国科学院微生物研究所←山东酒精厂保藏人：孙世章直接来源国家：中国保藏时间：2/25/1978生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：生产酸性蛋白酶应用于毛皮软化培养温度：25-28℃培养基：0015    分离源：B1诱变提供形式：冻干物用途：生产酸性蛋白酶应用于毛皮软化注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、基本概念(1)菌群：由多种细菌混合组成的相对稳定的细菌群体，具有某些共同性状。如大肠菌群包括大肠杆菌、产气肠细菌及他们之间的过渡类型。(2)菌属：菌种的上一级分类，通常性状相近、亲缘关系密切的若干菌种组成一个菌属，如芽孢杆菌属、葡萄球菌属、乳杆菌属等。(3)是细菌最基本的分类单位，通常指表型特征相似、亲缘关系接近的一类细菌群体，与同属内其他种有着明显差异；当涉及到细菌保存时，菌种是指细菌的种子（用来长期保存）资源。(4)菌型：同一菌种的不同细菌，在某些方面存在较小差异的为同一菌型，通常一个菌种内的细菌可以分为多种不同的菌型。(5)菌株：由一个独立分离的单细胞系培养而成的纯遗传型群体及其一切后代，一种微生物的每一个不同来源的纯培养物均可称为该菌种的一个菌株。 三、菌种的使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，酿酒酵母菌组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 四、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  小鼠肺微血管内皮细胞的传代与培养及鉴定方法！ 一、背景及概述 内皮细胞系指血管、淋巴管的内膜上皮将内腔面覆盖的细胞。多数是单层扁平上皮属中胎叶性的上皮。血液循环和组织中大单核的游走的吞噬细胞有人认为是来自增生的血管内皮。小鼠肺微血管内皮细胞分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。微血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合等一系列生理及炎症反应。细胞呈梭形或多角形，形成单层后呈鹅卵石样或铺路石样排列。小鼠肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障，该屏障对于肺气体交换，调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。 二、细胞传代培养 将长成单层的原代细胞加0.5g/L胰蛋白酶0.2g/LEDTA后置37℃培养箱进行消化5min左右，镜下观察，当细胞间连接疏松时立即加入ECM培养基，吹打使细胞脱落并充分混匀，按1∶1比例传代。 三、细胞纯化 肺微血管内皮细胞在组织块取出后，可以看到局部有成纤维细胞的生长，采取机械刮擦的方法和ECM培养基的定向分选功能进行纯化。 四、细胞鉴定 用细胞免疫组化法检测ⅧF-Ag和CD31膜抗原将汇合度达80%的96孔板细胞，PBS洗3次。40g/L多聚甲醛固定30min。ⅧF-Ag组需加2。5mL/LTritonx-100，30～40μL/孔，10min，PBS洗5min×3次。然后加H2O2(300mL/L的H2O2甲醇=1∶50)，室温30min，PBS洗5min×3次。BSA封闭30min。吸去BSA，直接加CD31和ⅧF-Ag，对照组加相同体积的PBS，盖底即可，4℃过夜。第2日，吸去一抗，PBS洗5min×3次。加二抗，室温20min，PBS洗5min×3次。加SABC30～40μL/孔，室温20min，PBS洗5min×4次。加DAB30～40μL/孔，5～30min，显微镜观察染色程度。PBS洗3～5次。苏木精染色1～2min，用荧光倒置显微镜拍照，BiosensDigitalImagingSystem灰度扫描仪扫描以检测ⅧF-Ag和CD31膜抗原水平。 五、相关研究 有实验研究藻酸双酯钠(PSS)对脂多糖(LPS)所致的小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)损伤的保护作用。方法体外培养PMVEC，随机将细胞分为空白对照组(C组)、LPS刺激组(L组)、PSS+LPS组(LP组)。采用MTT法检测PSS对LPS刺激PMVEC的细胞活力的影响，虎红染色法测定中性粒细胞(PMN)对PMVEC黏附数量的影响，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测3组培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的浓度。结果PSS能抑制LPS所致的PMVEC细胞活力下降；与C组比较，L组的PMVEC与PMN的黏附数量明显增加，TNF-α和ICAM-1的表达显著增加；与L组比较，PSS预处理1h能显著降低LPS所致的PMVEC与PMN的黏附，LP组的TNF-α和ICAM-1表达显著降低。