微生物检测菌落繁殖连成一片的原因分析！ 1、为什么平板计数琼脂需要调节pH？ 由于大部分细菌是嗜中性的，培养基为符合细菌生长要求，需要调节pH至7.0±0.2，尽量保证较适宜的环境，确保检测结果的准确性。 2、如何保证检测结果的有效性？ 设计空白对照 1）检验过程中需要做空白对照，用来判断培养基、稀释液、平皿或吸管是否存在污染，完美的空白试验平板上应该无细菌生长。 实验环境要求 2）定期检测空气洁净度，判断实验环境是否符合标准要求。 灭菌处理 3）细菌检测过程中所用到的一切用具和培养基都需经过灭菌程序。 3、如何提高检测结果的准确性？ 样品消毒 1）任何样品在打开包装前，都要在取样开口处的周围表面进行消毒。 2）采样时对于易堵塞吸管的样品（如糕点面包辣条等），可以放置一块无菌纱布在放样液的容器瓶口下方，作过滤用。 3）不同的食品其「菌落总数」的检出限量也不一致，通常糕点类样品中细菌量偏低，稀释度应选择较小的，稀释度可选1:10。 4、为什么琼脂凝固后需要倒置？ 平板倒置培养，可以减少培养基中水分的蒸发影响细菌生长，又可以防止凝结在皿盖上的水蒸气流到培养基表面导致染菌出现菌落蔓延及难以计数。 5、为什么培养基干裂？ 干裂是培养基的水份缺失导致，通常2种原因： 1）培养箱内部温度不稳定导致； 2）培养基倒得太薄。 6、菌落蔓延的原因及解决办法？ 菌落蔓延主要有两个原因，一是操作不当；二是样品中含有变形杆菌等运动性强的细菌。 操作中需要注意3个关键点： 1）倾注培养基时摇晃平皿使其混合均匀，减少菌块； 2）样品稀释后，尽快倾注平板。从稀释到倾注结束时间控制在30分钟之内，避免样液干涸造成菌落成团；平板凝固后马上倒置； 3）若样品中含有变形杆菌，则可以覆盖一层培养基（约4mL）。 7、异常现象平板如何进行菌落计数？ 在完成培养后应立即进行计数，通常选取30-300CFU菌落数、无蔓延菌落生长的平板作为计数，但实际操作中会出现各种异常现象。 另外，当所有稀释度的平板均无细菌生长，则检测报告应以最低稀释度报出，如最低稀释度为1，则报为＜1；若最低稀释度为1:10，则报为＜10，而不能报为「未检出」。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    OCM-1A人脉络膜黑色素瘤细胞的培养操作规程！ 一、背景 OCM-1A细胞系|人脉络膜黑色素瘤细胞具有高度增殖能力和侵袭性，能够迅速扩散到周围组织和远处器官。因此，它被广泛用于评估抗肿瘤药物的疗效和毒性，以及开发新型的抗肿瘤治疗方法。此外，OCM-1A细胞系也被用于研究肿瘤发生和发展的机制，以及探索新的靶点和治疗方法。 二、OCM-1A细胞系|人脉络膜黑色素瘤细胞培养操作 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）OCM-1A细胞系|人脉络膜黑色素瘤细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）OCM-1A细胞系|人脉络膜黑色素瘤细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为类； 1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2、4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 OCM-1A细胞系|人脉络膜黑色素瘤细胞可以用于miR-200c/Zeb1负反馈回路对眼内肿瘤上皮间质转化及成瘤性的作用： 研究microRNA-200c与Zeb1构成的双向负反馈调节通道对眼内恶性肿瘤细胞上皮间质转化(EMT)、成瘤能力及迁徙转移能力的调控作用。 方法：1)miR-200c对眼内肿瘤上皮间质转化及迁徙能力的调控。①建立miR-200c过表达及表达抑制的细胞模型。应用miR-200c的模拟物和抑制剂对人眼脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1、人视网膜母细胞瘤细胞株WERI-RB1和Y79进行瞬时转染,在三个细胞株中建立miR-200c过表达及表达抑制的细胞模型。通过对miR-2O0c载体所携带的FAM荧光对转染后的细胞内的荧光表达情况进行荧光显微镜下的肉眼观察,初步评估转染效率。应用实时定量PCR对转染前后各株细胞中miR-200c的表达水平进行检测进一步评估转染效率。 ②miR-200c对其靶基因——上皮间质转化过程的重要转录因子Zeb1的调节作用。使用实时定量PCR、免疫印迹法及免疫荧光等分子生物学检测方法对OCM-1、WERI-RB1和Y79细胞miR-200c转染前后细胞内的Zeb1因子在mRNA和蛋白水平的表达进行检测,以验证miR-200c在眼内肿瘤对Zebl的调控作用。 ③miR-200c对眼内肿瘤细胞上皮-间质转化的调控。使用实时定量PCR、免疫印迹法及免疫荧光等分子生物学检测方法,对三个细胞株miR-200c转染前后细胞内上皮标记因子E-cadherin、间质标记因子Vimentin和N-cadherin分别进行不同表达水平的定性、定量和定位,以检验miR-200c对上皮-间质转化因子的调控作用。 ④miR-200c对眼内肿瘤细胞体外迁徙能力的调控。利用Transwell小室对OCM-1和Y79细胞各组(未转染组、空白对照转染组、模拟物WERI-RB1转染组、抑制剂转染组)进行体外透膜迁徙能力检测,以评估的表达干扰对眼内肿瘤细胞运动能力的作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     费格森埃希菌的培养及单层冻干管打管说明！ 一、菌种简介平台编号：Bio-74861规格： Freeze-Dried拉丁属名：Escherichia Fergusonii菌株名称：费格森埃希菌用途：ATCC原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Escherichia fergusonii Farmer et al. 菌株拉丁名(ATCC? 35469?) 