HEEC人正常食管上皮细胞的处理方法与培养步骤！ 细胞简介平台编号：Bio-134199 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：HEEC 细胞名称：人正常食管上皮细胞种属：人别称：HEEC；THEEC组织来源：食管疾病：正常传代比例/细胞消化：1:2传代，消化1-2分钟完全培养基配置：MEM培养基；10%胎牛血清；1%双抗形态：上皮细胞样生长特征：贴壁生长倍增时间：每周 2 至 3 次培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。冻存液：90%FBS，DMSO 10%,保藏机构：ATCC用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液，重悬离心管底部细胞沉淀，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中。 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吸出完全培养基，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10 min ，弃上清收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶，需传代的细胞 ，移液枪，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台，CO2 培养箱，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶，需冻存的细胞，移液枪，枪头 ，离心管，冻存管，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  间型假丝酵母的培养方法与活化步骤及操作说明！ 间型假丝酵母是Candida属的微生物，原产地为中国。白色至奶油色的奶油样菌落，营养体细胞出芽生殖，有简单至复杂的假菌丝，无有性生殖。主要用途为研究，具体用途为近海酵母。  一、菌种简介平台编号：Bio-06219 提供形式：冻干物拉丁属名：Candida Intermedia 中文译名：间型假丝酵母拉丁学名：Candida intermedia菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：钟耀明直接来源国家：中国保藏时间：12/1/1958生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：色氨酸；尿酸酶培养温度：25-28℃培养基：0013    分离源：柿子采集国家：中国用途：色氨酸；尿酸酶 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、微生物培养方法1、平板划线分离法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的，但平板划线分离法不能对菌落计数，而稀释涂布平板法培养过程复杂，对平板的要求比较高，可参照以下步骤：a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃，向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均匀，然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿，轻轻摇动培养皿，使培养基溶液均匀分布在培养皿底部，待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g，放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇15～20min混合均匀，用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培养基表面的中央位置，用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、活化步骤冻干粉活化，将菌粉甩至底部，将尖头一侧用酒精消毒后敲开，取0.2-0.3ml溶解液加入至菌种管中，轻轻弹至菌粉混合均匀，用无菌吸头全部吸出溶解液，全部接种至2支斜面上培养。注意真空菌种管一旦敲开里面的冻干粉就必须全部被用掉，留着也没用。如果有不明白之处，应先与我司联系，避免不必要的损失。 五、菌种培养注意事项1、微生物菌种应保存于低温、清洁和干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；2、菌种操作在无菌条件下进行，接种完毕应该灭菌再做丢弃处理；3、斜面菌种和穿刺菌种保存时间通常为 3-6 个月，应根据菌种状况及时结转；冻干粉保存时间通常是 2-25 年；甘油菌保存时间为 2-5 年;4、冻干首-次活化，干粉要全部用完，不能保留。用0.2-0.5m1的培养液或者无菌水溶解,接种在1-2个平板上，因冻干菌种处于休眠状态，请勿接种多个平板，以免因接种量不足而导致复苏不成功。5、如果有不明白之处，应先与我中心联系，避免不必要的损失。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   微生物食品车间常见霉菌的种类与作用及用途！ 车间常见霉菌种类 我们在实验室检测中常见的霉菌有曲霉、青霉、木霉、毛霉、根霉等几大类，这几类霉菌在分类学上是不同的属，因此在外观形态上是有一定差别的，下面我们就分别介绍这几类霉菌的典型特征。 一、曲霉属 曲霉属包含的种类比较多，主要有黄曲霉、寄生曲霉、杂色曲霉、构巢曲霉等等，是一类可以产生生物毒素的菌属，其中黄曲霉和寄生曲霉产生的黄曲霉毒素更是臭名昭著。这类曲霉属的颜色多样，一般比较稳定，曲霉菌的菌丝是有隔菌丝，它的无性孢子是分生孢子，它的分生孢子很有特点，分生孢子梗末端膨大呈囊状称为顶囊，在顶囊上生出的放射状的瓶状结构，这叫做分生孢子小梗，小梗顶部就长了成串成串的小分生孢子，曲霉的孢子颜色各异，是区分曲霉种类的主要依据。 1、黄曲霉 在察氏培养基上菌落生长很快，直径可达3~4cm，一般初期为黄色，然后变为黄绿色，老后颜色变淡，平坦或有放射性沟纹，反面无色或带褐色。 2、寄生曲霉 寄生曲霉一般培养8~10天是直径约2.5~4cm，平坦或带有放射性沟纹，幼时带黄色，老后呈暗绿色，反面奶油色至淡褐色。 3、杂色曲霉 杂色曲霉在察氏培养基上生长比较受限制，一般是绒状、絮状或两者同时存在，颜色变化也比较多样，局部淡绿、灰绿、浅黄甚至是粉红，反面一般无色至浅黄色或玫瑰色，有的菌落有无色至紫红色的液滴。 4、构巢曲霉 菌落一般生长较快，两周能达到5~6cm，绒状、绿色，部分菌系由于产生较多的闭囊壳而显黄褐色，反面一般为紫红色。 二、青霉属 青霉属分类比较复杂，包含的种也较多，但其形态特征均比较相似，因此肉眼观察很难辨别具体是什么菌种。但青霉属的形态特征还是比较明显的，青霉的营养菌丝体呈无色、单色或鲜明的颜色，具横隔，为埋伏型或部分埋伏型部分气生型，气生菌丝呈丝密毡状、松絮状或部分节省菌丝束。分生孢子梗由埋伏型或气生型菌丝生出，稍垂直于该菌丝，不像曲霉那样生有足细胞。 三、木霉属 木霉菌落开始时为白色，致密，圆形，向四周扩展，后从菌落中央产生绿色孢子，中央变成绿色。菌落周围有白色菌丝的生长带。最后整个菌落全部变成绿色。绿色木霉菌丝白色，纤细，宽度为1.5～2.4微米。产生分生孢子。分生孢子梗垂直对称分歧，分生孢子单生或簇生，圆形，绿色。绿色木霉菌落外观深绿或蓝绿色；康氏木霉菌落外观浅绿、黄绿或绿色。 四、毛霉属 毛霉的菌丝体发达，菌落质地疏松，呈棉絮状，由许多分枝的菌丝构成。菌丝无隔膜，有多个细胞核。毛霉生长迅速，菌丝一般是白色，没有假根，属于单细胞真菌。 五、根霉属 事实上根霉属和毛霉属同属于毛霉目，因此两者形态比较相似。根霉属菌落疏松或稠密，最初呈白色，后变为灰褐色或黑褐色。菌丝匍匐爬行，无色。假根发达，分枝呈指状或根状，呈褐色。孢子刚出现时为黄色，成熟后变成黑色。根霉和毛霉主要区别在于，根霉有假根和匍匐菌丝，匍匐菌丝呈弧状，在培养基表面水平生长，而没有假根也没有匍匐菌丝，这一点是从外观上区分根霉和毛霉最显著的特点。 更多种类 其实，在我们的实验室里还会还有多种多样的霉菌，例如镰刀霉属、头孢霉属、交链孢霉属等等，事实上霉菌也并不是一个分类学定义，而仅仅是“发霉的真菌”这样一个俗称，所以即使现在最权威的分类学专家也无法完全界定霉菌分类的界限，我们通过霉菌的菌落外观也只是可以把霉菌区分到其中某一大类里，而无法界定到种的层次。虽然如此，但是这项技能还是很值得学习的，除了实用性，也增加了我们日常单调的检测工作的趣味性。 微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！

                    微生物检验技术：菌落总数的常见问题有哪些？ 1、有新人可能会拿着菌落总数的平板去问别人这是什么菌？ 答：这是看不出来的，菌落总数只能检测出样品卫生情况，一个样品的细菌数量，不能验证出什么菌。这是一个不应该犯的误区。 2、若所有稀释度的平板菌落数均不在 30CFU~300CFU 之间,其中一部分小于 30CFU 或大于300CFU 时。就会有人不知道怎么去判定那个梯度更接近30-300。 举例：一个梯度：28/28；另梯度：305/305，那么那个数据更接近呢？ 两个方法（网友提供）： a、按标准字面意思直接做差比较后再乘以稀释倍数：28-30=-2，他们相差2；305-300=5，他们相差5。2比5要小，那么采取28相应的梯度再乘以稀释倍数； b、恢复为同稀释度做差比较：把两个梯度换算成同一个梯度，一般把28换算成280。280-300=-20，相差20；305-300=5，相差5。20比5要大，那么采取305相应的梯度。 （个人意见：我是更偏向于第二种，因为要在同一个梯度上做比较才能体现出数据的可靠性，同时我偏向采用前一个梯度的数字，那么这个数值可以减少一步步骤带来的误差，数据可能更加接近样品的情况） 3、有时候会出现这么一个情况，最低稀释梯度中一个平板出现1个菌落，另一个无菌落生长。那么结果怎么出呢？ 答：（以固态为例子）在过去也有讨论过，有人认为报告写5，也有认为报告写＜10（比较两个平板均无菌落生长的时候报＜10）这个两个报告方法其实也是可以采用。（我是采用第一种；个人理解不长报告＜10，那么长了也报＜10吗？不太合理） 4、在做菌落总数的时候，有时候会样品和菌落分不清的（老前辈不会这样），那么如何区分两种物质呢？ 答：在培养基中添加TTC（一般2%浓度1mL加到400mL的培养基中，TTC的浓度不要过高，会有抑制作用）。TTC的原理：TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲月赞。那么生长的菌落会变成红色，这样就可以区分菌落与样品。 还有一个方法：4℃冷藏保存一个样品和培养基混匀的平板做对照，观察菌落的形态特征，老前辈们基本靠这个去区分的。 5、菌落总数计数包括霉菌吗？ 答：菌落总数的概念是这么规定的，食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度、培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。所以也包括在PCA上生长的霉菌和酵母等微生物。 6、培养基温度不好控制？ 答：前提是培养基灭菌好了放在48 ℃士2℃的水浴锅内保温。使用时一个同事在外面把培养基从水浴锅拿到传递窗，培养基表面喷酒精杀菌，然后开启传递窗的紫外灯5min（这一步是对培养基表面杀菌，减少对洁净房的污染）。里面的同事5min之后拿起来放在手心人体不觉烫手，这样的温度最佳倒平板。（注意：倒平板的速度要快，一次最好只拿一瓶，避免培养基凝固） 7、有些朋友不理解菌落总数的单位CFU的意思。 答：CFU为Colony-Forming Units英文缩写，其含义是形成菌落的菌落个数，不等于细菌个数。（比如两个相同的细菌靠得很近或贴在一起，那么经过培养这两个细菌将会形成一个菌落，此时就是2个细菌，1CFU）。菌落总数往往采用的是平板计数法，经过培养后我们数出平板上所生长出的菌落个数，从而计算出每毫升或每克待检样品中可以培养出多少个菌落，于是以CFU/ml或CFU/g报告之。 8、菌落超标的危害。 答：食品的菌落总数严重超标，说明其产品的卫生状况达不到基本的卫生要求，将会破坏食品的营养成分，加速食品的腐败变质，使食品失去食用价值。消费者食用微生物超标严重的食品，很容易患痢疾等肠道疾病，可能引起呕吐、腹泻等症状，危害人体健康安全。 但需要强调的是，菌落总数和致病菌有本质区别，菌落总数包括致病菌和有益菌，对人体有损害的主要是其中的致病菌，这些病菌会破坏肠道里正常的菌落环境，一部分可能在肠道被杀灭，一部分会留在身体里引起腹泻、损伤肝脏等身体器官，而有益菌包括酸奶中常被提起的乳酸菌等。但菌落总数超标也意味着致病菌超标的机会增大，增加危害人体健康的几率。 9、培养后的培养基出现干裂情况。 答：干裂是由于培养基里面的水份缺失导致，所以当出现干裂情况，先要观察干裂平板的数量和位置。看是否是培养箱内部温度不稳定导致（一般平皿一叠可以放置六个，同时要注意每叠之间需要保留一点间隙让其通风）；排除仪器的原因之后，看是培养基否倒得太薄（初学者可以拿三角瓶装水进行练习）；还有其他原因，其实在出现干裂的情况下，结果是无效的（除非干裂情况不严重）。排查出问题所在，可以避免我们下次再犯错。 10、培养基的配置。 答：培养基的包装上（标准上）都会写着先煮热溶解再分装，那么是不是一定要煮热溶解呢？首先瓶子上的配置方法是直接配置一升的PCA，这里是必须要煮热溶解（防止不均匀，使得部分培养基不凝固）。 其实配置培养基有两个方法：第一个：用一个大容器配置培养基，然后加水煮热溶解（注意搅拌，防止烧焦），待溶解完成之后进行分装（这里需要注意安全），再去灭菌。第二个方法就是使用500mL三角瓶（其他容器也可以）配置300ml的培养基，加水稍微溶解（此步不需要加热），再拿去灭菌。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                北京拟土地杆菌的菌株培养与实验内容及保藏方法！ 北京拟土地杆菌是Pseudopedobacter属的微生物，原产地为中国。菌落呈圆形，乳白色透明，表面光滑偏湿润，边缘规则，无晕环，菌落型态较小；在28℃条件下，生长3天，能看见1mm的菌落。主要用途为研究，具体用途为有机污染物降解菌/苯酚、间甲酚降解菌（已验证）。 