结论PSS能抑制LPS对PMVEC的损伤及PMVEC与PMN的黏附，其作用机制可能与降低ICAM-1和TNF-α的表达有关。 此外，还有实验研究热打击及10%中暑小鼠血清刺激肺微血管内皮细胞(PMVECs)对PMVECs表达血管内皮黏附分子(VCAM-1)和细胞间黏附分子(ICAM-1)水平及其黏附单核细胞能力的影响。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  支气管炎鲍特氏菌的培养条件与注意事项有哪些？ 一、菌种简介平台编号：Bio-78479规格：Freeze-Dried拉丁属名：Bordetella Bronchiseptica菌株名称：支气管炎鲍特氏菌用途：ATCC原装进口具体用途：研究；教学 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Bordetella bronchiseptica (Ferry) Moreno-Lopez 拉丁名(ATCC? 14064?) 菌株编号Strain Designations 菌株别名  Eldering [LD-2 LD-1]Biosafety Level 生物安全等级 2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol? noType Strain 模式菌株 noMedium 培养基 ATCC? Medium 3: Nutrient agar or nutrient brothGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 37.0℃Name of Depositor 寄存人 A AbramsChain of Custody来源国家 ATCC  三、支气管炎鲍特氏菌保藏条件  斜面菌种和冻干菌种应在2~8℃保存。  四、支气管炎鲍特氏菌培养条件  1、支气管炎鲍特氏菌培养基：营养肉汁琼脂（NA） 2、支气管炎鲍特氏菌培养基配方：牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。121℃，15min。 3、支气管炎鲍特氏菌培养温度：37℃ 4、培养时间：24-48h  五、支气管炎鲍特氏菌培养注意事项  1、冻干首次活化，干粉要全部用完，不能保留，参考“开管说明”用无菌吸管吸取0.3ml~0.5ml的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解，吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过2支斜面或平板；若接种液体培养基，则试管中液体培养基不超过5ml为宜）；2、复苏后，微生物菌种应保藏于建议的温度、清洁和干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退。 3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我司不负责任。 4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                 拟杆菌属通用PCR试剂盒的背景与应用及使用方法！ 一、背景 拟杆菌属通用PCR试剂盒是一种生物试剂盒，用于检测拟杆菌属的特异性基因。这种试剂盒可以用来确认拟杆菌属的存在和种类。 二、拟杆菌属通用PCR试剂盒使用方法 稀释拟杆菌属通用PCR试剂盒阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例） 1、注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。 2、标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。 3、用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。 4、在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。 5、换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。 6、换枪头，在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。 7、重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。 8、如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。 9、用自选方法纯化样品的DNA。 10、如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。 