菌株编号 Strain Designations 菌株别名 CDC 0568-73 [DSM 13698]Isolation 分离源   Feces, human, Missouri, USABiosafety Level 生物安全等级  2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式  freeze-driedStorage Conditions Frozen 保藏方法 : -80℃ or colderFreeze-Dried 冻干物 : 2℃ to 8℃Live Culture 活菌 : See Propagation SectionPreceptrol? noGenome Sequenced Strain Escherichia fergusonii ATCC 35469 chromosome, complete genome.Type Strain 模式菌株  yesComments Genome sequenced strainMedium 培养基  ATCC? Medium 3: Nutrient agar or nutrient brothGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度 : 37℃Atmosphere 需氧情况 : AerobicName of Depositor CDCChain of Custody 来源国家 ATCC Isolation 分离源   Feces, human, Missouri, USAReferences 参考文献  Farmer JJ, et al. Escherichia fergusonii and Enterobacter taylorae, two new species of Enterobacteriaceae isolated from clinical specimens. J. Clin. Microbiol. 21: 77-81, 1985. PubMed: 3968204Validation list no. 17. Int. J. Syst. Bacteriol. 35: 223-225, 1985.Cross References Nucleotide (GenBank) : AX109562 Sequence 295 from Patent WO0123604.Nucleotide (GenBank) : Z11603 E.fergusonii DNA for insertion sequence IS1.Nucleotide (GenBank) : Z11607 E.fergusonii DNA for insertion sequence IS3.Nucleotide (GenBank) : M33966 E.fergusonii alkaline phosphatase (phoA) gene, complete cds.Nucleotide (GenBank) : M63351 E.fergusonii outer membrane protein II (ompA) gene, partial cds.Nucleotide (GenBank) : U42435 Escherichia fergusonii dGTP triphosphohydrolase (dgt) gene, complete cds.Nucleotide (GenBank) : U77437 Escherichia fergusonii RNA polymerase beta-subunit (rpoB) gene, partial cds.Nucleotide (GenBank) : M63366 E.fergusonii glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (gap) gene, partial cds.Nucleotide (GenBank) : U14462 Escherichia fergusonii ATCC 35469 6-phosphogluconate dehydrogenase (gnd) gene, partial cds.Nucleotide (GenBank) : CU928158 Escherichia fergusonii ATCC 35469 chromosome, complete genome. 三、培养基营养琼脂培养基（NA）胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSA）LB 培养基（以上三款任选一种即可） 四、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存 五、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解，接种在 2 个斜面上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 六、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                人巨细胞病毒的致病性和免疫性及流行病学和检测！ 一、知识简介 人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）是疱疹病毒家族中基因组最大的成员，可编码200多种蛋白质。HCMV感染宿主范围较窄，以人类为宿主，尚无感染动物模型。HCMV裂解复制增殖较缓慢，周期较长，除形成核内包涵体，HCMV具有能引发核周和细胞质包涵体产生和细胞肿胀（巨细胞）的特性，并因而得名。根据基因组和表型异质性的不同，HCMV可分为多种毒株，虽然病毒株之间存在一定的抗原变异，但并不具有临床重要意义。 二、基本信息 中文名：人巨细胞病毒 外文名：human cytomegalovirus 实质：病毒 宿主：人 所属学科：临床医学 三、生物学性 人巨细胞病毒（HCMV）的形态结构与单纯疱疹病毒（HSV）极为相似。人和动物的巨细胞病毒均有严格的种属特性，通常只使自身宿主和同属动物易受感染。病毒在细胞培养中增殖缓慢，复制周期长，初次分离培养需30~40天才出现细胞病变，其特点是细胞肿大变圆，核变大，核内出现周围绕有一轮“晕”的大型嗜酸性、呈“猫头鹰眼”状的包涵体。 