一、菌种简介平台编号：Bio-115554 规格：冻干物拉丁属名：Pseudopedobacter Beijingensis 中文名称：北京拟土地杆菌拉丁名称：Pseudopedobacter beijingensis来源历史：MCCC原始编号：GCS-AE-31原产国：中国模式菌株：是生物安全级别：一级其它保藏中心编号：MCCC 1A01299=CGMCC 1.12329=LMG 27180培养基编号：102培养温度：28℃培养时间：24-48h需氧类型：好氧分离基物：焦化废水活性污泥采集地：北京首钢公司保存方法：冷冻干燥管保藏用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、平板划线分离法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的，但平板划线分离法不能对菌落计数，而稀释涂布平板法培养过程复杂，对平板的要求比较高，可参照以下步骤：a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃，向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均匀，然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿，轻轻摇动培养皿，使培养基溶液均匀分布在培养皿底部，待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g，放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇15～20min混合均匀，用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培养基表面的中央位置，用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   小鼠肺成纤维细胞的知识与应用及培养操作步骤！ 一、背景 小鼠肺成纤维细胞是肺间质中数量最多的细胞类型之一。这些细胞与普通的成纤维细胞相似，但具有一些独特的特征，例如它们有很长的分枝过程及间隙连接。 小鼠肺成纤维细胞主要来源于肺组织，肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。 成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。它们较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。这些细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动。在一定条件下，成纤维细胞可以实现跟纤维细胞的互相转化。 小鼠肺成纤维细胞的主要功能为分泌肺泡隔基质中的III型胶原、弹性蛋白以及蛋白多糖，也在肺部受损时担任重要的修复和重建功能。肺部受伤后，在炎症部位的一定程度的成纤维细胞积聚是肺部复原的关键步骤，过多或者不足的成纤维细胞聚集都会导致肺功能异常。 小鼠肺成纤维细胞是一种在肺组织中发挥重要作用的细胞类型。它们属于肺泡间质细胞，主要负责产生和维护肺泡的结构完整性，参与肺组织的修复和再生过程。 在正常情况下，肺成纤维细胞处于静息状态，不参与免疫反应。然而，在某些病理条件下(如肺部感染、炎症、损伤或纤维化)，肺成纤维细胞会被激活并增殖，产生大量的胶原蛋白和其他细胞外基质组分，导致肺组织的纤维化和功能受损。 二、小鼠肺成纤维细胞培养操作 1)复苏小鼠肺成纤维细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)小鼠肺成纤维细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)小鼠肺成纤维细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 小鼠肺成纤维细胞可以用于麦味养肺汤通过p53抑制肺成纤维细胞衰老抗肺纤维化的机制研究： MWYF在体内和体外抑制肺成纤维细胞衰老的研究： ①体内:通过衰老相关β-半乳糖苷酶(Senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal)染色观察小鼠肺组织衰老情况,利用Western Blot检测衰老相关蛋白p53、p21和p16在小鼠肺组织中的表达情况,通过免疫荧光观察肺组织中成纤维细胞标志物α-SMA与衰老相关蛋白p53、p21和p16的共染情况。 ②体外:提取小鼠肺成纤维细胞,利用免疫组化对提取的成纤维细胞进行鉴定,通过CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)确定MWYF冻干粉给药剂量。将原代肺成纤维细胞分为空白组,模型组,MWYF低剂量组(400μg/mL),MWYF中剂量组(600μg/mL)和MWYF高剂量组(800μg/mL)。利用阿霉素(Doxorubicin,DOX)干预48 h建立细胞衰老模型,分别用含不同浓度MWYF冻干粉的培养基干预24h,通过SA-β-Gal染色观察肺成纤维细胞衰老情况,利用Western Blot检测衰老相关蛋白p53、p21、p16和衰老相关分泌因子(Senescence-associated secretory phenotype,SASP)在小鼠肺成纤维细胞中的表达情况。 MWYF在体内和体外抑制肺成纤维细胞衰老的研究:在小鼠体内,发现MWYF能够降低肺组织中SA-β-Gal活性,减少衰老相关蛋白p53、p21和p16的表达水平,同时通过双荧光标记发现MWYF可以减少小鼠肺成纤维细胞衰老。在体外,发现MWYF能够降低肺成纤维细胞中SA-β-Gal活性,减少衰老相关蛋白p53、p21和p16的表达水平,抑制SASP表达。体内和体外结果均显示MWYF高剂量组冻干粉效果最为明显。 MWYF通过p53抑制肺成纤维细胞衰老的研究:通过质粒载体对肺成纤维细胞实现p53基因沉默后发现,MWYF减少小鼠肺成纤维细胞衰老作用受到抑制,降低p21和p16蛋白表达能力受到抑制;通过质粒载体对肺成纤维细胞实现p53基因过表达后发现,MWYF减少肺成纤维细胞衰老作用未受抑制,降低p21和p16蛋白表达能力也未受到抑制。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                微生物实验室布局要求及需要配备的检测设备有哪些？ 微生物实验室的要求有哪些？实验室布局要求以及都需要配备哪些检测设备？我们针对以上的问题，整理出相关信息，供大家参考使用。首先，我们需要了解的是生物安全防护。 一、生物安全防护 用以防止发生病原体或毒素无意中暴露及意外释放的防护原则、技术及实践。 根据所操作的生物因子的危害程度和采取的防护措施，将生物安全防护水平（Biosafety level，BSL）分为 4级。 BSL-1对健康成年人已知无致病作用的微生物 BSL-2对人或环境具有中等潜在危害的微生物 BSL-3对人具有严重甚至致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防疫苗和相应的治疗方法 BSL-4对人具有高度文献性，尚无有效疫苗或治疗方法得致病微生物及其毒素 针对用户要开展的微生物检验项目，我们看一下对应实验室需要的生物安全等级： 生物安全一级 菌落总数、大肠菌群等卫生指标菌，从事此类微生物检测的实验室的安全防护等级为生物安全一级(BSL-I)； 生物安全二级 沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌0157、单核细胞李斯特氏菌、空肠弯曲菌、霉菌和酵母计数、诺如病毒、甲型肝炎病毒等，则需要生物安全二级BSLII； 生物安全三、四级 至于生物安全三级和四级是高致病性的微生物，我们暂时是涉及不到的哈！ 二、基础食品微生物实验室如何设计、布局？ 首先，要知道实验室设计可参考的相关标准有哪些？ GB4789.1-2016⻝品安全国家标准 ⻝品微⽣物学检验 总则 GB19489-2008 实验室⽣物安全通⽤要求 GB50346-2011 ⽣物安全实验室建筑技术规范 GB50073-2013 洁净⼚房设计规范 GB50591-2010 洁净室施⼯及验收规范 GB/T32146.3 检验检测实验室设计与建设技术要求 第三部分 ⻝品实验室 GB24820 实验室家具通⽤技术条件 GB/T27405 实验室质量控制规范 ⻝品微⽣物检测 GB/T27403 实验室质量控制规范⻝品分⼦⽣物学检测 GB/T19495.2-2004 转基因产品检测 实验室技术要求 三、配备哪些设备？有何用途？ 1、超净工作台 又称净化工作台，主要分为两类：水平层流、垂直层流，主要组成部分有：高效过滤器、中效过滤器、通风机。（对健康成年人已知无致病作用的微生物）。 2、培养箱 温度可控，用于培养微生物、植物和动物细胞的箱体装置，主要会用到：霉菌培养箱和恒温培养箱。 3、干燥箱/烘箱 用于灭菌盒洗涤后的物品烘干，一般玻璃耗材烘干可选择60℃。 4、天平 用于称量物体质量，常用0.1g或0.01g电子天平。 5、均质器 用于从固体样品中提取细菌，常用拍打式均质器，可有效地分离被包含在固体样品内部和表面的微生物均一样品，确保无菌袋中混合全部的样品。处理后的样品溶液可直接进行取样和分析，没有样品的变化和交叉污染的危险。 6、灭菌锅 采用高温高压对器械、玻璃器皿、溶液培养基等进行消毒灭菌，有：手提式蒸汽灭菌锅，立式压力蒸汽灭菌锅，卧式高压蒸汽灭菌锅。 7、微波炉/电炉/电磁炉 用于试剂的配制，固体培养基的熔化。 8、移液枪 用于实验室少量或微量液体的移取。 9、冰箱/冰柜 实验室保存试剂、样品，放入前，确认试剂的最佳保存条件。 10、摇床 使菌液不停震荡，有利于与空气接触，进行富集培养。 11、显微镜 用于观察微生物形态。 12、生物安全柜 如果你需要做致病菌检测，实验室需要达到生物安全二级要求，还需要增加生物安全柜。 13、PCR仪器 如果做分子检测，还需配备PCR仪器及相关设备。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                微生物基本知识：原核微生物的基因重组知识解析！ 百欧博伟生物：凡把两个不同性状个体内的遗传基因转移到一起，经过遗传分子间的重新重组合，形成新遗传型个体的方式，称为基因重组。重组可使生物体在未发生突变的情况下，也能产生新遗传型的个体。    基因重组是杂交育种的理论基础。由于杂交育种选用已知性状的供体菌和受体菌作为亲本。因此比诱变育种前进了一大步。同时也可消除某一菌株长期诱变导致产量上升缓慢现象。因此它是一种重要的育种手段。 原核微生物的基因重组 一、转化 (transformation)    转化是细菌中最早被发现的遗传物质转移形式。 l928 年 Griffith 用肺炎链球菌对小鼠的感染实验以及 10 多年后 Avery 等体外转化过程的实现，转化因子 DNA 的证实，是现代生命科学发展的重要起点。 1、几个概念    转化 受体菌直接吸收了来自供体菌的 DNA 片段，通过交换把它整合到自己的基因组中，从而获得了新的遗传特性的现象。    转化子（ transformant ） 受体细胞经复制分裂后出现了供体性状的子代。    感受态 (competence) 细菌能够从周围环境中吸收 DNA 分子进行转化的生理状态。 2、转化的条件    包括受体菌与外源 DNA 的条件。    受体菌 只有处于感受态的细菌才能吸收外源 DNA 实现转化。细菌的感受态是一种生理状态，它可以通过感受态因子（细菌生长到一定阶段分泌一种小分子的蛋白质）在细胞间的转移而获得。这种感受态因子与细胞表面受体相互作用，诱导一些感受态 -- 特异蛋白表达，其中一种是自溶素，它的表达使细胞表面的 DNA 结合蛋白及核酸酶裸露出来，使其具有与 DNA 结合的活性。    现在可用人工的方法提高受体菌感受态的水平，通过以 CaCl2 、 cAMP 等处理，后者可使感受态水平提高 10000 倍。    外源 DNA 必须具备两个基本条件，即具有高相对分子质量和同源性：①转化 DNA 的相对分子质量通常在 1 × 10 7 以下，约占细菌染色体组的 0.3 ％，否则活性丧失；多数研究中，基因转移使用的是双链线性 DNA ，某些单链、共价闭合环状 DNA 也可用于转化；②亲缘关系越近， DNA 的纯度越高，则转化率越高。 3、转化过程    主要通过 3 个步骤完成。    感受态细胞的建立 可用人工方法提高受体菌的感受态水平，通常以 CaCl 2 、 cAMP 等处理菌体，后者可使感受态水平提日 l0 000 倍。   DNA 的结合和摄取 首先是供体双链 DNA 与受体细胞壁上的接受位点相结合。此反应的最初是可逆的，但随着与细胞膜蛋白的进一步作用，其与细胞壁的结合则变得十分稳定而不可逆。随后其中一条链被细胞表面上的核酸酶降解，降解产生的能量协助把另一条链推进受体细胞。亦发现有完整的双链被摄取的情况，如革兰氏阴性菌——嗜血杆菌。    转化因子与染色体重组 当单链进入受体细胞后，便与双链结构的受体染色体 DNA 同源片段发生交换重组。即与受体菌 DNA 整合，形成供体 DNA-- 受体 DNA 复合物，再通过 DNA 复制和细胞分裂而表现出转化性状，形成转化子。    能够发生转化的微生物有：肺炎链球菌、嗜血杆菌属、芽孢杆菌属、假单胞杆菌属、奈瑟氏球菌属、葡萄球菌属和根瘤菌属等 20 多种菌。转化性状也多样：如形态变化、荚膜物质、糖发酵、耐药性、抗原性、致病力、代谢产物、营养需要等的变化。一般转化率为 0.1 ％一 1 ％。    如果把噬菌体或其他病毒的 DNA （或 RNA ）抽提出，用它去感染感受态的宿主细胞，并进而产生正常的噬菌体或病毒后代，这种特殊的转化称为转染。 二、转导 (transduction)    1952 年 Zinder 和 Lederberg 在验证鼠伤寒沙门氏菌是否也存在接合现象时发现了转导现象。    通过完全缺陷或部分缺陷噬菌体为媒介，把供体细胞的 DNA 片段携带到受体细胞中，通过交换与整合，从而使后者获得前者部分遗传性状的现象，称为转导。获得新性状的受体细胞，称为转导子 (transductant) 。携带供体部分遗传物质 (DNA 片段 ) 的噬菌体称为转导噬菌体。在噬菌体内仅含有供体菌 DNA 的称为完全缺陷噬茵体；在噬菌体内同时含有供体 DNA 和噬菌体 DNA 的称为部分缺陷噬菌体 ( 部分噬菌体 DNA 被供体 DNA 所替换 ) 。根据噬菌体和转导 DNA 产生途径的不同，可将转导分为普遍性转导和局限性转导。 1、普遍性转导 (general transduction)    通过完全缺陷噬菌体对供体菌任何 DNA 小片断的“误包”，而实现其遗传性状传递至受体菌的转导现象，称为普遍性转导。    