11、在标记管中按拟杆菌属通用PCR试剂盒说明书加入各成分。 12、盖上盖子后上机，按拟杆菌属通用PCR试剂盒说明书参数进行PCR（具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化）。 13、具体操作按所用仪器推荐的流程进行。拟杆菌属通用PCR试剂盒中所含的荧光染料在不结合DNA时，最大吸收光谱在471 nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500 nm，最大发射光谱在530 nm。信号采集可以设置在复性或延伸步骤。 14、如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。 15、如果把拟杆菌属通用PCR试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。 三、应用 拟杆菌属通用PCR试剂盒可以用于实时定量PCR检测血中肠道菌DNA及快速药敏试验的方法学研究： 建立利用实时定量PCR(RQ-PCR)检测血标本中肠道菌DNA的方法并对临床标本进行初步检测，并建立RQ-PCR快速检测肠道菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素敏感性的方法，以期能初步了解外科发热患者中肠道菌菌血症的现状，并建立快速药敏方法以便有利于指导治疗。 选择脆弱拟杆菌谷氨酰胺合成酶基因作为靶基因设计引物和TaqMan探针，使用拟杆菌属通用PCR试剂盒建立20μl的RQ-PCR反应体系，采用含靶基因特异性扩增片段的重组质粒建立标准曲线，并采用High Pure PCR Template Preparation Kit提取基因组DNA，建立实时定量PCR检测血标本中脆弱拟菌DNA的方法学，并对32份外科发热患者的标本进行了临床验证。结果显示引物和探针特异性好，检测灵敏度为10°拷贝／μl(103CFU／ml)，标准曲线相关系数在0.985～0.999之间。 不同浓度的脆弱拟杆菌样本检测的平均准确性为(107.30±2.11)％；批内及批间重复性平均变异系数(CV)分别为(18.44±1.16)％和(19.00±4.47)％。血标本中脆弱拟杆菌DNA平均提取效率为(60.13±5.66)％，提取效率平均变异系数为(15.62±2.47)％。含有同等量脆弱拟杆菌的临床血标本存放在-20℃或-70℃6个月内，脆弱拟杆菌DNA拷贝数差异无显著性(P=0.467～0.840)，该方法可用于临床标本的脆弱拟杆菌DNA检测，并具有快速、灵敏、特异、重复性好的优点。 采用此方法学对32例外科发热患者的84份血标本进行了实时定量PCR检测。结果显示10个标本检测到脆弱拟杆菌，阳性率约为11.90％，含量约1.78～9.24×103CFU／ml，所有患者的血培养结果均为脆弱拟杆菌阴性。 在含有相同浓度大肠杆菌的LB液体培养基和血中，分组加入不同的抗生素，并设立生长对照，分别培养1、2、3、4小时后提取标本的基因组DNA，以本研究组先前建立的实时定量PCR检测大肠埃希菌DNA的方法，对标本进行检测，观察不同抗生素组和生长对照组的生长曲线，来判定药敏结果，并与纸片法进行比较。 结果显示实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素的药物敏感性，结果与常规纸片法一致，但更快速。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     小鼠肝癌细胞收到后的处理方法与培养步骤！ 一、产品信息平台编号：Bio-105786规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：HEPA1-6-LUC细胞名称：HEPA1-6-LUC 小鼠肝癌细胞（荧光素酶标记）细胞用途：仅供科研使用。用途：（种属鉴定正确）注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞介绍此细胞株是C57/L小鼠中产生的BW7756小鼠肝癌细胞的衍生株。检测表明鼠痘病毒（ectromelia virus，ECTV）阴性。每个批次均通过本库支原体检测，结果为阴性。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。 三、细胞特性1）来源：肝2）形态：上皮样细胞3）含量：>1x106 个/mL4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 四、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。 五、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。 