泡盛曲霉的培养方法与实验内容及研究进展！

                  泡盛曲霉的培养方法与实验内容及研究进展！

泡盛曲霉，拉丁学名（Aspergillus awamori），泡盛曲霉分布广泛，存在于土壤、空气及各种腐败的有机物上，分生孢子靠气流传播。真菌、细菌和酵母菌都能产生阿魏酸酯酶，但绝大多数阿魏酸酯酶来源于真菌。已发现有超过30种微生物能产生阿魏酸酯酶，如泡盛曲霉、黑曲霉、构巢曲霉、米曲霉、塔宾曲霉、出芽短梗霉、耐热梭状芽孢杆菌、热纤梭菌等。

一、菌种简介

平台编号：Bio-65773

提供形式：冻干物

拉丁属名：Aspergillus Awamori

中文名称：泡盛曲霉

属名：Aspergillus

种名加词：awamori

来源历史：←黑龙江省轻工科学研究院（L11）←黄海化学工业研究社

收藏时间：2005.12.30

原始编号：黄海324

资源归类编码：15151913102

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究；生产

具体用途：生产淀粉酶和单宁酸。

特征特性：分生孢子顶囊呈黑色，边缘裂开成放射圆柱体，分生孢子梗光滑。最适生长温度为30-35℃。    

生物危害程度：四类

致病对象：无

培养基：蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.0～6.5。

培养温度：28-32℃

资源保藏类型：培养物

保存方法：真空冷冻干燥法

实物状态：有实物

共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享

源数据主键：40494

用途：研究；生产；生产淀粉酶和单宁酸。

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、真菌简介

中文名：泡盛曲霉

拉丁学名：Aspergillus awamori

拉丁别名：Aspergillus luchuensis Inui

分类：cellular organisms; Eukaryota; Fungi/Metazoa group; Fungi; Ascomycota; Pezizomycotina; Eurotiomycetes; Eurotiales; Trichocomaceae; mitosporic Trichocomaceae; Aspergillus

分布：分布广泛，存在于土壤、空气及各种腐败的有机物上，分生孢子靠气流传播。

用途：葡萄糖淀粉酶生产菌种。在印度尼西亚，中国，日本，米根霉被用来发酵生产食品和酒精饮料。

形态：菌落疏松，不易挑起。

培养：培养基：土豆浸出汁100ml，葡萄糖2g。24℃培养。

保藏温度：-70 摄氏度

三、培养方法

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

四、实验内容

1、称量→溶化→调ph→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

五、研究进展

麦麸、玉米皮、蔗渣的主要成分是纤维素、半纤维素、木质素等具有功能活性的细胞壁物质，作为农副产物，它们年产量很大，但由于较少对其进行深加工和再利用，使得这些农产品经济附加值很低，若能对其中的功能成分进行开发和综合利用，可大大提高农产品的经济和社会效益。在构成这些物质的多糖侧链残基上，存在一种重要的生理活性物质———阿魏酸。阿魏酸常以酯键与细胞壁多糖以醚键与木质素交联形成一种复杂的“网络结构”，是当归、川芎、阿魏等中药的重要功能成分之一。

阿魏酸具有多种生理功能，如清除自由基、抗紫外线辐射、抗血栓、降血脂、防治冠心病、抗菌消炎、止痛、抗突变、防癌、增强精子活力以及调节人体免疫等。阿魏酸酯酶（E.C.3.1.1.73，FAE）又称肉桂酸酯酶，属羧酸酯水解酶的一个亚类，是能水解阿魏酸甲酯、低聚糖阿魏酸酯和多糖阿魏酸酯中的酯键，将阿魏酸游离出来的一种胞外酶。在食品工业中，可利用阿魏酸酯酶打断阿魏酸与细胞壁材料，如麸皮、秸秆中多糖的交联，高效降解多糖并获得反式阿魏酸，它是重要的功能性食品基料；在饲料工业中，可利用阿魏酸酯酶处理植物性的原材料，将阿魏酸从植物细胞壁的结构中游离出来，破坏细胞壁的骨架结构，木质素、半纤维素及纤维素之间的连接被部分打破，结构变疏松，原料更容易被牲畜消化吸收，提高了饲料的利用效率。可见，阿魏酸酯酶具有广阔的应用前景。

1987年MackenzieCR等培养橄榄链霉菌时发现阿魏酸酯酶能分解阿魏酸与麦麸相连的酯键，把阿魏酸从麦麸中释放出来，研究表明，真菌、细菌和酵母菌都能产生阿魏酸酯酶，但绝大多数阿魏酸酯酶来源于真菌。已发现有超过30种微生物能产生阿魏酸酯酶，如泡盛曲霉、黑曲霉、构巢曲霉、米曲霉、塔宾曲霉、出芽短梗霉、耐热梭状芽孢杆菌、热纤梭菌等。

方园等人以3株泡盛曲霉为菌种，筛选出产阿魏酸酯酶酶活力最高的菌株，研究并得出其产酶的最佳工艺条件：麦麸∶蔗渣2∶1(W∶W)，4%(NH4)2SO4，0.23%CuSO4，固液比1∶1，在温度28℃下发酵3d，酶活达到0.0679U/g。

I-HsinLee等人采用泡盛曲霉发酵黑豆曲，结果表明，由于发酵微生物产生的β-葡糖苷酶的催化作用，发酵能显著提高黑豆曲的总酚和花青素含量，抗氧化活性也有显著提高。

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