普遍性转导的机制——“包裹选择模型”，当噬菌体侵染敏感细菌并在细菌内大量复制增殖时，亦把寄主 DNA 降解为许多小的片段，在装配时，少数噬菌体 (10 -6 一 10 -8 ) 错误地包装了宿主的 DNA 片段并能形成“噬菌体”，这种噬菌体称普遍性转导噬菌体 ( 为完全缺陷噬菌体 ) 。随着细菌的裂解，转导噬菌体也被大量释放。当这些转导噬菌体再次侵染受体菌时，其中的供体 DNA 片段被注入受体菌。    如果该 DNA 片段能与受体菌 DNA 同源区段配对，通过遗传物质的双交换而进行基因重组并形成稳定的转导子，称完全普遍性转导。如鼠伤寒沙门氏菌的 P22 噬菌体、大肠杆菌的 P1 噬菌体和枯草芽孢杆菌的 PBS1 和 SP10 等噬菌体中都能进行完全转导。    如果该 DNA 片断不能与受体菌 DNA 进行交换、整合和复制，只以游离和稳定的状态存在，而仅进行转录、转译和性状表达，称流产转异。发生流产转导的细胞在其进行分裂后，只能将这段外源 DNA 分配给一个子细胞，而另一子细胞仅获得供体基因转录、转译而形成的少量产物 -- 酶，因此在表型上仍可出现轻微的供体菌特征，每经分裂一次，就受到一次“稀释”。所以能在选择培养基上形成微小菌落就成了流成转导子的特点。 2、局限性转导 (specialized transduction)    通过部分缺陷噬的温和噬菌体把供体菌的少数特定基因携带到受体菌中，并获得表达的转导现象）。转导后获得了供体部分遗传特性的重组受体细胞称为局限转导子。 （1）局限性转导的机制——“杂种形成模型” λ噬菌体的线状双链 DNA 分子的两端为 12 个核苷酸单链（粘性未端 cos 位点），在溶源状态下，以前噬菌体状态存在于细胞染色体上。被诱导后，在裂解细菌时，其以粘性末端形成的环状分子通过滚环复制形成一个含多个基因组的 DNA 多联体，以 2 个 cos 位点之间的距离决定其包装片段的大小而进行切割、包装，最终形成转导噬菌体。在极少数情况下 ( 约 10 -5 ) ，在前噬菌体两端邻近位点上与细菌染色体发生错误的切割，使其重新形成的环状 DNA 中，同时失去前噬菌体的一部分 DNA 和增加了一段相应长度的细菌宿主染色体 DNA ，这样形成的杂合 DNA 可正常被包装、复制。形成的新转导噬菌体称为部分缺陷噬体。因为λ前噬菌体位点两端是细菌染色体的 gal + ( 发酵半乳糖基因 ) 和 bio + ( 利用生物素基因 ) ，故形成的转导噬菌体通常带有 gal + 或 bi0 + 基因，故这些部分缺陷噬菌体表示为λ dga1( 缺陷型半乳糖转导噬菌体 ) 或λ dbio( 缺陷性生物素转导噬菌体 ) 。这些转导噬菌体可重新侵入受体菌，侵入后，噬菌体 DNA 与受体菌的 DNA 同源区段配对，通过双交换而整合到受体菌的染色体组上，使受体菌获得了供体的这部分遗传特性。 （2）局限性转导中的低频转导与高频转导 低频转导 (LFT) ：由于宿主染色体上进行不正常切离的频率极低，因而在裂解物中所含的部分缺陷噬菌体的比例是极低（ 10 -4 --10 -6 ）的，这种裂解物称为 LFT 裂解物。 LFT 裂解物在低 m.o.i(multiplicity of infection) 情况下感染宿主，就可获得极少量的转导子。高频转导 (HFT) ：形成转导子的频率很高，理论上可达 50 ％，故称之为高频转导。其原因是因为供体菌为双重溶源菌，它同时有两种噬菌体整合在细菌的染色体上。例如，大肠杆菌 K12 株，其双重溶源菌为 E.coli K12( λ / λ dg), 即其前噬体体有λ和λ dg 为缺陷噬菌体，带有供体 gal + 基因，但丢失了部分噬菌体本身的 DNA ；而λ噬菌体为正常噬菌体，不带 gal 基因，但起辅助作用，称为辅助噬菌体，可弥补λ dg 的不足，使λ dg 也能成为“完整噬菌体”而释放。这样，一个细菌便可同时等量地释放出λ dg 和λ两种噬菌体，这时的裂解物称为 HFT 裂解物，当用低   m.o.i 的 HFT 裂解物去感染另一个 E.coligal - 受体菌，是可高频率的把它转化为能发酵乳糖的 E.coligal + 转导子。这种方式称为高频转导。    当温和噬菌体感染其宿主而使之发生溶源化时，因噬菌体的基因整合到宿主的基因组，而使后者获得了除免疫以外的新性的现象，称为溶源转变。 三、接合 (conjugation)    指供体菌和受体菌完整细胞间的直接接触，而实现大段的 DNA 传递现象。    Iederberg 和 Tatum 于 1946 年设计了一个有名的实验，才证明了原核生物的接合现象。他们筛选出了两种不同营养缺陷型的大肠杆菌 K12 突变株，其中 A 菌株是 met- 、 bio- ， B 菌株是 thr- 、 Leu- ，将它们在完全培养基上混合培养后，再涂布于基本培养基上。结果发现，在基本培养基上出现了 met + 、 bi0 + 、 thr + 、 1eu + 的原养型菌落 ( 约为 10 -7 ) ，而分别涂布的两种亲本菌株对照组都不出现任何菌落。进一步的实验证实，上述遗传重组的形成，是两个亲本细胞接合以后发生基因重组的结果。在细菌中，接合现象发研究最清楚的是 E.coli ，研究发现 E.coli 是有性别分化的，决定性别的是一种质粒，即 F 因子。现在根据 E.coli 细胞中是否存在 F 因子以及在细胞中的存在方式不同，可把大肠杆菌分成以下四种类型。    F + 菌株 F 因子以游离状态存在，可独立于染色体进行自主复制。一般有 1-4 个，且细胞表面有相当数量的性菌毛。    F - 菌株 不含 F 因子，无相当数量的性菌毛。    Hfr 菌株 F 因子整合在宿主染色体的一定部位，并与宿主染色体同步复制。发现 Hfr 与 F - 菌重组的频率要比 F + 菌与 F - 菌重组的频率高得多。    F ′菌株 因为 F 因子整合到染色体上是一种可逆过程，当 F 因子从 Hfr 菌染色体上脱落时，会出现一定概率的错误基因交换，从而使 F 因子带上宿主染色体的遗传因子，这时的 F 因子称为 F ′因子。    几种接合的结果    F+ × F- 接合 通过 F + 菌产生的性菌毛把两者连接在一起，并在细胞间形成胞质桥 ( 或称接管 ) ， F 因子通过胞质桥进入受体细胞，使重组体从 F - 变成了 F + 菌。其主要过程是， F 因子的一条 DNA 单链断裂 ( 在特定位点上 ) 、解链，并单向转移进入受体细胞，在此作为模板而形成新的 F 因子；另一条在供体细胞内的 DNA 链也成为模板并以滚环模型形式复制；最终供体菌及受体菌均成为 F + 菌。    Hfr × F- 接合 当 Hfr 与 F- 菌株发生接合时， Hfr 的染色体双链中的一条单链在 F 因子处发生断裂，由环状变为线状， F 因子则位于线状单链 DNA 之末端。整段线状染色体也以 5- 末端引导，等速转移至 F - 细胞。在没有外界因素干扰的情况下，这一转移过程的全部完成约需 100 分钟。实际上由在转移过程中，使接合中断的因子很多，因此这么长的线状单链 DNA 常常在转移过程中发生断裂。所以处在 Ffr 染色体前端的基因，进入 F- 的几率就越高，这类性状出现在接合子中的就越早。由于 F 因子位于线状 DNA 的末端，进入 F- 细胞的机会最少，故引起 F- 变成 F+ 的可能性也最小。因此 Hfr 与 F- 接合的结果其重组频率虽最高，但转性频率却最低。   F ′与 F- 接合 通过 F ′与 F- 的接合就可以使后者变成 F ′。它既可使后者前者的 F 因子，同时双获得前者的部分遗传性状。 四、原生质体融合（ protoplast fusion ）    通过人为的方法，使遗传性状不同的两细胞的原生质体发生融合，并进而发生遗传重组以产生同时带有双亲性状的、遗传性稳定的融合子（ fusant ）的过程 .    能进行原生质体融合的细胞是极其广泛的，不仅包括原核生物，而且还包括各种真核细胞。原生质体融合的优越性在于： 1、它打破了微生物的种属界限，可以实现远缘菌株的基因重组。 1981 年 Yamada 有 PEG 诱导酵母原生质体与细菌细胞成功的融合，并使其固氮作用或光合作用实现了不稳定的表达。 2、原生质融合可使遗传物质传递更为完整、获得更多基因重组体的机会，有利于提高育种速度。    此外原生质体融合技术还可用于研究细胞质遗传、核质关系等问题，因此原生质体融合技术在生产实践及理论研究上均有具有重要意义。    原生质体融合技术及育种步骤 1、原生质体的制备    制备原生质体是保证实现原生质融合技术的关键。主要是要去除细胞壁。 2、原生质体再生    是指去壁后的原生质体能重建细胞壁，恢复细胞完整形态，并能生长、分裂的过程。这是原生质融合育种的必要条件。通常在原生质体融合前要测定原生质体的再生率，以此分析其融合率不高是由于双亲株原生质体本来就没有活性或再生率低，还是由于融合条件不适所致。因此测定原生质体形成率和再生率不仅可作为检查、改善原生质体形成和再生条件的指标，也是分析融合实验结果，改善融合条件的一个重要指标。 3、原生质体融合    原生质体融合方法 主要有生物助融（通过病毒聚合剂如仙台病毒等病毒和某些生物提取物等使原生质体融合）、物理助融（离心沉淀、电脉冲等）、化学助融（通过化学助融剂如 PEG 加 Ca 2+ ）。 4、融合子的检出与鉴定    原生质体融合育种的主要目的在于迅速准确地检出各种类型的融合子，并通过鉴定、筛选等步骤，及时选出稳定高产的融合子。 ①融合子的检出    直接检出法 将融合液涂布于无双亲株生长所必要的营养物或存在抑制双亲生长的抑制物的再生平皿上。    间接法 用影印法 ②融合子的鉴定    经过传代选出稳定融合子，可从形态学、生理生化、遗传学及生物学等几方面进行鉴定。如菌落形态和颜色变化，代谢产物的产量， DNA 含量分析等。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 微生物也能助增产，科技助力华北盐碱地小麦生产！ 百欧博伟生物：近日，由中国农业科学院农业资源与农业区划研究所主办的“盐碱地分区改良和综合利用技术集成示范”现场观摩会在山东德州举行。 据悉，该项目是中国农科院重大科技任务之一，观摩会展示了“微生物抗逆增效技术”在轻中度盐碱地上的田间试验效果。 课题负责人张晓霞介绍，在示范中，科研人员采用种子包衣和种肥同播等微生物强化技术，经该技术处理的小麦，株高及有效分蘖增加明显，可显著减轻盐碱条件下对小麦的胁迫程度，专家组现场理论测产表明，项目研发的微生物强化技术实现增产12.3%。 据介绍，微生物强化技术，是依托国家农业微生物种质资源库的资源优势，结合盐碱地作物类型及土壤类型等特点，筛选出具有多种促生功能的盐碱地适生有益微生物的尝试。 通过微生物种类和功能互补进行有机组合，不断优化配方，历经多年联合攻关，在小麦、玉米、向日葵、水稻等多种作物开展试验示范，目前形成了集采用种子包衣、水肥菌一体化等核心技术的轻中度盐碱地轻简化增产增效技术体系，在山东、内蒙古、黑龙江等多地进行验证，表明在有效降低投入成本的同时，显著提高作物的盐碱耐受性和作物单产。 微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！ 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！ 为更好服务社会，创造双方利益较大化，中国微生物菌种查询网提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。欢迎您的咨询！

                小鼠膀胱平滑肌细胞的运输和保存及培养操作规程！ 小鼠膀胱平滑肌细胞采用酶解法制备而来，α-SMA、Desmin呈阳性，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 一、产品信息平台编号：Bio-73814 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：小鼠膀胱平滑肌细胞培养条件：原代细胞取组织现分用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述膀胱是一个储尿器官,它是由平滑肌组成的一个囊形结构，位于骨盆内，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁分为三层：即浆膜层、肌肉层和粘膜层。平滑肌细胞主要处于肌肉层，肌肉层中包含：1.逼尿肌：逼尿肌为膀胱壁层肌肉的总称，由平滑肌构成。分为三层，内外层为纵行肌，中层为环形肌。环状肌最厚，坚强有力。2.膀胱三角区肌：三角区肌是膀胱壁层以外的肌肉组织，起自输尿管纵肌纤维，向内、向下、向前扇状展开。向内伸展部分，和对侧肌彼此联合成为输尿管间嵴，向下向前伸展至后尿道部分，为贝氏(Bell)肌，另有一组左右肌纤维在三角区中心交叉成为三角区底面肌肉。逼尿肌收缩，可使膀胱内压升高，压迫尿液由尿道排出。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌，形成尿道内括约肌。在括约肌收缩能关闭尿道内口，防止尿液自膀胱漏出。 三、细胞特性1)细胞来源于人正常膀胱组织。2)细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。            七、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备内皮细胞专用基础培养基；优质胎牛血清，5%；添加对应因子1%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜。第二天检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含6ml培养基瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000rpm离心分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