六、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备DMEM（含1.5g/L NaHCO3）或DMEM(GIBCO,货号12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%。注意:这个细胞对DMEM 培养基中碳酸氢钠的含量需求是1.5g/L，购买和准备培养基的时候要注意碳酸氢钠的含量。过多的碳酸氢钠不利于细胞的生长。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 七、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      正灰绿青霉的形态特征与生产条件及应用领域！ 一、菌种简介正灰绿青霉是Penicillium属的微生物，原产地为阿根廷。主要用途为分类；研究。 二、产品信息平台编号：Bio-66376规格：冻干粉拉丁属名：Penicillium Euglaucum中文名称：正灰绿青霉拉丁名称：Penicillium euglaucum其它保藏中心编号：=CBS 323.71来源历史：←中科院微生物研究所←CBS收藏时间：2007/7/9原产国：阿根廷资源归类编码：15151913115模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究特征特性：菌落直径24mm，颜色为灰绿色，菌落稍厚，表面中央凸起，具放射状沟纹和同心环纹，菌落质地为绒状到絮状，渗出液为橙色，无可溶性色素，菌落反面颜色为炒米黄，分生孢子呈球形，直径1.5－2.5μm。生物危害程度：四类培养基编号：CM0072培养基名称：麦芽膏琼脂(Malt Extract Agar)培养基成分：麦芽膏 20.0g，琼脂 20.0g，自来水 1.0L，自然pH。培养温度：25℃需氧类型：好氧分离基物：土壤保存方法：真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：分类；研究；注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、形态特征正灰绿青霉，菌落直径24mm，颜色为灰绿色，菌落稍厚，表面中央凸起，具放射状沟纹和同心环纹，菌落质地为绒状到絮状，渗出液为橙色，无可溶性色素，菌落反面颜色为炒米黄，分生孢子呈球形，直径1.5－2.5μm。 四、生产条件采用响应面法对灰绿青霉PenicilliumglaucumNS16生产纤维素酶的发酵条件进行了优化,通过Plackett-Burman实验方法研究有关碳源、氮源、无机盐、发酵时间、摇床转速等18个发酵因子对菌株发酵产纤维素酶活力的影响。结果显示,影响产酶的显著因子是麸皮、CMC的含量和发酵时间。根据实验结果和经验方法对显著影响因子的取值范围进行预估,并采用Box-Behnken设计实验进行优化,然后应用响应面模拟预测和摇瓶发酵实验验证,结果表明,优化发酵条件为培养基中麸皮6.0 g/L，CMC 710 g/L,发酵时间96 h，摇瓶发酵液中CMC酶活均接近309 IU/mL，优化预测值和实验验证值拟合度达到99%,比初始培养基和发酵条件下菌株产CMC酶活94.51IU/mL提高了227%。不同微生物来源的木质纤维素降解酶的酶系组成往往不同。Jorgensen H等研究报道,青霉属(Penicillium)真菌能分泌出较全的降解天然木质纤维素的聚糖酶系,其菌体培养容易、生长快,产酶活力较高,表现出良好的商业开发潜力。 五、应用领域曲霉和根霉产B-葡萄糖苷酶活性较高,而在天然纤维素降解中起重要作用的B-葡聚糖纤维二糖水解酶活力较低。青霉属真菌不仅能分泌组成齐全、酶活较高的纤维素降解酶系,而且具有易培养和生长快的优势。因此,研究灰绿青霉的培养条件及其对秸秆纤维降解的影响,可以为更好地利用秸秆开辟新的途径。纤维素酶是一种诱导酶，在培养和发酵过程中加入适当的诱导物可以增加酶的产量，麸皮富含微量生长因子或诱导物和纤维素等碳源物质，这些物质促进菌体的营养生长,比秸秆纤维素更易诱导菌种纤维素酶的产生，但纤维素酶的分泌受纤维二糖和葡萄糖等的阻遏和反馈抑制,低浓度时有促进作用而较高浓度时便开始抑制，因而应该控制麸皮含量.微生物一般对NH4+离子吸收较快，只有NH4+离子才能进入有机分子中，(NH4)3PO4在被灰绿青霉利用过程中，PO3-4的存在有利于保持菌体生长过程中培养基的pH相对稳定，不适宜的pH可引起菌体表面电荷改变,影响菌体对营养物的吸收，使产酶量和酶活力降低。含水量的大小，直接影响菌种的生长，含水量小，物料容易因水分蒸发而变干，使发酵不彻底，产酶量降低，含水量太大,造成微环境缺氧，夹心现象严重,影响菌体生长和酶活力。综合上述分析,可将灰绿青霉产酶的最佳培养基确定为氮源(NH4)3PO4，含水量200 %，pH 4.5，麦秆：麸皮为3：2。 