MDA-MB-231/ADM（人乳腺癌细胞）传代流程！

                 MDA-MB-231/ADM（人乳腺癌细胞）传代流程！

细胞简介

平台编号：Bio-134813

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：MDA-MB-231/ADM

细胞名称：人乳腺癌细胞

完全培养基：Gibco(90%L15+0.5-4ug/ML-ADM+10%FBS)

生长特性：贴壁

培养温度：37℃

生长代数：P4

空气条件：5%CO2，,95%AIR

冻存条件：50%基础培养基、40%FBS、10%DMSO

产品规格：细胞一瓶（T25）

细胞传代流程：此细胞受药物刺激，贴壁性较差，该状态不影响实验的进行

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

细胞传代流程 此细胞受药物刺激，贴壁性较差，该状态不影响实验的进行。

细胞密度约 80%时，收集原培养瓶中的培养基，离心收集悬浮细胞，PBS 缓冲液润洗贴壁细胞两次，加 1--2ml 0.25%胰酶进行消化细胞（此时间仅供参考，注意根据实际情况，把握消化时间）。

镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（约 1min）（可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）直接吸掉胰酶，加 3~4ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养，待细胞密度长约 70%，可往细胞添加 0.5ug/mlADM，次日观察细胞状态，如细胞状态不受影响，可连续加药两天，观察细胞状态，撤药一天后继续加药培养，后续加药可根据细胞情况进行浓度递增（递增浓度为：0.5ug/ml，1ug/ml，1.5ug/ml，2ug/ml，3ug/ml，4ug/ml），加药过程中，如细胞变差则需及时撤药，注意，细胞对药物反应会有滞后性，请间歇加药施压，不建议连续加药,因各实验室培养环境区别，首次加药因谨慎药物浓度，应从稍低浓度加起，待细胞适应培养环境再提升浓度请考虑各实验室培养体系差异，慎重使用药物浓度。

注意培养基 PH 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或者冻存。

收到细胞后请尽快更换为含 15%血清的新鲜培养基

细胞签收后，请尽快确认细胞状态（平放静置半小时后镜下查看）。若细胞状态不佳，请当天尽快拍照反馈，以便实验室及时售后跟踪处理。细胞签收后若未及时联系，视为默认细胞状态正常。

贴壁细胞如快递路上耗时 1-2 天，可根据签收时的细胞密度，状态进行处理（如细胞密度有 80--90%，细胞轮廓清晰，透亮，即细胞快递受损极少，可当天消化传代）；耗时 3天及更久，收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育过夜到第二天再做消化传代。

首次传代（密度 80%），建议 1：2 传代（保持细胞密度），且优先选择 d=6cm 的培养皿。

关于双抗，本实验室在细胞培养过程中不添加双抗，用户可根据自己实验室具体情况选择添加双抗（100U/ml 青霉素＋100U/ml 链霉素）。

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