        地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌在农业上的应用！ 地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌在农业中广泛应用，具有促进植物生长、抑制病原菌、改善土壤结构等益处。通过生物肥料制作、土壤处理、种子处理和叶面喷施等方式，可提高农产品产量和质量，减少化学农药使用，改善土壤结构，增强植物抗逆性。随着科技进步，其应用前景广阔，但需注意菌种筛选、使用方法和安全性评估。 在当今的农业领域，微生物的运用日益受到重视。其中，地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌作为常见的芽孢杆菌，在农业方面展示出广泛的应用价值。 地衣芽孢杆菌拥有众多益处。其能有力促进植物的生长，特别是在根系发育方面发挥重要作用，提升植物对养分的吸收能力。此外，它还能有效抑制土壤中的病原菌，降低病害的发生几率。 枯草芽孢杆菌在农业中的应用同样极为广泛。它具备产生多种抗生素的能力，可高效抑制病原菌的生长，从而显著增强植物的免疫力。除此之外，枯草芽孢杆菌还能改善土壤结构，增加土壤肥力，为植物的健康生长创造更有利的条件。 解淀粉芽孢杆菌在分解有机物方面具备独特的功能。它能够分解土壤中的有机物质，为植物提供充裕的养分。与此同时，它还有助于促进土壤中有益微生物的生长，维护土壤生态的平衡。 在实际的应用过程中，这三种芽孢杆菌既可单独运用，也可混合使用，具体应用方式包括： 1、生物肥料的制作：将其添加至肥料中，为植物提供养分并提供保护。 2、土壤处理：直接应用于土壤，改善土壤质量，营造良好的生长环境。 3、种子处理：包裹在种子表面，提高种子的出苗率和抗性。 4、叶面喷施：喷洒于植物叶片，增强植物的免疫力。 这三种芽孢杆菌在农业上的应用带来了众多优势： 1、提高农产品的产量：通过促进植物生长、增强免疫力等多种方式，提高作物的产量。 2、提升农产品的质量：使农产品更加健康、安全、优质。 3、减少化学农药的使用：降低对环境的污染，保护生态环境。 4、改善土壤结构：增加土壤肥力，提高土壤的生态功能。 5、增强植物的抗逆性：使植物更好地应对各种逆境，如干旱、病虫害等。 随着科学技术的持续进步，它们的应用前景将更为广阔。例如： 1、在基因编辑技术的辅助下，对这些芽孢杆菌进行基因改造，使其具备更强大的功能。 2、结合大数据和人工智能技术，实现对芽孢杆菌应用的精准调控和预测。 3、拓展应用领域，不仅仅局限于传统的农业生产，还可应用于生态修复、城市绿化等领域。 然而，在推广和应用这些芽孢杆菌的过程中，也需要注意以下几点： 1、菌种的筛选和培育：选择适应特定环境和作物的优良菌种。 2、使用方法的科学性：根据不同的作物和土壤条件，制定合理的使用方案。 3、安全性评估：确保芽孢杆菌的使用不会对人体健康和生态环境造成负面影响。 总之，地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌在农业上的应用具有重要的意义和价值。通过不断的研究和探索，我们将能够更好地发挥它们的作用，实现农业的可持续发展。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 小鼠血管内皮细胞试剂盒的知识与应用及相关研究！  一、背景 小鼠血管内皮细胞试剂盒适用于分离培养小鼠血管内皮细胞。小鼠血管内皮细胞试剂盒提供了最适的组织分离条件，分离单个细胞利用的成纤维抑制体系，可以程度地降低所培养的血管内皮原代细胞中成纤维细胞的含量。小鼠血管内皮细胞培养试剂盒适合于培养小鼠的血管内皮细胞。本试剂盒包含：小鼠血管内皮细胞组织解离液；小鼠血管内皮细胞组织处理缓冲液；小鼠血管内皮细胞成纤维抑制剂；小鼠血管内皮组织洗液；小鼠血管内皮细胞生长因子及血清；小鼠血管内皮细胞基础培养基；小鼠血管内皮组织预备液。 血管是指血液流过的一系列管道。人体除角膜、毛发、指（趾）甲、牙质及上皮等处外，血管遍布全身。按血管的构造功能不同，分为动脉、静脉和毛细血管三种。其中，血管内皮细胞具有活跃的代谢功能能够生成和灭活多种生物活性物质。 内皮细胞也称血管内皮细胞，通常指衬于心、血管和淋巴管内表面的单层扁平上皮，它形成血管的内壁。它们具有吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织，还参与机体免疫活动功能。用高倍镜观察肠系膜上的毛细血管，可见到内皮细胞，内皮细胞较间皮细胞小，排列紧密。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成。它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至最小的微血管。心室内表面的内皮细胞称为心内膜。微血管及淋巴微管是由单一层的内皮细胞所组成。 小鼠血管内皮细胞可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。利用小鼠血管内皮细胞试剂盒中提供的血管内皮组织分离体系来分离处理过的血管内皮组织能使得血管内皮组织中内皮细胞的一些功能特性发生改变，从而将血管内皮细胞分离开来。 二、应用 小鼠血管内皮细胞试剂盒可用于α-亚麻酸改善高血压胰岛素抵抗大鼠血管内皮细胞损伤的作用和机制研究： 高血压是临床上最常见的心血管疾病之一。具有发病率高和致死率高等特点。最近的研究发现，高血压人群大多数都伴有体内代谢的异常，包括高血糖，高胰岛素血，高血脂，肥胖，糖耐量减低等症状。代谢紊乱加重高血压血管病变，促进血管内皮损伤。人们认为胰岛素抵抗是高血压代谢失调的基础因素，由此将胰岛素抵抗和高血压联系在了一起。 近些年来，大量研究证据表明胰岛素抵抗和高血压互为因果相互影响加重了血管内皮损伤，导致血管结构功能的异常，引起组织和靶器官的损害。因此对高血压降压治疗的同时，改善胰岛素抵抗可以显著保护血管内皮细胞减轻内皮损伤，为高血压病的预防和治疗提供了新的思路。将培养良好的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)用于实验。 实验结果：α-亚麻酸干预后可以降低AngⅡ诱导内皮细胞的MDA的增高，增加SOD、CAT和NO的表达，显著降低AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡水平。α-亚麻酸+angII组中p-Akt表达增高，IRS-1蛋白磷酸化水平及caspase3的表达降低。给予p-Akt抑制剂LY294002处理后能够明显减弱α-亚麻酸的抗凋亡作用，细胞凋亡率和下游信号分子caspase3表达升高。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                检验技术：微生物紫外灯的杀菌作用如何更好发挥？ 百欧博伟生物：紫外线照射是目前常用的空气和表面的消毒方法，在水和其他液体的消毒中也有应用。但在紫外灯的使用过程中，往往由于不了解其作用机理或疏于检测，不能使其发挥有效的作用，达不到预期的杀菌效果。 PART 1 严禁频繁启动紫外线灯管 即减少开关次数，特别是在短时间内，以确保紫外灯管寿命。 PART 2 定期清洗，保持清洁 紫外线灯管表面的污垢会影响紫外线的穿透力，从而影响杀菌效果，因此需要定期清洗，用酒精棉球或纱布擦拭灯管。 PART 3 更换灯管流程 更换灯管时，先将灯管电源插座拔掉，抽出灯管，再将擦净的新灯管小心地插入杀菌器内，再插上电源。 注意不要用手直接触摸紫外灯管，如发现有手印或灰尘等，应擦干净再使用，否则会因污点影响杀菌效果。 PART 4 预防紫外线辐射 紫外线对细菌有强大的杀伤力，对人体同样有一定的伤害，启动消毒灯时，应避免对人体直接照射，必要时可使用防护眼镜，不可直接用眼睛正视光源，以免灼伤眼膜。 PART 5 供电频率 交流供电，电源的频率不同，灯的辐射通量也不同，所以使用或检测紫外杀菌灯时，必须充分考虑供电频率。 PART 6 使用标准镇流器 紫外灯配用的镇流器的质量直接影响串接在电路中紫外灯的光辐射。评价紫外灯的技术指标时，必须在规定的供电条件下，使用标准镇流器测得的数据才有说服力。 PART 7 紫外灯检测 紫外灯的寿命是有限的，目前国产紫外灯的有效寿命一般为1000~3000h，而进口的低压高能灯管使用时间可达8000～12000h，中压灯管可达5000～6000h。因此,必须建立记录和监测制度，使用频率较高的实验室，建议检测间隔不要超过1个月。 PART 8 紫外灯的安装 紫外光的强度随着光源距离的平方而降低，由于穿透能力很弱，所以必须靠近被处理的物质。因此，紫外光对于大的开放区域的空气消毒基本是起不到太多效果的，它只适用于局部或区域消毒。 紫外线灭菌效果与照射时间和距离有关，时间长而距离近则效果较好。紫外灯的安装应该以略高于工作人员的头顶较为适宜。即1.8m~2.2m。之所以要求距离地面1.8m~2.2m，除了灭菌距离的因素外，考虑一般人的呼吸带在这一区域，其次，既方便擦拭清洁灯管表面，又不会影响人员活动。 目前，由杀菌率来精确计算生产车间所需的紫外线灯数还比较困难，因为涉及到房间的换气次数，生产车间的高度、地面材料、墙壁房顶的反射效率等等。 这里给大家简单介绍一下。 安装紫外线灯的数量为平均≥1.5W/m3，也就是说，灯管数量与房间大小（体积）有关，可以通过公式计算得知。 安装19W紫外线灯管，计算公式为： 房间面积×房屋高度×1.5÷19 安装30W紫外线灯管，计算公式为： 房间面积×房屋高度×1.5÷30 安装40W紫外线灯管，计算公式为： 房间面积×房屋高度×1.5÷40 举个列子： 假设：房间面积15m2，室内高度为3m 安装19W紫外线灯管： 15×3×1.5÷19=3.5526，即安装4根。 安装30w紫外线灯管： 15×3×1.5÷30=2.25，即安装3根。 安装40w紫外线灯管： 15×3×1.5÷40=1.6875，即安装2根。 同样大小的房间，由于灯管瓦数不同，所需数量也有差别。 PART9紫外线的杀菌作用 紫外线杀菌是表面杀菌，用紫外线杀菌灯照射室内空气，能起到防止细菌污染及杀菌的效果。它是目前空气消毒普遍采用的较有效的方法，但紫外线的穿透能力比较弱，普通玻璃和灰尘等都能影响其辐射杀菌效果，对没有照射到的部分就没有杀菌作用。 另外，紫外灯消毒虽然方便实用，却不能彻底灭菌，特别对细菌的芽孢杀灭效果很差。所以紫外线的作用是非常有限，企业对生产环境的要求不能过度地依赖紫外线的杀菌效果，还要注意卫生环节和操作上的规范。 PART 10 在生产加工车间，紫外灯的电源开关设置 一般情况下，车间的紫外线灯是在上班前提前半小时至一小时或者下班后由值班人员打开，上班时工作人员应该在关闭紫外线灯的情况下洗手更衣进入车间，当光线不足时，可以开启日光灯进行工作。 所以，在电源设计时紫外线灯和日光灯的开关要分开电路，最好用不同颜色或标识来区分电源开关。 PART 11 生产加工车间的紫外灯能否加装防护装置？ 在许多食品加工企业中，生产车间的工作台、敞开式生产线及裸露食品与原料上方的照明设备一般都加有防护装置。但由于紫外线的穿透能力差，加防护装置将减弱杀菌效果甚至失去杀菌效果。 所以，在生产车间内的紫外线灯不能加装防护装置。正因为不能加装防护装置，紫外灯不能装在工作台的正上方，以免发生爆炸时，玻璃碎片散落在食品当中。加上紫外线对人体的伤害，所以使用紫外灯的最好用法应是： 上班前或下班后才开启, 一般开启30分钟后关闭 20～30分钟人员再进入，这样既达到杀菌效果，又对操作人员身体起到防护作用，也减少了生产过程中紫外线灯发生爆炸，致使玻璃碎片散落在食品当中的可能性。 所以只有了解紫外线的杀菌作用，正确地安装、使用和维护紫外灯，才能使生产车间达到灭菌效果，有效地进行空气净化，从而防止生产环境受到污染或交叉污染的发生。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  泡盛曲霉的培养方法与实验内容及研究进展！ 泡盛曲霉，拉丁学名（Aspergillus awamori），泡盛曲霉分布广泛，存在于土壤、空气及各种腐败的有机物上，分生孢子靠气流传播。真菌、细菌和酵母菌都能产生阿魏酸酯酶，但绝大多数阿魏酸酯酶来源于真菌。已发现有超过30种微生物能产生阿魏酸酯酶，如泡盛曲霉、黑曲霉、构巢曲霉、米曲霉、塔宾曲霉、出芽短梗霉、耐热梭状芽孢杆菌、热纤梭菌等。 一、菌种简介平台编号：Bio-65773 提供形式：冻干物拉丁属名：Aspergillus Awamori 中文名称：泡盛曲霉属名：Aspergillus种名加词：awamori来源历史：←黑龙江省轻工科学研究院（L11）←黄海化学工业研究社收藏时间：2005.12.30原始编号：黄海324资源归类编码：15151913102模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：生产淀粉酶和单宁酸。特征特性：分生孢子顶囊呈黑色，边缘裂开成放射圆柱体，分生孢子梗光滑。最适生长温度为30-35℃。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.0～6.5。培养温度：28-32℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：40494用途：研究；生产；生产淀粉酶和单宁酸。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、真菌简介中文名：泡盛曲霉拉丁学名：Aspergillus awamori拉丁别名：Aspergillus luchuensis Inui分类：cellular organisms; Eukaryota; Fungi/Metazoa group; Fungi; Ascomycota; Pezizomycotina; Eurotiomycetes; Eurotiales; Trichocomaceae; mitosporic Trichocomaceae; Aspergillus 分布：分布广泛，存在于土壤、空气及各种腐败的有机物上，分生孢子靠气流传播。用途：葡萄糖淀粉酶生产菌种。在印度尼西亚，中国，日本，米根霉被用来发酵生产食品和酒精饮料。形态：菌落疏松，不易挑起。培养：培养基：土豆浸出汁100ml，葡萄糖2g。24℃培养。保藏温度：-70 摄氏度 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调ph→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、研究进展麦麸、玉米皮、蔗渣的主要成分是纤维素、半纤维素、木质素等具有功能活性的细胞壁物质，作为农副产物，它们年产量很大，但由于较少对其进行深加工和再利用，使得这些农产品经济附加值很低，若能对其中的功能成分进行开发和综合利用，可大大提高农产品的经济和社会效益。在构成这些物质的多糖侧链残基上，存在一种重要的生理活性物质———阿魏酸。阿魏酸常以酯键与细胞壁多糖以醚键与木质素交联形成一种复杂的“网络结构”，是当归、川芎、阿魏等中药的重要功能成分之一。阿魏酸具有多种生理功能，如清除自由基、抗紫外线辐射、抗血栓、降血脂、防治冠心病、抗菌消炎、止痛、抗突变、防癌、增强精子活力以及调节人体免疫等。阿魏酸酯酶（E.C.3.1.1.73，FAE）又称肉桂酸酯酶，属羧酸酯水解酶的一个亚类，是能水解阿魏酸甲酯、低聚糖阿魏酸酯和多糖阿魏酸酯中的酯键，将阿魏酸游离出来的一种胞外酶。在食品工业中，可利用阿魏酸酯酶打断阿魏酸与细胞壁材料，如麸皮、秸秆中多糖的交联，高效降解多糖并获得反式阿魏酸，它是重要的功能性食品基料；在饲料工业中，可利用阿魏酸酯酶处理植物性的原材料，将阿魏酸从植物细胞壁的结构中游离出来，破坏细胞壁的骨架结构，木质素、半纤维素及纤维素之间的连接被部分打破，结构变疏松，原料更容易被牲畜消化吸收，提高了饲料的利用效率。可见，阿魏酸酯酶具有广阔的应用前景。1987年MackenzieCR等培养橄榄链霉菌时发现阿魏酸酯酶能分解阿魏酸与麦麸相连的酯键，把阿魏酸从麦麸中释放出来，研究表明，真菌、细菌和酵母菌都能产生阿魏酸酯酶，但绝大多数阿魏酸酯酶来源于真菌。已发现有超过30种微生物能产生阿魏酸酯酶，如泡盛曲霉、黑曲霉、构巢曲霉、米曲霉、塔宾曲霉、出芽短梗霉、耐热梭状芽孢杆菌、热纤梭菌等。方园等人以3株泡盛曲霉为菌种，筛选出产阿魏酸酯酶酶活力最高的菌株，研究并得出其产酶的最佳工艺条件：麦麸∶蔗渣2∶1(W∶W)，4%(NH4)2SO4，0.23%CuSO4，固液比1∶1，在温度28℃下发酵3d，酶活达到0.0679U/g。I-HsinLee等人采用泡盛曲霉发酵黑豆曲，结果表明，由于发酵微生物产生的β-葡糖苷酶的催化作用，发酵能显著提高黑豆曲的总酚和花青素含量，抗氧化活性也有显著提高。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