六、诱变育种以发酵条件优化的菌株 Penicillium glaucum NS3 为出发菌，采用紫外线、亚硝酸钠复合诱变，在 UV( 15W、距30cm 辐照 9min) 、0.3% 亚硝酸钠协同诱变条件下，经多轮反复诱变，得到菌株 Penicillium glaucum NS3c1，其发酵液CMC 酶活和滤纸酶活分别达到 400． 07 IU / mL 和 9． 47 IU / mL，比出发菌酶活 309 IU / mL 和 7． 37 IU / mL 分别提高 29．47% 和 28． 35%。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                       胰蛋白胨胆盐琼脂的应用与操作及注意事项！  一、背景 胰蛋白胨胆盐琼脂是一种常用于大肠杆菌的膜过滤法选择性培养（ISO标准）的培养基。胰蛋白胨胆盐琼脂的成分包括：蛋白胨，氯化钠，胆盐，琼脂和pH缓冲液（pH值为9.0±0.1）。 二、胰蛋白胨胆盐琼脂操作步骤 1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液； 2、称取36.5g的本品加热溶解于1000ml蒸馏水中，然后分装，在121℃的高压灭菌器中灭菌15分钟，之后便可备用。； 3、用3mm接种环取待测液体，划线接种到胰蛋白胨胆盐琼脂培养基上，做2个平板； 4、37℃培养18-24h，大肠埃希氏菌菌显无色菌落，产气肠杆菌和阴沟肠杆菌显黄色或无色。 三、胰蛋白胨胆盐琼脂注意事项 1、使用琼脂糖需要加温，请做好必要的防护措施，避免烫伤。 2、强烈建议您不要将琼脂糖粉末直接倒入沸水中，这样做会引起爆沸，溅出，致使浓度下降，还会造成结块而融化困难。正确的做法是称量一定量琼脂糖至三角瓶中，根据配制浓度加入一定量的缓冲液(与电泳缓冲液一致)，加盖硅胶塞（防止温度差别造成表面结膜），微波或其他方式加热至沸腾2分钟左右，戴手套小心取出，摇匀，使之完全溶解。 3、必须保证琼脂糖完全溶解，否则造成电泳条带不清，保证完全溶解的前提下，尽量缩短加热时间 4、室温凝固后，即可使用。如不立即使用请用保鲜膜封好，4℃冷藏，可保存5天。 四、应用 胰蛋白胨胆盐琼脂可以用于比色法快速检测食品中大肠菌群的研究： 大肠菌群是食品检验中最常用的指标之一。大肠菌群是指在37℃环境下能发酵乳糖，产酸产气的一群需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。目前普遍采用的大肠菌群的检测方法为多管发酵法。虽然传统的多管发酵法检测大肠菌群数具有准确、可靠等优点，但是在食品和水质的监测过程中，或在检测样品多和检测时间紧的情况下，由于其检测时间较长，已越来越不能满足实际监测的需要了。 利用大肠菌群的培养共性，对基于颜色特征识别的大肠菌群的快速计数法进行研究。 主要研究内容和成果如下： 1、对比色法检测大肠菌群的显色培养基配方进行设计，确定了以胰蛋白胨胆盐琼脂为基础，通过添加营养物质、酸碱指示剂、抑菌剂、表面活性剂等组分进行优化，筛选出显色培养基的最佳配方为：LST4.56g、溴甲酚紫0.03g、1.5%乳糖溶液0.1mL(培养40min后加入)、吐温0.2%，100mL无菌水。同时设计半固体琼脂培养基，通过对比不同琼脂含量对汽包的截留情况，确定了琼脂含量0.8%时观察菌体产气效果最佳，确保判断大肠菌群阳性结果的准确性。 2、对大肠菌群数目与培养液颜色之间的关系进行研究，通过测量经大肠菌群发酵产酸后培养基的颜色信息，采用线性或非线性拟合方法建立大肠菌群数目与培养基颜色信息之间的模型，最终确定BP神经网络模型能够得到理想的预测结果，并建立了大肠菌群数目与颜色对应标准比色板，适用于食品现场安全监察检测。 3、对固体类食品、生活饮用水大肠菌群快速检测方法进行研究，最终提供了的比色法定量检测技术与检测结果如下： (1)检测技术：在无菌条件下准确称取25g固体样品，放入到装有50mL无菌生理盐水的锥形瓶中，置于摇床上160r/min振荡2min，混匀样品，用中速定量滤纸过滤样品匀液，再用50mL无菌生理盐水冲洗滤纸上残留的物质，收集滤液。无菌操作吸取6mL菌液通过滤膜进行浓缩，使菌体在过滤器中分布均匀，然后将微量移液管贴近滤膜吸取20μL菌液。准确称取4.56g月桂基磺酸盐胰蛋白胨培养基于100mL蒸馏水中，加热溶解，加入0.03g溴甲酚紫指示剂和2%的吐温试剂，振荡摇匀后以棉塞封口，放入灭菌锅中121℃温度下灭菌20min。取出置于无菌工作台上，待溶液冷却至37℃时调节pH值6.99。用无菌微量移液器吸取1mL培养基放入1.5mL离心管中，加入浓缩后的待检液20μL，37℃恒温箱中培养120min。培养40min后取出置于工作台上，加入1.5%的乳糖溶液100μL，盖紧离心管的盖子，置于恒温箱中继续培养。培养120min后，取出离心管，观察发酵液的颜色，对照大肠菌群数-颜色标准比色版读取大肠菌群数目的估计值。 (2)检测结果：该法在120min内即可得到检测结果，且比色法快速检测大肠菌群结果与国标法检测结果的比值为1.21，二者无明显差别，但国标法检测需72h，该法能明显缩短检测时间，具有一定的灵敏性和真实性。