病毒在体外的生活力弱，对脂溶剂敏感，热（56℃、30分钟）、紫外线、酸可将其灭活，4℃只能保存数天，在-190℃和真空干燥可长期保存。  四、致病性和免疫性 1、致病性 不同于HSV和VZV，HCMV感染不会引起皮肤疾病，但HCMV感染可引发内脏疾病，包括在健康人体引发单核细胞增多症。其主要危害是高比率的先天性感染（约1%婴儿）。虽然大部分感染者是无症状的，但约20%患者可出现神经功能缺损。此外，HCMV原发或重新激活也是免疫功能低下患者发病和死亡的重要原因。 HCMV可感染血管内皮细胞和白细胞，并在内皮细胞中诱发典型的包涵体特征。在体外单核细胞感染实验中，病毒井不能引起相应的细胞病理学现象，表明HCMV在单核细胞中增殖受限制，推测这类细胞可能是HCMV的潜伏感染场所。HCMV可通过多种不同的机制诱发疾病的发生，包括直接组织损伤和免疫损伤。虽然肺部HCMV感染直接造成黏膜上皮细胞损伤可能是HCMV感染引起的肺炎的致病机制，但在动物模型上的实验表明，针对HCMV感染的免疫应答引起的免疫损伤可能是HCMV引发肺炎的主要机制。与之相应的，肺组织HCMV滴度并不能反映肺炎的严重程度。  2、免疫性 对于免疫功能正常者，HCMV感染如果出现临床疾病症状，通常是由病毒原发感染引起，并伴有宫颈分泌物或精液中存在病毒等表征。对免疫功能低下的患者，初始感染和再激活均可引发病症，而且由于HCMV感染单核细胞导致细胞活性素乱，大大增加了患者并发真菌和细菌感染。此外，如果将HCMV潜伏感染的单核细胞与活化的T淋巴细胞进行共培养，前者可被激活并分化成可产生感染性病毒的巨噬细胞。这种单核细胞与T细胞相互作用现象常出现于输血或器官移植患者，表明在移植受体中，不仅存在HCMV传染的可能性，也存在潜伏病毒被重新激活的可能性。  五、流行病学和检测 HCMV在人群中感染非常普遍，在发达国家成年人HCMV抗体阳性率约为50%，我国则高达60%~80%。10%~15%儿童在5岁之前初次感染 HCMV，5岁后感染的比例大幅下降。在成年人中感染比率逐年増加1%~2%，可能与带毒人群密切接触和性接触有关。HCMV可从感染数月至几年患者的唾液、宫颈分泌物、精液、尿液和白细胞等分离获得。先天性和围产期感染HCMV的婴儿排泄病毒的时间较长，35%感染者排泄病毒的时间可长达5年。研究表明，儿童在幼儿园感染非常常见，并可传染给血清阴性的父母。 HCMV感染的实验室诊断依赖于：①检测感染组织中HCMV细胞病理学、抗原或DNA；②检测体液中病毒DNA或抗原；③血清学转换验证；④分离来自组织或分泌物中的病毒。 尿液、血液、唾液和乳汁中都可分离HCMV。HCMV可以容易地在二倍体的成纤维细胞中不断繁殖。HCMV病毒繁殖一般需要1~14天，取决于样品中病毒的浓度。通过培养检测HCMV的手段多已被对外周血白细胞进行HCMV抗原定量，或利用PCR方法检测血浆或白细胞病毒DNA的方法所取代。 由于存在高比率无症状带毒者和HCMV在体内可持续感染数周或数月，通常难以确定疾病与分离的HCMV之间的相关性。对HCMV病毒性肺炎或胃肠疾病最好的方法就是进行HCMV包涵体的组织活检诊断。  北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物培养基的类型——实验达人们看过来！ 1、按照培养基的成分来分：培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。 （1）合成培养基 合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基 由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基 在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 2、按照培养基的物理状态分：培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。 （1）固体培养基 是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。用于微生物分离，鉴定，计数。如图，微生物分离成菌落、菌苔。 （2）半固体培养基 是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。用于观察微生物运动特征。如图，左侧试管中微生物不运动，而右侧试管中微生物运动，因而两试管中现象不同。 （3）液体培养基 液体培养基中不加任何凝固剂。这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。用于观察微生物生长状态。如图，此例中左侧为表面生长，右侧为沉淀生长，中间两个为均匀混浊生长。 3、按照微生物的种类分：培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。 （1）常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基。 （2）常用的放线菌培养基为高氏1号培养基。 （3）常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基。 （4）常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁蔗糖（或葡萄糖，葡萄糖比较昂贵）琼脂培养基和察氏培养基等。 4、按照培养基用途分：培养基按其特殊用途可分为加富培养基、选择性培养基和鉴别培养基。 （1）基础培养基 是含有一般微生物生长繁殖所需基本营养物质的培养基。牛肉膏蛋白胨培养基是最常用的基础培养基。 （2）加富培养基 是在基础培养基中加入血、血清、动植物组织提取液制成的培养基。用于培养要求比较苛刻的某些微生物。 （3）选择培养基 是在普通培养基中加入特殊营养物质或化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     如何使高校实验室空间环境处于无菌状态？ 百欧博伟生物：如何使高校实验室空间环境处于无菌状态，杀灭芽孢是关键！ 高校实验室是进行实验教学、开展科学研究的重要基地，而清洁、消毒、灭菌工作是保障实验室安全的重要一环。 “近年来，高校实验室安全事故引发了我们对实验室各个操作场景安全性的反思，其中消毒场景安全一直是我们关注的重点。所以在选择消毒试剂和设备的时候，都尽量选择安全指数高的，像实验室专用的T-010杀孢子剂就是一个很好的选择。” 解决高校实验室的一系列微生物污染问题！ 细菌、真菌、病毒、微生物、霉菌、酵母、支原体、噬菌体、休眠状态下的霉菌孢子、交叉污染等。 1、杀灭实验室空间芽孢一直是难题 芽孢又称内生孢子，是细菌休眠体，在抗热，抗化学药物和抗辐射等方面，十分突出。常见的产芽孢细菌主要为芽孢杆菌属、梭状芽孢杆菌属、芽孢乳酸菌属等。芽孢含水量极低，抗逆性强，能经受高温、紫外线，电离辐射以及多种化学物质灭杀等。 如何使实验室空间环境处于无菌状态，杀灭芽孢是关键！ 芽孢抗逆性很强，如果不彻底灭菌消毒，那么没有被杀灭的芽孢会再次萌发，从而造成灭菌失败，影响实验结果。所以芽孢的存在是构成实验室空间环境不达标的重要因素，能否消灭芽孢是衡量各种消毒灭菌手段的最重要的指标。 2、芽孢定义及特点 从高校实验室老师和学生来咨询中介绍，目前“传统实验室消毒，采用的是酒精、甲醛、臭氧等熏蒸方式，但是酒精对细菌具有较好的杀灭作用，但对真菌的效力有限，可以使用奥克泰士来解决乙醇无法较好解决的酵母、霉菌、芽孢的污染问题。 日常清洁时，在工作前和工作期间，特别是在发生任何泼溅后，应使用70%乙醇擦拭工作台面。 臭氧的杀菌能力有限，甲醛熏蒸消毒后必须空置2－3天，人员才能进入洁净区继续实验，影响实验效率。自从用了奥克泰士T-010杀孢子剂，即用型，使用方便，传统实验室的消毒耗时及微生物难题就迎刃而解了。” 使用前后，应对工作台面进行彻底消毒，并定期清洁周围区域和设备。 在消毒增速提效方面，T-010杀孢子剂提高实验效率，可以下班后操作，任何消毒方式都要做好防护，喷雾过程关闭门窗和通风系统，喷雾完毕后继续封闭60-90分钟，自然干燥即可，第二天正常上班使用。（接触时间越长，杀菌效力越好，大大节省了实验时间） 每种消毒产品也各有自己的优势和不足，在这种情况下了解消毒产品特性，根据自身的消毒要求选择最适合的产品十分重要。 消毒提示 实验室空间消毒建议每周定期对空间环境进行彻底雾化消毒，设备仪器擦拭消毒，可有效防止细菌芽孢，霉菌孢子等微生物污染问题。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 阿氏埃希氏菌的优势特点与注意事项及打管说明！ 阿氏埃希氏菌是Escherichia属的微生物，原产地为孟加拉国。双倍乳糖胆盐培养基中44.5℃培养不生长。在伊红美蓝琼脂培养基上为白色菌落，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润。主要用途为分类；研究，具体用途为分类学研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-85057规格：冻干粉拉丁属名：Escherichia Albertii中文名称：阿氏埃希氏菌拉丁名称：Escherichia albertii其它保藏中心编号：=DSM 17582=CCUG 46494=CIP 107988=LMG 20976来源历史：←DSMZ←CIP←CCUG←LMG收藏时间：2016/6/15原始编号：19982原产国：孟加拉国资源归类编码：15131122101模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究特征特性：双倍乳糖胆盐培养基中44.5℃培养不生长。在伊红美蓝琼脂培养基上为白色菌落，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润。具体用途：分类学研究。生物危害程度：三类培养基编号：CM0847培养基名称：胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）(CAIQ0701)培养基成分：胰蛋白胨 15.0g，大豆胨 5.0g，氯化钠 5.0g，琼脂 13.0 g，蒸馏水 1.0L，pH7.3±0.2。培养温度：30℃需氧类型：好氧分离基物：腹泻小孩的粪便保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：分类学研究。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和 提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存，微生物菌种应保藏于清洁和干燥的地方，置于室温光照保存。  五、注意事项1）首次活化应将整支冻干菌种溶解后转接在 10-20ml 培养液中，培养液应加满至瓶盖处，每天转动位置使光照均匀，但不能强烈摇动，使用的试管应是螺口管并且密封性较好。如有不明白之处，应先咨询客服人员，避免不必要的损失。2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 六、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    INS-1E大鼠胰岛素瘤细胞的培养方法及应用研究！ 一、背景 INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞是一种大鼠胰岛素瘤细胞系，它是由一名患有胰岛素瘤的大鼠中分离出来的。这种细胞系在肿瘤学研究中具有重要价值，因为它可以用于评估新的治疗方法和药物的有效性，以及研究胰岛素瘤的发生和发展机制。 INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞通常被用于体外实验模型，例如细胞培养、基因转染、蛋白质表达等技术。研究人员可以通过改变培养条件、添加生长因子或使用基因编辑技术来改变INS-1E细胞系的行为，以更好地模拟体内环境并提高治疗效果。此外，INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞还可以用于研究肿瘤微环境对肿瘤生长和转移的影响。 