               人瘢痕疙瘩成纤维细胞的复苏与传代及冻存操作说明！ 细胞简介平台编号：Bio-129554 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：HKF 细胞名称：人瘢痕疙瘩成纤维细胞HKF产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研3类培养体系：DMEM高糖培养基（不含丙酮酸钠）+10%FBS+1%三抗培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：人瘢痕疙瘩成纤维细胞HKF取自女性供体，经过SV40永生化处理。注释：倍增时间39h用途：细胞系注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。3、操作离心，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液，重悬离心管底部细胞沉淀，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中。 细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吸出完全培养基，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10 min ，弃上清收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。  细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶，需传代的细胞 ，移液枪，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台，CO2 培养箱，倒置显微镜，离心机实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶，需冻存的细胞，移液枪，枪头 ，离心管，冻存管，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  微小根毛霉的培养方法与实验内容及注意事项！ 微小根毛霉是Rhizomucor属的微生物，原产地为中国。PDA培养基上生长较快，培养4天直径几达9cm，菌丝初为白色，后变为土灰色，反面无色。菌丝无隔，分枝，与孢囊梗相对生出假根，具囊轴，无囊托，孢囊孢子球形。耐热，50℃生长良好。主要用途为研究，具体用途为酿造白酒，产淀粉酶。 一、菌种简介平台编号：Bio-090934 规格：冻干物拉丁属名：Rhizomucor Pusillus 中文名称：微小根毛霉拉丁名称：Rhizomucor pusillus来源历史：←中国科学院成都生物研究所收藏时间：2018/1/10原始编号：JSM-9(H).11原产国：中国资源归类编码：15151319108模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：PDA培养基上生长较快，培养4天直径几达9cm，菌丝初为白色，后变为土灰色，反面无色。菌丝无隔，分枝，与孢囊梗相对生出假根，具囊轴，无囊托，孢囊孢子球形。耐热，50℃生长良好。具体用途：酿造白酒。产淀粉酶。生物危害程度：四类培养基名称：马铃薯、葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养基成分：马铃薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，琼脂 15.0g，pH自然。[注] 马铃薯提取液：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。培养温度：48℃需氧类型：好氧分离基物：中高温大曲（成品曲）采集地：江苏省淮安市涟水县保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：酿造白酒。产淀粉酶。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、微生物培养方法1、平板划线分离法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的，但平板划线分离法不能对菌落计数，而稀释涂布平板法培养过程复杂，对平板的要求比较高，可参照以下步骤：a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃，向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均匀，然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿，轻轻摇动培养皿，使培养基溶液均匀分布在培养皿底部，待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g，放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇15～20min混合均匀，用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培养基表面的中央位置，用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃)：是适用范围最广的微生物保存法。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   解脂假丝酵母解脂变种的形态特征与主要应用！ 解脂假丝酵母解脂变种是Candida属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为石油脱蜡。 一、菌种简介平台编号：Bio-57932 提供形式：冻干物拉丁属名：Candida Lipolytica Var. Lipolytica 中文名称：解脂假丝酵母解脂变种属名：Candida种名加词：lipolytica var. lipolytica来源历史：←上海市工业微生物研究所←复旦大学新型发酵厂收藏时间：1979.00.00原始编号：Y-133资源归类编码：15151111103模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：石油发酵生产柠檬酸。特征特性：不发酵葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖和蜜二糖等；同化葡萄糖、乙醇、甘油、甘露醇和赤藓醇；不同化木糖等。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：MgSO4 1.0g，KH2PO4 2.0g，尿素 3.0g，玉米浆 1.0g，MnSO4 0.02g，FeSO4 0.2g，琼脂20.0g，蒸馏水 1.0L，pH自然(5.5)。[注] 接种前加无菌液体石蜡（1.05kg/ cm2灭菌30min）数滴。培养温度：28-30℃资源保藏类型：培养物保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：1670用途：研究；生产；石油发酵生产柠檬酸。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征化能异养；嗜温；趋酸；兼性厌氧。5Be′麦芽汁琼脂30℃培养3天，菌落圆形、米黄色、褶皱、边缘毛状、质干，5.0-7.0mm。细胞单个、卵形、腊肠形, 2.1-3.6×3.4-12.0µm。有真、假菌丝。无性繁殖方式为多边芽殖。不发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、D-半乳糖、海藻糖、棉子糖；不同化麦芽糖、蔗糖、D-半乳糖、海藻糖、D-松三糖、纤维二糖、D-木糖、阿东醇、D-山梨醇、棉子糖、蜜二糖、L-山梨糖、D-柳醇、硝酸钾。能分解脂肪。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  五、主要应用1、它是石油发酵生产单细胞蛋白的优良菌种。能利刚正烷烃，使石油脱蜡，降低凝固点，且比物理化学的脱蜡方法简单；同化长链烷烃的效果比其他假丝酵母好。英国、法国等国家都用烃类培养解脂假丝酵母，生产单细胞蛋白。2、解脂假丝酵母的柠檬酸产量也较高。有人在含4%-6%的正十烷、十二烷、十四烷、十六烷的培养基中，26℃振荡培养解脂假丝酵母(6-8)d，柠檬酸的转化率可达13%-53%，产量为(5~34))mg/ml。3、将解脂假丝酵母培养在含8.0%的市售石蜡(C10～C19)的培养基中，加入适量的维生素B1，可积累谷氨酸的前体物α一酮戊二酸5.68%，转化率71%。用以上烷烃作碳源，解脂假丝酵母可产生较多的维生素B6，产量可达400ug/L左右。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  人胆道瘢痕成纤维样细胞的处理方法与注意事项！ 一、细胞简介平台编号：Bio-51748 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：人胆道瘢痕成纤维样细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：外周血2）形态：原粒细胞3）含量：>1x1064）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 三、细胞的运输和保存可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。  四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。            五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备：1）准备内皮细胞专用基础培养基；优质胎牛血清，5%；添加对应因子1%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜。第二天检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3、按6ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含6ml培养基瓶中。注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、1000rpm离心分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 广西高温放线菌的培养方法与实验内容及注意事项！ 广西高温放线菌是Thermoactinomyces属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-84765 规格：冻干粉 拉丁属名：Thermoactinomyces Guangxiensis 中文名称：广西高温放线菌拉丁名称：Thermoactinomyces guangxiensis其它保藏中心编号：=CGMCC 4.7156 =ATCC BAA-2630来源历史：←CGMCC收藏时间：2016/12/27原始编号：CD-1原产国：中国资源归类编码：15131500000模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究特征特性：好氧，呈丝状，不产色素，气生菌丝呈白色，基内菌丝呈浅黄色，孢子梗上着生单个内生孢子，孢子表面光滑，最适生长温度45℃-50℃，最适pH 7.0-9.0，可以水解次黄嘌呤、酪蛋白和淀粉，不能水解L-酪氨酸、腺嘌呤、鸟嘌呤、七叶苷、木聚糖和黄嘌呤。过氧化氢酶、明胶液化和牛奶胨化实验阳性。H2S产生、氧化酶、黑色素产生和硝酸盐还原实验阴性。可以水解吐温20、40、60和80，可以使用蔗糖、D-果糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-鼠李糖、棉籽糖、D-山梨醇、麦芽糖、乙酸钠、丙酸钠和柠檬酸钠作为单一碳源，可以利用脯氨酸、L-酪氨酸、次黄嘌呤、D-苏氨酸、D-组氨酸、L-丝氨酸和蛋氨酸作为唯一氮源。胞壁氨基酸为meso-DAP，全细胞糖为核糖和葡萄糖，极性脂为双磷脂酰甘油（DPG）、磷脂酰甘油（PG）主要醌型为MK-7， 主要脂肪酸为 iso-C15:0、C16:0、 anteiso-C15:0、 iso-C17:0 和iso-C16:0。 DNA G+C 含量为 48.8 mol%。GenBank基因序列接收号：KJ027602。生物危害程度：四类培养基编号：CM0847培养基名称：胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）(CAIQ0701)培养基成分：胰蛋白胨 15.0g，大豆胨 5.0g，氯化钠 5.0g，琼脂 13.0 g，蒸馏水 1.0L，pH7.3±0.2。