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 MDA-MB-231/ADM（人乳腺癌细胞）传代流程！ 细胞简介平台编号：Bio-134813规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：MDA-MB-231/ADM细胞名称：人乳腺癌细胞完全培养基：Gibco(90%L15+0.5-4ug/ML-ADM+10%FBS)生长特性：贴壁培养温度：37℃生长代数：P4空气条件：5%CO2，,95%AIR冻存条件：50%基础培养基、40%FBS、10%DMSO产品规格：细胞一瓶（T25）细胞传代流程：此细胞受药物刺激，贴壁性较差，该状态不影响实验的进行用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞传代流程 此细胞受药物刺激，贴壁性较差，该状态不影响实验的进行。 细胞密度约 80%时，收集原培养瓶中的培养基，离心收集悬浮细胞，PBS 缓冲液润洗贴壁细胞两次，加 1--2ml 0.25%胰酶进行消化细胞（此时间仅供参考，注意根据实际情况，把握消化时间）。 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（约 1min）（可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）直接吸掉胰酶，加 3~4ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养，待细胞密度长约 70%，可往细胞添加 0.5ug/mlADM，次日观察细胞状态，如细胞状态不受影响，可连续加药两天，观察细胞状态，撤药一天后继续加药培养，后续加药可根据细胞情况进行浓度递增（递增浓度为：0.5ug/ml，1ug/ml，1.5ug/ml，2ug/ml，3ug/ml，4ug/ml），加药过程中，如细胞变差则需及时撤药，注意，细胞对药物反应会有滞后性，请间歇加药施压，不建议连续加药,因各实验室培养环境区别，首次加药因谨慎药物浓度，应从稍低浓度加起，待细胞适应培养环境再提升浓度请考虑各实验室培养体系差异，慎重使用药物浓度。 注意培养基 PH 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或者冻存。 收到细胞后请尽快更换为含 15%血清的新鲜培养基 细胞签收后，请尽快确认细胞状态（平放静置半小时后镜下查看）。若细胞状态不佳，请当天尽快拍照反馈，以便实验室及时售后跟踪处理。细胞签收后若未及时联系，视为默认细胞状态正常。 贴壁细胞如快递路上耗时 1-2 天，可根据签收时的细胞密度，状态进行处理（如细胞密度有 80--90%，细胞轮廓清晰，透亮，即细胞快递受损极少，可当天消化传代）；耗时 3天及更久，收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育过夜到第二天再做消化传代。 首次传代（密度 80%），建议 1：2 传代（保持细胞密度），且优先选择 d=6cm 的培养皿。 关于双抗，本实验室在细胞培养过程中不添加双抗，用户可根据自己实验室具体情况选择添加双抗（100U/ml 青霉素＋100U/ml 链霉素）。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     大鼠雪旺细胞的知识概述与应用及相关研究！ 一、背景 大鼠雪旺细胞提取于大鼠坐骨神经组织，细胞通过对S-100,GFAP和CD90的免疫荧光染色验证，经测试不含有支原体、细菌、酵母和真菌。大鼠雪旺细胞对神经再生和中枢神经系统修复具有特殊的临床重要性，同时也可以作为研究神经病和神经再生，以及中枢神经系统修复的哺乳动物模型。 雪旺细胞是神经嵴的衍生物，包盖周围神经形成轴突的髓鞘。它们环绕在末梢神经轴突的轴上，沿着轴突节形成一层髓磷脂髓鞘。雪旺细胞对末梢神经的发育，功能和再生起着重要作用。当轴突快死亡时，雪旺细胞环绕其周围帮助消化轴突。连续的雪旺细胞形成一个空的管道，在其尾端形成新的轴突。在末梢神经中雪旺细胞的数量是受到严格调控的。 雪旺细胞沿神经元的突起分布，包裹在神经纤维上，雪旺细胞的外表面有基膜，能分泌神经营养因子，促进受损的神经元的存活及其轴突的再生，参与周围神经系统中神经纤维的构成。研究表明，神经元延伸时对与其接触的底物是非常具有选择性的，而且一旦与雪旺细胞接触，神经纤维的延伸就会严格限制在Bungner带内。 体外增殖受到诸如PDGF，FGF，神经元和其它多肽类生长因子的刺激.雪旺细胞提供相对简单，明确，易懂的哺乳动物模型以用来研究一系列发育问题。在研究神经病和神经再生，以及中枢神经系统修复方面雪旺细胞也具有特殊的临床重要性。 