二、INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞培养方法 1、INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化； ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止； ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清； ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基； ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞复苏： ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。 3、INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶） ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化； ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞； ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 三、应用 INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞可以用于IL-1β和IFNγ介导胰岛INS-1E细胞凋亡的机制： 研究炎性因子IL-1β、IFNγ联合介导胰岛β细胞系INS-1E细胞产生凋亡的机制。 方法： 1、收集临床Ⅱ型糖尿病人和正常人的血清并记录基本资料，用ELISA试剂盒分别检测糖尿病组和正常组血清中IL-1β和IFNγ的含量并进行组间比较； 2、将INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞分为对照组和凋亡组，对照组用正常培养基培养48小时，凋亡组用浓度为100U/ml IL-1β、1000U/ml IFNγ的炎性因子培养基刺激48小时。MTS检测两组细胞的活力并进行组间比较；光学显微镜观察两组细胞形态的变化；houchest33253对两组细胞的细胞核进行染色并用荧光显微镜观察两组细胞细胞核的变化； 3、免疫荧光染色法对两组细胞中Bax以及线粒体进行标识，并用荧光显微镜观察Bax在细胞中与线粒体位置关系的变化；Western blot检测两组细胞中蛋白质磷酸化水平、蛋白表达量的变化并进行组间比较； 4、将无意义质粒、TCTP过表达质粒、shRNA阻断质粒分别包被在腺病毒中侵染INS-1E细胞，侵染48小时后得到空载体组、TCTP过表达组、TCTP阻断组三组细胞，用荧光显微镜观察自带绿色荧光的质粒在三组细胞中的表达效率；Western blot检测三组细胞蛋白中TCTP表达量的变化；用浓度为100U/ml IL-1β、1000U/ml IFNγ的炎性因子培养基分别作用于三组细胞，作用时间为48小时，MTS检测三组细胞的活力，用TCTP过表达组和TCTP阻断组的细胞活力分别与空载体组的细胞活力进行比较。 结果： 1、ELISA检测糖尿病组与正常组血清的IL-1β与IFNγ的含量：结果显示糖尿病组血清中IFNγ的浓度为0.29ng/L，与正常组（0.08ng/L）之间的差异有显著性意义（P 2、MTS检测结果证实凋亡组细胞活力（0.28）与对照组（0.68）之间差异有显著性意义（P 3、光镜下凋亡组细胞形态发生皱缩而对照组细胞形态良好；荧光显微镜下houchest33258标识的凋亡组INS-1E细胞系|大鼠胰岛素瘤细胞核出现核浓缩、核碎裂等典型的凋亡形态改变，而对照组细胞核形态正常；对照组线粒体和Bax都均散在分布于细胞质中，而凋亡组中线粒体出现聚集同时Bax向线粒体迁移并与线粒体形成共定位； 4、Western blot检测凋亡组的细胞蛋白并与对照组进行比较发现凋亡组中TCTP的表达量降低，P53和cleaved caspase-3的表达量升高；凋亡组中Bcl-2家族内具有拮抗凋亡作用的Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1表达量降低；Bcl-2家族内具有促进凋亡作用的Bax和Bad蛋白表达量变化不明显；凋亡组中反映细胞增殖活力的激酶AKT活性降低； 5、荧光显微镜下三组细胞内的绿色荧光质粒均大量表达；过表达组TCTP水平升高，阻断组TCTP水平降低；MTS检测结果显示TCTP过表达组的细胞活力（0.49）与空载体组（0.35）之间差异有显著性意义（P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 多类农业废弃物如何变废为宝？微生物技术来实现 多类农业废弃物的处理和利用是农业可持续发展的重要方面。微生物技术是一种有效的方法，可以帮助实现多类农业废弃物的变废为宝。 下面是一个关于如何利用微生物技术实现这一目标的简要指南： 1、识别废弃物种类：首先，需要对农业废弃物进行分类和识别。不同类型的废弃物具有不同的化学成分和特性，因此需要了解废弃物的组成和特点，以确定适合的微生物处理方法。 2、选择合适的微生物：根据废弃物的特性，选择适合处理的微生物。常见的微生物包括细菌、真菌和酵母等。一些微生物具有分解有机物和转化废弃物为有用产物的能力。 3、建立适宜的培养环境：为微生物提供适宜的生长环境是成功利用微生物技术的关键。这包括控制温度、pH值和氧气供应等因素，以提供最佳的生长条件。 4、进行微生物处理：将选定的微生物应用于废弃物处理中。这可以通过添加微生物到废弃物中，或者将废弃物暴露在含有微生物的环境中进行。 5、监测和调整：在处理过程中，需要定期监测微生物的生长和废弃物的转化情况。根据监测结果，可以调整处理条件，以提高废弃物的转化效率和产物的质量。 6、利用产物：经过微生物处理后，废弃物可以转化为有机肥料、生物能源或其他有用的产物。这些产物可以用于农田肥料、能源生产或其他农业和工业用途。 总结起来，利用微生物技术实现多类农业废弃物的变废为宝需要从废弃物的分类和识别开始，选择适合的微生物并建立适宜的培养环境。通过微生物处理，废弃物可以被转化为有用的产物，实现资源的循环利用和农业可持续发展。 