培养温度：45℃需氧类型：好氧分离基物：蘑菇堆肥采集地：广西壮族自治区保存方法：液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：分类；研究 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征广西高温放线菌，好氧，呈丝状，不产色素，气生菌丝呈白色，基内菌丝呈浅黄色，孢子梗上着生单个内生孢子，孢子表面光滑，最适生长温度45℃-50℃，最适pH 7.0-9.0，可以水解次黄嘌呤、酪蛋白和淀粉，不能水解L-酪氨酸、腺嘌呤、鸟嘌呤、七叶苷、木聚糖和黄嘌呤。过氧化氢酶、明胶液化和牛奶胨化实验阳性。H2S产生、氧化酶、黑色素产生和硝酸盐还原实验阴性。可以水解吐温20、40、60和80，可以使用蔗糖、D-果糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-鼠李糖、棉籽糖、D-山梨醇、麦芽糖、乙酸钠、丙酸钠和柠檬酸钠作为单一碳源，可以利用脯氨酸、L-酪氨酸、次黄嘌呤、D-苏氨酸、D-组氨酸、L-丝氨酸和蛋氨酸作为唯一氮源。胞壁氨基酸为meso-DAP，全细胞糖为核糖和葡萄糖，极性脂为双磷脂酰甘油（DPG）、磷脂酰甘油（PG）主要醌型为MK-7，主要脂肪酸为 iso-C15:0、C16:0、anteiso-C15:0、 iso-C17:0 和iso-C16:0。DNA G+C 含量为 48.8 mol%。GenBank基因序列接收号：KJ027602。  三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调ph→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  小鼠骨髓来源内皮祖细胞的分离方法与质量检测！ 一、产品信息平台编号：Bio-53608 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 产品名称：小鼠骨髓来源内皮祖细胞组织来源：骨髓产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介小鼠骨髓来源内皮祖细胞分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。内皮祖细胞是血管内皮细胞的前体细胞，亦称为成血管细胞（Angioblast），是一群具有游走特性，能进一步增殖分化的幼稚内皮细胞，缺乏成熟内皮细胞的特征性表型，不能形成管腔样结构，其功能主要为参与了出生后缺血组织的血管发生和血管损伤后的修复。研究显示，内皮祖细胞在心脑血管疾病、外周血管疾病、肿瘤血管形成及创伤愈合等方面均发挥重要作用，并为缺血性疾病的研究治疗提供了新思路，EPCs生物学特性和治疗作用的研究成为这一领域新的热点。 三、方法简介实验室分离的小鼠骨髓来源内皮祖细胞采用冲洗骨髓、密度梯度离心、差速贴壁法结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 四、质量检测实验室分离的小鼠骨髓来源内皮祖细胞经CD34免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 五、培养信息包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等产品货号 CM-M140换液频率 每2-3天换液一次生长特性 贴壁细胞形态 内皮细胞样传代特性 可传1-2代；不建议多次传代消化液 0.25%胰蛋白酶培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%小鼠骨髓来源内皮祖细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 该如何防控致癌性最强的黄曲霉毒素致命超标呢？ 百欧博伟生物：黄曲霉毒素超标事件再度引起人们对食品安全的关注。 日前，韩国食品药品安全处发表消息称，韩国食品生产加工企业WOONONG食品生产销售的Rice Peanut（食品类别：花生制品）产品中检出总黄曲霉毒素超标，命令其停止销售并召回相关产品。 就在不久前，据河南省食品药品监督管理局发布的消息，在近期的食品抽检中，有多批次花生抽检查出了黄曲霉毒素超标。 不断出现黄曲霉毒素超标事件，人们不禁会问，什么是黄曲霉毒素？它们来自何方？其对我们的危害有多大？我们有办法预防或减少其危害吗？ 最广泛研究的毒素 “黄曲霉毒素是真菌毒素（约300余种）中的一大类，它于1993年被世界卫生组织的癌症研究机构认定为1类致癌物。”17日，山西省农业科学院生物技术研究中心研究员，国家农业部第八届科技委员会委员孙毅告诉科技日报记者。 黄曲霉毒素是已知真菌毒素中毒性和致癌性最强，也被最广泛研究的毒素。 黄曲霉毒素B1的毒性最强，据称，其毒性相当于等量氰化钾的10倍、砒霜的68倍。 它的毒性有三种临床特征：急性中毒、慢性中毒和致癌性，有致癌、致畸、致突变的作用。其致癌特点是：致癌范围广，能诱发鱼类、禽类，各种实验动物、家畜及灵长类等多种动物的癌症，除主要诱发肝癌外，还可诱发胃癌、肾癌、直肠癌、乳腺癌，卵巢及小肠等部位的肿瘤，亦可导致出现畸胎。 因此世界许多国家都制定了有关食品中黄曲霉毒素限量标准。 孙毅说，我国规定玉米、花生及其制品的黄曲霉毒素B1的上限为20微克/千克；大米和其它植物油为10微克/千克；小麦等其它谷物、酱油等酿制品以及发酵豆制品等为5微克/千克；婴儿食品仅为0.5微克/千克。 自然界中一大家族 既然黄曲霉毒素如此危害严重，我们为什么还要允许它在食品和饲料中存在？ “那是因为自然界当中真菌几乎无所不在，我们在农作物种植、储存和加工过程中无法完全避免其污染。但可以采取多种措施尽量减少它对食品的污染。”孙毅说。 1960年，英国发现有10万只火鸡死于一种以前没见过的病，被称为"火鸡X病"，再后来鸭子也被波及。追根溯源，其罪魁祸首是饲料中的一种真菌——黄曲霉菌产生的毒素，因此它被命名为黄曲霉毒素。 孙毅说，这一真菌广泛存在于土壤和空气中，特别容易侵染花生、核桃及多种坚果，以及玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品；此外，在调味品（胡椒、辣椒及干姜等）、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。 黄曲霉毒素在自然界中是一大家族，已经发现至少18种类型。它一般在热带和亚热带地区的食品中检出率比较高。2004年，肯尼亚有125人因食用受黄曲霉毒素污染的玉米而死亡。 “在中国，产生黄曲霉毒素的菌种主要为黄曲霉。1980年测定了从17个省粮食中分离的黄曲霉1660株，广西地区的产毒黄曲霉菌最多，检出率为58%。总的分布情况为：华中、华南、华北产毒株多，产毒量也大；东北、西北地区较少。”孙毅说。 这一问题还影响到了我国的食品出口，如波兰、西班牙、马耳他和希腊等曾通报我国出口花生，荷兰通报我国出口莲子中黄曲霉毒素超标。 孙毅说，一些欠发达国家为赚取外汇出口粮食，由于进口国设有严格的黄曲霉毒素检验标准，他们将质量最好的粮食出口，而将无法出口的粮食在本国销售从而导致本国消费者面临较高的健康风险。 湿热地区出现几率高 黄曲霉与真菌毒素的来源是什么？ “黄曲霉毒素主要是由黄曲霉菌寄生产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的几率最高。”孙毅说。 一般情况下，潮湿和温暖的环境会促使其生长导致生成更多的毒素，而低温（5-8 ºC及以下）则会抑制其生长。就其生长环境来说，在我国湿热多雨的南方地区，黄曲霉毒素引起的食物污染问题会尤其严重。所以，最合理的选择是尽可能从源头来减少和避免摄入。 孙毅说，其他一些霉菌（如，寄生曲霉)也可产生黄曲霉毒素。而且，除了黄曲霉毒素外，其它一些真菌还会产生赭曲霉毒素、伏马毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、桔青霉素、麦角毒素等。它们都能对人体健康造成一定程度的危害。 据世界粮农组织估计，全球25%的谷物受到真菌毒素的污染。真菌毒素可能通过摄取、皮肤接触、吸入等途径进入血液和淋巴系统而对健康产生急性和慢性影响。 “它们在动物消化道中有很大的抗分解能力，因此经常被发现存在于人类食物链中，如在肉类和奶制品中；温度处理，如烹饪和冷冻，都不会破坏一些真菌毒素。真菌毒素中毒的症状取决于真菌毒素的种类、接触的浓度和时长，以及接触个体的年龄、健康状况和性别等。”孙毅说。 与多种癌症高发密切相关 我国是肝癌发生大国，发病率是世界平均水平的2.5倍多，其造成的死亡率占世界51%。 根据新版中国癌症（2014版）地图，我国沿海地区是肝癌高发区，特别是南方沿海省份，如两广地区肝癌发病率和死亡率都远高于全国平均水平。 “这些地区多高温高湿环境，是黄曲霉毒素等真菌毒素污染的重灾区。其他一些癌症，特别是消化道癌症的高发也与真菌毒素的污染高度相关。”孙毅说。 根据广东省疾控中心专家对本省3次调查(1970年至1972年、1990年至1992年、2004年至2005年)的数据进行分析发现，在恶性肿瘤前5位死因中，肝癌始终占据首位。广西的情况与此类似。 孙毅说，真菌毒素易发生区域与肝癌高发区高度重合，说明它们之间有高度的相关性。因此，减少癌症特别是肝癌、胃癌等恶性疾病的重要措施之一是降低食品中的黄曲霉毒素等真菌毒素。 防治应覆盖全过程 “对真菌毒素的防治应覆盖从生产到入口前的全过程，即从生产、储运、到购买加工直至上餐桌。”孙毅说。 “在生产过程中要防治病虫危害，受锈病、叶斑病以及玉米螟虫侵害而枯死的花生荚果的黄曲霉感染率较高。生产上主要应采取的防止措施有：使用抗病虫品种，实行轮作制度，合理施肥和使用农药，做好病虫害防治，培养健壮花生植株，提高植株抗真菌侵染的能力等。”孙毅说。 我国每年都会在农作物病虫害防治上投入巨资，孙毅认为，但这还远不能满足需要，农民自身除必须投入大量人力外，仅在购药上就还需要投入更多的资金。 孙毅同时强调，在储运和加工过程中防止有害真菌污染也非常重要，有关部门应从采收、收购、储存、运输、加工、销售和制作等各个环节都予以严格把关。 专家建议，我国有关部门应将防止真菌毒素污染列入重要议事日程和监管范围，对食品和饲料进行更严格和普遍的真菌毒素检测，尽量减少其进入我们的食物链。 严格把住食品进口关，对进口食品和饲料特别是来自容易被真菌毒素污染风险高的地区进口的食品要制定严格的真菌毒素含量检测制度，防止其从境外输入。 “对市场上销售的食品特别是加工食品应有针对性地增加真菌毒素的检测项目，以增强食品加工者的安全意识和保证消费者能吃到安全放心的食品。” 使用转基因品种最有效 孙毅特别强调，育抗虫品种是抗霉菌污染最有效的方法。使用转基因抗病虫品种是最有效和成本低的予防措施。 根据国外试验，转基因抗虫玉米不仅能够减少玉米螟等害虫造成的损失，而且能够减少真菌毒素的产生。即使在储藏过程中Bt转基因玉米发生虫害和被真菌污染的几率也会大大降低。 在法国、意大利、土耳其、阿根廷和美国的288个独立试验点上所得出的实验结果表明，转基因抗虫品种的伏马毒素含量均比对照品种显著降低。 另一个实验显示，无论在何种条件下，转Bt基因品种的真菌毒素含量均显著低于非转基因的对照（减少1.8-15倍）。 “以上研究充分说明了转基因抗虫品种在降低真菌毒素污染上的巨大作用。”孙毅说。 目前，我国转基因作物商业化的路线图是按照非食用、间接食用和直接食用的顺序。同时我们还充分考虑产业的需求，重点解决制约我国农业发展的问题，如抗病、抗虫、节水抗旱、高产优质等瓶颈问题。 孙毅认为在此基础上需要再增加一条，就是应优先关注食品安全。我国除应继续重点资助水稻、玉米、小麦等经济价值较大的作物外，也应关注容易被真菌毒素污染、而人民经常食用的作物，如花生、干果和调味品等，以及会直接影响我们肉蛋奶质量的饲草作物等。 “采用生物技术改良这些作物品种无疑会提高人民的健康水平。”他说。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 ATCC 49455雷根斯堡约克菌，雷金斯堡约克氏菌 一、菌种简介平台编号：Bio-78483 规格：Freeze-Dried拉丁属名：Yokenella Regensburgei 菌株名称：雷金斯堡约克氏菌（雷根斯堡约克菌）用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Yokenella regensburgei Kosako et al. 拉丁名(ATCC® 49455™) 菌株别名Strain Designations 菌株别名 : JCM 2403 [NIH 725-83] Type Strain 模式菌株: yes Biosafety Level 生物安全等级 : 1Strain Designationsm 菌株别名  JCM 2403 [NIH 725-83]Isolation 分离源 Insect intestine, Pyrrhocoris apterus, GermanyBiosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedPreceptrol® noType Strain 模式菌株  yes Ref, Ref, RefComments  注释 NomenclatureMedium 培养基 ATCC® Medium 18: Trypticase Soy Agar/BrothGrowth Conditions 生长条件 Temperature培养温度 : 37.0℃Name of Depositor 寄存人 JCMChain of Custody  来源国家 ATCC Isolation 分离源  Insect intestine, Pyrrhocoris apterus, GermanyReferences 参考文献 Validation list no. 17. Int. J. Syst. Bacteriol. 35: 223-225, 1985.Kosako Y, et al. Yokenella regensburgei and Koserella trabulsii are subjective synonyms. Int. J. Syst. Bacteriol. 37: 127-129, 1987.Kosako Y, et al. Yokenella regensburgei gen. nov., sp. nov.: a new genus and species in the family Enterobacteriaceae. Jpn. J. Med. Sci. Biol. 37: 117-124, 1984. PubMed: 6503024Kosako Y, Sakazaki R. Priority of Yokenella regensburgei Kosako, Sakazaki, and Yoshizaki 1985 over Koserella trabulsii Hickman-Brenner, Huntley-Carter, Brenner, and Farmer 1985. Int. J. Syst. Bacteriol. 