二、应用 大鼠雪旺细胞可以用于雷帕霉素、FK506对大鼠雪旺细胞增殖、迁移及相关蛋白表达影响的对比研究： 研究大环内酯类免疫抑制剂雷帕霉素、FK506对周围神经再生的促进作用，通过观察两者在不同浓度下对体外培养的大鼠雪旺氏细胞的增殖、迁移及对大鼠雪旺氏细胞周期、相关蛋白(ERK,p-ERK,NCAM;GAP43)和神经生长因子（NGF）的影响，对比分析两者对雪旺氏细胞的生长促进作用及其差异，为大环内酯类免疫抑制剂治疗周围神经损伤提供一定的理论依据。 方法： 1、选择纯化的大鼠雪旺氏细胞，将其分为FK506组、雷帕霉素组、溶剂组，而FK506组及雷帕霉素组分别分为1.53nM、6.1nM、24.4nM、97.6nM、390nM、1.56microM、6.25microM、25microM、100microM10个剂量组。与大鼠雪旺氏细胞分别培养6h、12h、24h、36h、48h、60h和72h。在荧光显微镜下观察大鼠雪旺氏细胞的生长情况，并用MTT法检测其不同时间点的OD值； 2、用流式细胞仪检测雷帕霉素及FK506对体外培养雪旺氏细胞周期的影响； 3、采用细胞划痕的方法检测雷帕霉素及FK506对体外培养雪旺氏细胞迁移的影响； 4、选择纯化的大鼠雪旺氏细胞，用FK506(6.25microM,100microM)和雷帕霉素（25microM、1.53nM）及溶剂对照组分别培养48h。采用蛋白免疫印迹（WestcrnBlot）、免疫沉淀的测定方法研究雷帕霉素对雪旺氏细胞ERK,p-ERK,GAP43,NCAM蛋白表达的影响。 5、选择纯化的大鼠雪旺氏细胞，用FK506(6.25microM,100microM)和雷帕霉素（25microM、1.53nM）及溶剂对照组分别培养48h。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA法）测定雷帕霉素对雪旺氏细胞NGF分泌的影响。 结果： 1、FK506对大鼠雪旺氏细胞的增殖作用呈现一定的剂量依赖性，随着剂量的加大，其对大鼠雪旺氏细胞的增殖作用越明显，FK5066.25microM剂量组大鼠雪旺氏细胞的增殖作用表现最优(P 2、FK506剂量组及雷帕霉素剂量组均可以使大鼠雪旺氏细胞的增殖指数及S期增大，其中以FK506剂量组使大鼠雪旺氏细胞的增殖指数及S期增大较为明显，与雷帕霉素剂量组及溶剂对照组有明显差异（p 3、无论是FK506剂量组还是雷帕霉素剂量组均能促进雪旺氏细胞的迁移，与溶剂对照组有明显的差异(p 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  葡萄牙棒孢酵母的主要用途与培养方法及打管说明！ 葡萄牙棒孢酵母是Clavispora属的微生物，原产地为中国。菌落奶油状，乳白色，粘稠，边缘平滑，表面平坦，反光。细胞椭圆形，大小不一，单生或对生，芽殖。主要用途为研究；生产，具体用途为生物转化富马酸生产L-苹果酸,富马酸酶活力2000U/g湿细胞。  一、菌种简介平台编号：Bio-63879规格：冻干物拉丁属名：Clavispora Lusitaniae中文名称：葡萄牙棒孢酵母属名：Clavispora种名加词：lusitaniae来源历史：←天津市工业微生物研究所(2.11151)收藏时间：2006.11.10资源归类编码：15151115101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：*12 Brix. 麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，pH自然。[注] 麦芽汁制备：大麦芽若干，粉碎后，加入4倍于麦芽重量的水，搅拌均匀，在55～60℃保温箱内糖化4h，取出过滤，得麦芽汁，测量此麦芽汁的体积和浓度后，分装于已灭菌的三角瓶中，0.6kg/cm2灭菌40min备用，用时将滤液稀释至所需糖度。培养温度：25-28℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2℃～8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-18℃～-33℃冷冻。  三、培养条件1、培养基编号：CM0077 5 °Bé麦芽汁琼脂2、培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L（或用 MEB 代替），琼脂 15.0g，自然 pH。推荐使用商品化成品培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：25℃ 四、培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 六、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中的 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养，以液体培养结果为准。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！