农业废弃物变废为宝为什么离不开微生物技术？ 农业废弃物是一种常见的可再生资源，然而，由于其复杂的成分和特点，如何有效利用这些废弃物成为当今社会面临的重要挑战。在这个过程中，微生物技术发挥着不可或缺的作用，它为农业废弃物的转化和利用提供了新的途径和解决方案。 一、原理与实践 微生物技术主要利用微生物的代谢过程，将农业废弃物中的有机物质分解为可再利用的资源。这一过程包括微生物对废弃物中有机物质的分解、代谢产物的生成以及最终转化结果的评估。通过选择合适的微生物种类和优化发酵条件，可以实现农业废弃物的高效利用。 具体实践方式包括将废弃物通过微生物发酵技术制成有机肥料、将秸秆等废弃物转化为生物燃料、利用废弃物培养微生物生产生物活性物质等。这些实践不仅提高了农业废弃物的利用率，还为农业生产提供了新的资源，有助于实现可持续发展。 二、案例分析 以利用畜禽粪便制作有机肥料为例，在这个过程中，微生物技术发挥了关键作用。首先，通过添加微生物发酵剂，将畜禽粪便中的有机物质迅速分解为可供植物吸收的营养物质；其次，微生物发酵过程中会产生的高温可有效杀灭病菌和寄生虫卵，提高有机肥的安全性；最后，通过微生物技术制成的有机肥可以为土壤提供养分，提高土壤质量，促进农业可持续发展。 另一个案例是利用微生物技术将秸秆转化为生物燃料。在此过程中，微生物充当了生物催化剂的角色，将秸秆中的纤维素分解为可发酵的糖类物质，再通过发酵工艺将这些糖类转化为生物燃料。这种转化过程不仅有助于减少秸秆废弃物的产生，还能为能源开发提供新的来源。 然而，微生物技术在农业废弃物利用中也存在一些局限性。例如，在某些情况下，微生物的代谢活性可能受到废弃物中某些成分的抑制，导致转化效率降低。此外，微生物发酵过程中需要严格控制环境条件，如温度、湿度和pH值等，这可能增加工艺操作的复杂性。 三、展望 随着科技的不断进步，微生物技术在农业废弃物利用方面的应用前景广阔。未来研究应关注以下几个方面： 筛选和开发具有高效降解能力的微生物菌种，以提高农业废弃物的转化效率。 深入研究微生物之间的相互作用以及微生物与废弃物之间的互作关系，为优化发酵条件提供理论依据。 开展多学科交叉研究，将微生物技术与现代农业技术相结合，实现农业废弃物的全面利用。 加强政策引导，鼓励企业和研究机构投入农业废弃物利用的研发工作，推动其在农业可持续发展中的应用。 总之，微生物技术在农业废弃物变废为宝方面具有重要的作用。通过不断深入研究和实践应用，我们有信心克服当前存在的问题，实现农业废弃物的有效利用，为推动农业可持续发展做出贡献。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

               研究人员开创了检测细胞培养中微生物污染的新方法！ 百欧博伟生物：为了创造能使更多人受益的细胞疗法，研究人员不断完善细胞培养的制造方法和过程，以确保安全、高效和无菌。新加坡-麻省理工学院研究与技术联盟(SMART)的跨学科研究小组(IRG)——麻省理工学院在新加坡的研究企业——的个性化医疗制造关键分析(CAMP)的研究人员开发了一种利用机器学习的新方法，可以在几分钟内检测间质基质细胞(MSC)培养物中是否存在微生物污染。与效率较低的终点检测相比，异常检测模型能够预测培养物是否清洁或污染，并可用于细胞制造过程中，从而确保用于患者的细胞治疗产品(CTP)的快速和准确检测。 细胞培养中潜在微生物污染的鉴定是细胞治疗生产的一个组成部分，以确保其在患者使用前的安全性、无菌性和质量传统的微生物检测试验通常需要数天时间，通常以终端产品检测的形式进行，这可能与细胞治疗产品的保质期不相容，相比之下，CAMP开发的模型只需几分钟，可以作为一种过程监控或最终产品测试的形式进行。 一旦发现早期，受污染的细胞培养物可以被丢弃，细胞治疗产品的生产可以更早地重新开始，从而提高整体成本和资源效率。 这一突破是简化细胞疗法制造过程的重要一步。这种方法不仅可以确保患者输液前细胞产品的安全性和无菌性，而且可以更快地替代通常需要几天时间的传统无菌检查，而且对制造商来说也更具成本效益，因为如果一批产品受到污染，可以停止生产并重新开始生产。相关成果最近发表在著名期刊《细胞疗法》(Cytotherapy)上。 近年来，细胞疗法已成为各种疾病、损伤和疾病的重要治疗选择。通过将健康的人体细胞移植到患者体内来治愈或替换受损的细胞，细胞疗法在有效治疗癌症、自身免疫性疾病、脊髓损伤和神经系统疾病等方面显示出越来越大的希望。随着细胞疗法的进步和拯救更多生命的潜力，研究人员继续完善细胞培养制造方法和流程，以确保这些产品的安全性、效率和无菌性供患者使用。 CAMP开发的异常检测模型是一种用于检测细胞培养物中微生物污染的快速、无标记过程分析技术(PAT)。最近发表在著名期刊《细胞疗法》(Cytotherapy)上的一篇口头摘要《工艺开发与制造:间充质基质细胞培养中微生物污染的异常检测》介绍了该团队的研究。 该机器学习模型首先从一系列不同培养条件下的间充质基质细胞培养物(MSC)中收集无菌细胞培养基样本。一些收集的样品在不同的菌落形成单位(cfu)中加入不同的细菌菌株，这是对测试样品中微生物估计浓度的测量。用紫外可见光谱法分别获得无菌样品、未加标加菌样品和加标加菌样品的吸收光谱，并利用无菌样品的光谱对机器学习模型进行训练。用无菌和添加了细菌的混合样本对模型进行测试，证明了该模型在准确预测无菌情况方面的性能。 “这一发现的实际应用是巨大的:当与在线技术相结合时，该模型可用于连续监测在良好生产规范(GMP)设施中的生物反应器中生长的培养物。因此，GMP设备可以在闭环操作下，以更少的人力，更快地对废培养基中的细菌进行无菌检测。最后，接受细胞治疗作为治疗的一部分的患者可以确保产品已经经过了彻底的安全性和无菌性评估，”SMART CAMP的主要作者和研究工程师Shruthi Pandi Chelvam说，他与SMART CAMP的主要研究人员Derrick Yong和Stacy Springs合作开发了这种方法。 在细胞治疗制造过程中，该异常检测模型可以在几分钟内检测到细胞培养物中是否存在不定性微生物污染。这种过程中的方法可以节省时间和资源，因为被污染的培养物可以立即丢弃和重建。这种方法提供了一种快速替代传统的无菌试验和其他微生物细菌检测方法，通常需要几天时间，几乎总是在成品上进行。 “我们在微生物异常检测中越来越多地采用机器学习，这使我们能够开发一种独特的测试，可以快速执行过程中的污染监测，这标志着我们在进一步简化细胞治疗制造过程方面迈出了巨大的一步。除了确保患者输液前细胞产品的安全性和无菌性外，这种方法还为制造商提供了成本和资源效率，因为它允许在培养物被污染时果断重启和停止批量生产，”SMART CAMP的科学总监Yie Hou Lee补充说。 下一步，CAMP计划开发一种过程中监测管道，将这种异常检测模型与一些正在开发的内部在线技术相结合，这将允许使用生物反应器进行周期性培养分析。这将为进一步的、长期的连续培养监测实验研究提供可能性。 主要作者Shruthi Pandi Chelvam还获得了“早期专业人士文摘奖”，该奖项专门颁发给三位杰出的学者，摘要通过盲审的方式评分。该研究还被接受为2022年国际细胞和基因治疗学会(ISCT)的口头报告，这是细胞和基因治疗领域的著名活动。 麻省理工学院的Krystyn Van Vliet和新加坡国立大学教授Hanry Yu共同领导了SMART CAMP，他补充说:“这种以团队为基础的跨学科技术开发方法解决了细胞治疗制造中的关键瓶颈——包括允许间歇性或在线监测可能的偶然污染的快速安全评估——是SMART CAMP研究目标的一个标志。” 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  构巢曲霉：用于产普鲁兰酶、淀粉酶和酿造白酒 构巢曲霉，质控菌种，可用于水质检测，化妆品检测，食品与药品检测，为大中型科研提供严格质量体系控制的ATCC,CMCC,CICC,DSMZ标准菌株。可用于水质检测，化妆品检测，食品与药品检测，为大中型科研提供严格质量体系控制的ATCC,CMCC,CICC,DSMZ标准菌株。 一、菌种简介平台编号：Bio-104157规格：冻干物/培养物拉丁属名：Aspergillus Nidulans菌株名称：构巢曲霉拉丁名称：Aspergillus nidulans来源历史：←山东食品发酵工业研究设计院收藏时间：2018/5/16原始编号：BJ-MJ-27原产国：中国资源归类编码：15151524102模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：在查氏琼脂培养基上，28℃培养3天，菌落直径30-40mm，菌落呈白色，中间偏黄，产孢结构呈白色，表面呈放射状，反面轻微酒红色，无渗出液和可溶性色素产生。具体用途：酿造白酒。产普鲁兰酶、淀粉酶。生物危害程度：四类培养基编号：CM0015培养基名称：查氏琼脂(Czapek's Agar)培养基成分：蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 1.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH6.0～6.5。培养温度：28℃需氧类型：好氧分离基物：白酒大曲曲块采集地：山东省淄博市高青县保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：酿造白酒。产普鲁兰酶、淀粉酶。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。 三、培养条件1、培养基编号：CM00772、培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然 pH。3、需氧类型：好氧4、培养温度：24-26℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，并取 100μL 转接到固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   人急性髓性白血病细胞的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-118285规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：KG-1A细胞名称：人急性髓性白血病细胞用途：(STR鉴定正确)注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：骨髓2）形态：骨髓瘤细胞样  悬浮生长3）含量：>1x106 细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5) 用途：仅供科研使用。 三、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。  五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备1）准备IMDM推荐培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理：1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：悬浮状态下生长的细胞，可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态，一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，）可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 5637人膀胱癌细胞的应用与培养操作及研究动态！ 一、背景 5637人膀胱癌细胞来自一名68岁男性白人的膀胱癌组织，现常用于泌尿系统疾病的发病机理研究。5637贴壁生长，显微镜下呈上皮细胞样，能生成SCF、IL-1、IL-3、IL-6、G-CSF、GM-CSF等。该细胞经本库STR鉴定结果无误，且支原体检测阴性。 5637人膀胱癌细胞推荐使用RPMI1640培养基，含10%胎牛血清，在37度、5%CO2培养箱中培养。5637建议每周2-3次更换新鲜培养基，按1:3至1:4进行传代，37度胰酶消化3-4分钟，传代周期通常为2-3天。特别注意的是，该细胞相对较难消化，需要延长消化时间，消化到细胞收缩变圆，轻拍培养瓶侧边，细胞可以滑落方可终止消化。 