41: 171, 1991.Validation list no. 17. Int. J. Syst. Bacteriol. 35: 223-225, 1985.Kosako Y, et al. Yokenella regensburgei gen. nov., sp. nov.: a new genus and species in the family Enterobacteriaceae. Jpn. J. Med. Sci. Biol. 37: 117-124, 1984. PubMed: 6503024Kosako Y, Sakazaki R. Priority of Yokenella regensburgei Kosako, Sakazaki, and Yoshizaki 1985 over Koserella trabulsii Hickman-Brenner, Huntley-Carter, Brenner, and Farmer 1985. Int. J. Syst. Bacteriol. 41: 171, 1991. 三、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 四、产品优势1、产品质量稳定，是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法，保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等，得到广泛好评。 五、微生物培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                  如何维持肠道健康？肠道菌群又该如何平衡呢？ 百欧博伟生物：5月29日是世界肠道健康日。肠道不仅是消化器官，更是人体最大的免疫排毒器官，被称为“健康的第一道防线”。那么，如何维持肠道健康？肠道菌群如何平衡？海南省肿瘤医院胃肠外科二病区主任黄有群对此进行了科普和解读。 在人类的肠道中，存在着一个庞大而复杂的微生物生态系统，这个系统由数以万计的细菌、病毒、真菌和其他微生物组成，统称为肠道微生物群，也叫肠道菌群。 “肠道微生物群与人的健康紧密联系。”黄有群表示，肠道内各种微生物担负着各不相同的任务，有些负责消化与吸收，有的调节免疫反应。其中，肠道微生物帮助分解无法通过消化酶不能分解的食物成分，如某些纤维和复杂的糖类，它们在此过程中会产生短链脂肪酸，这些物质能为肠道细胞提供能量，促进肠壁的健康。肠道微生物群是人体免疫系统的重要组成部分，可调节免疫反应，帮助机体辨别并清除有害微生物。因此，要避免肠道菌群失调，一旦肠道微生物系统失调，就会产生各种健康问题。 肠道菌群在人类健康方面扮演着“正反面”角色。黄有群表示，某些条件下，肠道菌群维系消化道生态平衡，对健康发挥积极作用。但当肠道菌群失调时，可能变成可怕的健康，引起消化道问题。相关研究证明，一些特定的致病菌可能会导致消化道肿瘤，如幽门螺杆菌与胃癌的关联，消化道慢性炎症是许多癌症的已知风险因素。肠道菌群失调可导致屏障功能受损，从而使得病原体和致病物质更容易侵入肠道组织，增加癌变的风险。 随着对肠道菌群研究的深入，多种菌群移植技术被用于治疗与肠道菌群失调相关疾病。黄有群表示，在不久的将来，菌群移植技术可能对人类的健康，产生性的积极影响。目前较为成熟的粪菌移植，是将健康供体的粪便菌群移植到患者肠道中的方法，已被证明在治疗艰难梭菌感染方面有效。此外，粪菌移植在治疗炎症性肠病、肠易激综合症和代谢综合症等方面也显示出潜力。 合成微生物群是一种通过人工组合特定菌株以模拟健康肠道菌群的方法。这种技术可以精确控制菌群的组成和功能，避免了粪菌移植中可能存在的病原体风险。目前，合成微生物群在动物模型中的实验取得了积极成果，有望在未来应用于临床。 微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！ 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

             堆肥尿素芽孢杆菌的菌株培养与实验内容及打管说明！ 堆肥尿素芽孢杆菌是Ureibacillus属的微生物，原产地为韩国。厚壁菌门动性球菌科细菌。主要用途为分类学研究，具体用途为模式菌株。 一、菌种简介平台编号：Bio-103956 规格：冻干物 拉丁属名：Ureibacillus Composti 中文译名：堆肥尿素芽孢杆菌拉丁学名：Ureibacillus composti原始编号：DSM 17951菌株来源：←DSMZ保藏人：周宇光直接来源国家：德国保藏时间：8/22/2015其他保藏编号：=KACC 11361生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：50℃培养基：0221    分离源：畜禽粪便堆肥l采集地点：Ichon采集国家：韩国提供形式：冻干物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调ph→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 六、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，单位所提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               解纤维素根瘤菌的形态特征与主要价值及培养方法！ 解纤维素根瘤菌是Rhizobium属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类；研究；教学。  一、菌种简介平台编号：Bio-094240 规格：冻干物 拉丁属名：Rhizobium Cellulosilyticum 菌株名称：解纤维素根瘤菌收藏时间：2013/1/28原始编号：F5-1原产国：中国资源归类编码：15131137101模式菌株：非模式菌株主要用途：分类；研究；教学特征特性：菌体呈杆状，分散排列，菌落为圆形，直径约2-3mm,黄色，不透明，表面光滑，边缘整齐。细菌无荚膜，无芽孢，革兰氏染色为阴性。细菌通过裂殖进行繁殖。该细菌为异养型细菌，在生长过程中需要氧气，不需要阳光，氧化酶反应为阴性。该细菌的最适生长温度为30℃左右，最适环境pH为7.0左右。该细菌在生长过程中不需要添加生长因子和其他营养物质。生物危害程度：四类分离基物：土壤采集地：北极培养温度：18℃用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征解纤维素根瘤菌，菌体呈杆状，分散排列，菌落为圆形，直径约2-3mm,黄色，不透明，表面光滑，边缘整齐。细菌无荚膜，无芽孢，革兰氏染色为阴性。细菌通过裂殖进行繁殖。该细菌为异养型细菌，在生长过程中需要氧气，不需要阳光，氧化酶反应为阴性。该细菌的最适生长温度为30℃左右，最适环境pH为7.0左右。该细菌在生长过程中不需要添加生长因子和其他营养物质。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调ph→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  六、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。2、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。3、载体保存法：土壤保存法；砂土保存法；硅胶保存法；磁珠保存法；麸皮保存法；纸片(滤纸)保存法。4、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃)：是适用范围最广的微生物保存法。 七、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 2 支斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   副短短芽孢杆菌的特点与优势及微生物培养方法！ 副短短芽孢杆菌是Brevibacillus属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-103794 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Brevibacillus Parabrevis 菌株名称：副短短芽孢杆菌用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Brevibacillus parabrevis 拉丁名(ATCC? 10027?) 统一编号Deposited As Bacillus brevis MigulaStrain Designations 别名 NRS 605 [CIP 103840, IFO 12334, JCM 8506, NCIMB 13346]Application 用途 Bacteriophage hostBiosafety Level 生物安全等级 1Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedStorage Conditions 保藏条件Frozen: -80°C or colderFreeze-Dried: 2°C to 8°CLive Culture: See Propagation SectionPreceptrol?  noType Strain 模式菌种 yesMedium 培养基 ATCC? Medium 3: Nutrient agar or nutrient brothGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 37°CAtmosphere 需氧情况: AerobicName of Depositor  寄存者 NR SmithChain of Custody 来源国家 ATCC References 参考文献 Smith NR, et al. Aerobic spore forming bacteria. US Dep Agric Monogr 16: 1-148, 1952.Takagi H, et al. Characterization of Bacillus brevis with descriptions of Bacillus migulanus sp. nov., Bacillus choshinensis sp. nov., Bacillus parabrevis sp. nov., and Bacillus galactophilus sp. nov.. Int. J. Syst. Bacteriol. 43: 221-231, 1993. PubMed: 8494737Shida O, et al. Proposal for two new genera, Brevibacillus gen. nov. and Aneurinibacillus gen nov.. Int. J. Syst. Bacteriol. 46: 939-946, 1996. PubMed: 8863420 三、形态特征副短短芽孢杆菌，菌体呈杆状，0.6～0.9μm×1.5～4μm；单个或V形排列；芽胞中生或次端生，椭圆形，孢囊膨胀。G+，易褪色。从葡萄糖产少量酸，从阿拉伯糖、木糖、甘露醇不产酸。接触酶阴性，兼性好氧。不水解淀粉、明胶。55℃生长；耐7%NaCl。不利用硝酸盐、柠檬酸盐；利用丙酸盐。  四、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 五、产品优势1、产品质量稳定，是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法，保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等，得到广泛好评。 六、微生物培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                  破骨细胞的背景来源与演变过程及临床展望！ 一、知识简介 破骨细胞（Osteoclast，OC）是骨吸收的主要功能细胞，在骨发育、生长、修复、重建中具有重要的作用。破骨细胞起源于血系单核－巨噬细胞系统，是一种特殊的终末分化细胞，它可由其单核前体细胞通过多种方式融合形成巨大的多核细胞。 二、演变 破骨细胞由多核巨细胞(multi nuclear giant cell，MNGC)组成，直径100μm，含有2~50个紧密堆积的核，主要分布在骨质表面、骨内血管通道周围。由多个单核细胞融合而成的，胞浆嗜碱性但随着细胞的老化，渐变为嗜酸性。 破骨细胞的分离培养始于20世纪80年代，到2018年7月，破骨细胞的培养方法主要有：骨髓机械分离法，骨髓细胞诱导法，脾干细胞诱导法，血液单核细胞诱导法，小鼠RAW264.7细胞系诱导法及骨巨细胞瘤分离法。 三、来源 破骨细胞是由骨髓中的髓系祖细胞分化而成的单核巨噬细胞相互融合，所形成的多核巨细胞。早期未成熟的增殖性单核吞噬细胞被称为破骨细胞前体，在化学因子的作用下进入血液循环，再在基底多细胞单位所释放的信号因子的作用下进入骨结构腔体，在各种化学因子、转录因子、细胞因子等信号因子的刺激下融合为多核细胞并最终活化为破骨细胞。 1、凋亡 破骨细胞的凋亡由2个不同的信号通路控制，一个由死亡受体(肿瘤坏死因子受体家族，含细胞内死亡结构域)开始，一个由Bcl-2家族蛋白调节。2个通路均可活化半胱天冬酶，该酶可通过裂解特异性底物诱导细胞凋亡。 在破骨细胞吸收骨基质的有机物和矿质的过程中，造成基质表面不规则，形成近似细胞形状的陷窝，称为Howship陷窝。在陷窝内对着骨质的一面，细胞伸出许多毛样突起，很象上皮细胞表面的纵纹缘和刷毛缘。电镜下，贴近骨质的一侧有许多不规则的微绒毛，即细胞突起，称为皱褶缘(ruffled border)。在皱褶缘区的周缘有一环形的胞质区，含多量微丝，但缺乏其它细胞器，称为亮区(clear zone)，此处的细胞膜平整并紧贴在骨质的表面。亮区犹如一道以胞质构成的围墙，将所包围的区域形成一个微环境。 2、过程 破骨细胞向局部释放乳酸及柠檬酸等，在酸性条件下，骨内无机矿物质自皱褶缘吞饮，于皱褶缘基质内形成一些吞饮泡或吞噬泡。于破骨细胞内，无机质被降解，以钙离子的形式排入血流中。无机质的丢失使骨基质内的胶原纤维裸露，破骨细胞分泌多种溶酶体酶，特别是组织蛋白酶K和胶原溶解组织蛋白酶。破骨细胞离开骨表面后，其皱褶缘消失，细胞内发生变化，进入静止期。 四、作用 破骨细胞以其骨质吸收功能为人所知晓。而且作为骨组织成分的一种，行使骨吸收(bone resorption)的功能。破骨细胞与成骨细胞(osteoblast，亦称bone-forming cells)在功能上相对应。二者协同，在骨骼的发育和形成过程中发挥重要作用。高表达的抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase)和组织蛋白酶K(cathepsin K)是破骨细胞主要标志。 但除此之外，破骨细胞还具有其他的生物学作用。到18年7月所发现的分别有造血调控作用、骨形成调控作用、骨内血管生成调控作用、骨钙素的激素作用。破骨细胞具有特殊的吸收功能，某些局部炎症病灶吸收中，巨噬细胞也参与骨吸收过程。 五、临床展望 破骨细胞功能异常会造成骨质吸收的异常，若其功能亢进，会引起骨退行性病变如骨质疏松症、癌症的骨转移、关节炎等；若其功能障碍或衰退，会造成骨硬化症、致密性成骨不全、Paget’s病、大块骨溶解病等。 骨相关疾病的药物主要从破骨细胞的分化、功能与凋亡三方面影响其对骨质的吸收过程。因RANK/RANKL/OPG轴对于骨质的形成和吸收过程具有关键的调节意义，现今许多研究都以对该轴的作用为重点。对RANKL的抑制可作为过多骨质吸收的理想治疗策略，如重组骨保护素、全人类抗RANKL阻断抗体、RANK-Fc在临床试验中均能有效阻断RANKL和骨质吸收。但因长期使用是否会对组织和免疫系统有副作用仍不详，故还在研究阶段。双膦酸盐与骨基质有高亲和力，能诱导破骨细胞的凋亡。 也有报告显示长期服用双膦酸盐会导致股骨骨折，静脉注射双膦酸盐或地诺塞麦(Denosumab，RANKL的单抗)会导致关节骨坏死。依诺沙星的双膦酸盐衍生物具有选择性抑制破骨细胞的功能。因其并不影响破骨细胞特异性蛋白的表达浓度，可以此抑制破骨细胞依赖的正畸牙移动过程。有学者提出可通过基因敲除组织蛋白酶K阻断骨吸收的过程。破骨细胞信号通路的研究为研制靶向阻断破骨细胞分化和功能的新药提供了新方向：RANKL参与了骨髓瘤、骨大细胞癌等疾病中破骨细胞的形成分化过程，通过阻断RANK/RANKL通路可阻止破骨细胞的分化过程，防止骨吸收、维持骨密度、降低骨折风险。骨吸收时破骨细胞会向胞外分泌蛋白酶K，基因敲除或阻断组织蛋白酶K将阻碍骨吸收进程，这也将是药物研究的新方向。有学者提出可通过研究破骨细胞的核受体，靶向调控这些精密代谢传感器，从分子水平来控制相关疾病的发生。转录因子FBI-1/OCZF/LRF可以调节破骨细胞的形成和凋亡，调控该转录轴有望治疗慢性关节炎、减少骨量流失。在骨组织稳态的研究中不应该忽视年龄的影响。年龄增长会促进促炎性因子的积累，增强成髓细胞作用和破骨作用，这将启发相关疾病的研究和药物的研发。破骨细胞在吸收骨基质的过程中，释放的部分生长因子可影响成骨细胞的分化和活性，故也可通过研究破骨细胞了解骨质形成的相关机制。免疫细胞在破骨细胞生成的过程中作用机制很复杂，破骨细胞生成也会影响淋巴结形成、B细胞成熟以及免疫反应等，并以此催生了骨免疫学，对其复杂机制以及相关疾病治疗的研究也正如火如荼的进行中。在癌症原发病灶发现破骨细胞的存在提示，破骨细胞的存活可不仅仅依附于骨组织，除了从破骨细胞入手对骨疾病的治疗进行研究外，还可能通过研究其与其他系统的相关疾病发生发展的关系为今后的治疗提供新思路与新途径。可吸收生物材料可将破骨细胞生成与生物吸收过程相统一，研究破骨细胞在其中的功能机制对组织工程也有相当大的前景。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  研究发现：这个酿酒细菌有望成为下一个细胞工厂！ 百欧博伟生物：炎热的天气里，一杯香甜的果汁很快就会变质，有时还会产生酒精味。这很可能是一种擅长将葡萄糖和果糖转化为乙醇的“酿酒”细菌——运动发酵单胞菌在“作祟”。 不过，这种能天然产生乙醇的“罪魁祸首”却是科学家眼中的潜力股——有资质成为像酵母、大肠杆菌那样的底盘细胞，为人类制造大宗化学品。 农业农村部成都沼气科学研究所（以下简称沼科所）研究员何明雄团队分析了运动发酵单胞菌适应环境胁迫的染色体三维构象，揭示了原核生物中广泛存在的转录因子介导染色体三维构象及其调节抗逆基因表达以应对环境胁迫的分子机制。近日，研究论文在线发表于《核酸研究》。 论文审稿人认为，这是一项非常有趣的发现——化学分子和转录因子对细菌染色体的三维构象产生影响从而促进或抑制基因转录。这项研究不仅为认识原核生物基因组结构与功能的关系提供了新的科学依据，也为从三维基因组层面进行工程菌株的理性设计奠定了基础。 细胞工厂“潜力股”：天然产乙醇的细菌 作为一种能把葡萄糖和果糖变成乙醇的细菌，运动发酵单胞菌具有一种特殊的生理生化特性。论文通讯作者何明雄介绍，它之所以能产生乙醇，全靠其代谢途径中的特定酶系统。这些酶系统让它将碳源（如葡萄糖）先转化为丙酮酸，并继续转化为乙醇和二氧化碳。 如果能把农林废弃物——例如秸秆等生物质转化成葡萄糖或者果糖，再用这种细菌进行处理，岂不是可以“便利”地获得工业用乙醇？ 而且，有研究发现，运动发酵单胞菌在食品、健康及医药等领域也展示出广阔的应用前景。 然而，秸秆等生物质资源结构致密、难降解，难以利用。在转化过程中，需要预处理以释放其中的葡萄糖等营养物质。但预处理产生的水解液存在许多微生物发酵的抑制剂，如乙酸、呋喃甲醛、酚类和盐类化合物等。其中，乙酸和呋喃甲醛是主要的两类有毒副产物。 “这些抑制剂会导致微生物发酵的转化效率大幅下降。”何明雄说，如果能筛选出对抑制剂有抗性的菌株，就有望找到相关的抗性基因。 于是，7年前，何明雄团队硕士生王薇廷着手做菌株突变筛选，目标是筛选出能够耐受这些抑制剂的抗逆菌株，即能在胁迫环境下，高效利用糖类产生目标产物而抵御这些抑制剂干扰的菌株。 通过基因组重组等技术，王薇廷终于选育出具有抗逆特性的运动发酵单胞菌菌株ZM532，大幅提升了其生物转化效率。 获得耐受菌株后，研究团队想进一步了解这些菌株为何产生抗逆性状。他们利用了基因组重测序、转录组学、蛋白组学等常用的分析方法，但分析结果却出乎意料——尽管其中的一些基因与抗逆表型相关，但仍然不能完全解释抗逆表型发生显著改变的机制。 传统手段“失灵”踏上基因组三维结构探秘之旅 “我们团队前期使用了基因组重测序技术和转录组学分析去揭示抗逆机制。”论文第一作者、沼科所博士陈茂说，结果发现，运动发酵单胞菌抗逆菌株的基因组上发生了单核苷酸突变（SNP）以及片段插入和缺失等突变。 他们又尝试从与基因组突变关联的基因中寻找抗逆表型产生的原因，但这些与突变关联的基因多与抗逆无关。 2019年，博士生Samina Shabbir开始做转录组和蛋白组分析，试图挖掘关键调控因子，在转录水平上解释抗逆机制，然而结果亦无法解释表型发生巨大改变的原因。 “这些结果显示，在运动发酵单胞菌中，基因组突变与抗逆表型之间存在不匹配的现象。”何明雄说，在细菌中，基因组变异是其适应胁迫环境的常见现象。“人们常常认为这些突变会导致细菌抗逆表型改变，但有时在一维层面，也就是基因水平上，可能无法解释这种表型为何发生转变。” 尽管人们已经知道在真核生物中，基因组突变可能会改变染色体三维结构，导致癌症等疾病的发生，但人们对原核生物中基因组突变与染色体构象之间的关系仍然知之甚少。 染色体构象是染色体在三维空间上的组织和排列方式，包括染色体的折叠、染色体区域之间的相互作用等。这些高阶结构对基因的表达和调控有重要影响。 受真核生物三维基因组学相关研究的启发，何明雄团队提出假设：会不会是基因组突变导致了染色体三维结构的改变，从而导致抗逆表型的发生，因此传统方法如基因组学、转录组学、蛋白组学等一维二维的技术难以发现抗逆表型背后的机制。 2020年，正在攻读博士学位的陈茂踏上了三维基因组结构探索之旅，尝试验证关键调控因子功能，解析三维基因组动态变化，揭示抗逆调控的分子机制。 加快“细胞工厂”选育进程 基因组突变和环境胁迫（如乙酸和呋喃甲醛）究竟是如何对运动发酵单胞菌三维染色体构象产生影响的？ 论文共同第一作者、沼科所副研究员吴波介绍，在三维基因组研究中，通常把DNA一维水平上相距几百kb的位点之间的互作称为长距互作，而把相距几十kb甚至更小距离的互作称为短距互作。 “我们的研究发现，基因组突变仅改变了局部的短距互作；当乙酸和呋喃甲醛胁迫后，不仅改变了长距互作，也改变了短距互作。这些短距互作构成了染色体结构域，这是染色体三维构象的基本结构单元。”吴波说。 他们进一步解析了结构域边界特征，并发现了一类重要的转录因子，即铁吸收调节蛋白（Fur）家族。在运动发酵单胞菌中，调节蛋白家族中还包括锌吸收调节蛋白（Zur）。“如果敲除这两个相关基因，会严重影响该菌的抗逆乙酸和呋喃甲醛表型。”陈茂说。 何明雄解释说，细菌的转录因子对于细菌适应逆境至关重要，因为这些蛋白可以调控一系列基因表达，从而影响细菌的生理代谢过程。以往研究主要关注转录因子最主要的功能——调节基因表达，是从一维水平上阐述这些调节的重要性。但转录因子结合在染色体上调节基因表达的同时，有可能对三维构象产生影响。 “我们的研究不仅表明转录因子有调节基因表达适应环境的能力，而且维持了染色体三维构象的稳定性。”何明雄说，这是首次在细菌中证实全局性转录因子具有调控染色体三维构象的能力。 该研究从全新角度阐释了“结构决定功能”这一核心分子生物学问题，揭示了抗逆表型形成的分子机制，为认识原核生物基因组结构与功能的关系提供了新的科学依据。 何明雄强调，抗逆分子机制的解析有利于对菌株直接进行理性设计。所谓理性设计是基于对微生物学、代谢途径和基因组学等的深入理解，通过精确设计和调控微生物的基因组、代谢途径或生理特性来实现特定的育种目标。从染色体结构角度关注染色体相互作用对理性设计的影响，可以提高表型进化的效率。 “我们的研究尚处于初级阶段，未来我们将积极探索三维基因组在合成生物学中的应用。”何明雄说，搞清楚运动发酵单胞菌的抗逆机制，就有望高效利用秸秆等农林废弃物，甚至开发出新的“细胞工厂”。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 中华被毛孢的特点与优势及培养方法与打管说明！ 中华被毛孢是Hirsutella属的微生物，原产地为中国。子囊菌，药用真菌。主要用途为研究。  一、菌种简介平台编号：Bio-090596 提供形式：斜面培养物拉丁属名：Hirsutella Sinensis 中文译名：中华被毛孢拉丁学名 Hirsutella sinensis原始编号：XZ08-51-18菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：刘杏忠直接来源国家：中国保藏时间：11/8/2010生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：研究培养温度：18℃培养基：0013    分离源：冬虫夏草子实体采集地点：四川省康定县采集国家：中国用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定，是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法，保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等，得到广泛好评。 四、微生物培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 七、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，单位所提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  人原代CIK细胞的使用与处理方法及培养操作步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-135673 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞名称：人原代CIK细胞用途：原代细胞注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述CIK细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞，由于该细胞同时表达CD3+和CD56+两种跨膜蛋白，又称为NK细胞样T淋巴细胞，具有T淋巴细胞的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤特点。CIK细胞对肿瘤细胞的识别能力强，能精确点射肿瘤细胞，且不会伤及正常细胞。尤其对手术后或放化疗后患者效果显著，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散，提高机体免疫力。CIK细胞被认为是新一代的肿瘤过继细胞免疫治疗的方案之一。 三、细胞特性1）细胞来源于外周血。2）细胞鉴定：CD3或者CD56免疫荧光染色为阳性。3）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。4）细胞生长方式：悬浮培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输。推荐培养基我们推荐使用原代CIK细胞培养体系作为体外培养原代CIK细胞的培养基。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞接收后的处理方法1、收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2、请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3、半贴细胞和贴壁不牢（悬浮）细胞：T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。4、备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。 七、细胞培养操作1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。4.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面 T25 瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！