二、5637人膀胱癌细胞培养操作 1)复苏5637人膀胱癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)5637人膀胱癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3)5637人膀胱癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 5637人膀胱癌细胞可以用于SPTBN2基因在膀胱癌中的表达及对膀胱癌5637细胞增殖、迁移和侵袭的影响： 研究非红细胞血影蛋白β2(Spectrin Beta,Non-Erythrocytic 2,SPTBN2)在膀胱癌组织中的表达,与临床病理因素的相关性,以及对膀胱癌5637细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。 方法： (1)通过TCGA数据库和GSE13507数据集,分析SPTBN2在膀胱癌中的表达情况,以及与患者预后和临床病理因素的相关性。 (2)通过单基因GSEA分析和蛋白互作分析,研究SPTBN2可能涉及的信号通路和生物学功能。 (3)采用RNA干扰技术(RNA interfering,RNAi)沉默膀胱癌5637细胞中SPTBN2的表达,实验分为空白对照组(blank control group,Blank组)、阴性对照组(negative control group,NC组)、siRNA#1实验组和siRNA#2实验组。实验组转染靶向SPTBN2 siRNA,NC组转染通用阴性siRNA,空白对照组加入等量转染试剂。实时荧光定量PCR检测细胞中SPTBN2基因的表达水平,Western blot检测细胞内SPTBN2蛋白的表达量。CCK-8法检测膀胱癌5637细胞增殖情况。划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力。 结果： (1)本研究基于对TCGA膀胱癌数据集和GSE13507数据集的分析发现SPTBN2在膀胱癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织,高表达SPTBN2的患者预后较低表达SPTBN2患者差,差异具有统计学意义(P (2)单基因GSEA富集分析显示,SPTBN2相关差异基因主要富集在KRAS信号通路。KEGG富集分析显示,SPTBN2相关互作蛋白主要富集于细胞凋亡、肿瘤蛋白多糖、线粒体自噬、缝隙连接、膀胱癌信号通路。GO富集分析显示,SPTBN2相关互作蛋白在分子功能分类中主要富集于细胞骨架结构形成、血影蛋白结合、离子通道结合。在细胞组分分类中主要富集于轴突始段、轴突主干、轴突部分。在生物过程分类中,富集于轴突导向、神经元投射引导、膜电位调节。SPTBN2与MAPK信号通路相关基因KRAS(r=0.338,P (3)转染SPTBN2 siRNA后,实验组的SPTBN2转录水平和SPTBN2蛋白表达量均低于阴性对照组和空白对照组。实验组的增殖、迁移和侵袭能力较阴性对照组降低,差异具有统计学意义(P 结论： (1)SPTBN2在膀胱癌中的表达量增加,与膀胱癌发展相关,高表达SPTBN2的膀胱癌患者预后较差。 (2)沉默SPTBN2能够抑制膀胱癌5637细胞的增殖、迁移和侵袭能力。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 伊红美蓝琼脂(EMB)的成分与用法及质量控制措施！ 一、菌种简介平台编号：Bio-54579规格：250g相关信息：/菌株名称：伊红美蓝琼脂(EMB)规格：250g用途：弱选择性培养基、用于分离肠道致病菌，特别是大肠杆菌(GB、SN标准)注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、成分(g/L)蛋白胨            10.0g乳糖              10.0g磷酸氢二钾        2.0g琼脂              15.0g伊红              0.4g美蓝              0.065gPH值              7.1±0.2 三、用法称取本品 3.74克,加热溶解100ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,备用。 四、质量控制和典型特征在36±1℃培养24±2h,典型大肠杆菌菌落特征为具黑色中心有金属光泽或无光泽。 五、微生物检测中培养基的质量控制措施1、伊红美蓝琼脂(EMB)的购置与验收1.1 购置从培养基自身的质量来看,不同生产厂家的产品,甚至同一厂家不同批号的产品都会存在差异。依据ISO/IEC17025《检测和校准实验室能力的通用要求》,对培养基的供应企业进行评价后选择合格的供应商,这是培养基购买过程中重要的步骤。应选择产品市场信誉度高、有质量保证能力和服务保证能力的企业;企业是否通过了质量管理体系的认证是较为客观的评价指标。要求生产企业提供:培养基成分名称及产品编号、批号、使用前的pH、储藏信息和有效期、性能评价和所用测试菌株、技术数据清单、质控证书以及必要的安全/危害数据等材料。1.2 验收购买的培养基到货后,应有专人做好接受和验收工作,应仔细核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。每批培养基到货物后都应对培养基的质量进行检测,满足检测方法规定的要求后方可投入使用。2、伊红美蓝琼脂(EMB)的储存干粉培养基应保存在阴凉干燥处,要避免阳光直射;未开瓶的培养基保存期限应按照生产厂家提供的信息执行,开瓶后的干粉培养基易吸湿,应注意防潮并尽快用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查,如容器密闭性复查、*开封日期、内容物的感官检查,如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。3、培养基的制备3.1 伊红美蓝琼脂(EMB)用水培养基制备用水应使用电阻率不小于30万Ωcm的蒸馏水或与其同质的水,*不使用离子交换器生产的去离子水。3.2 称量称量时要用专用的角匙,避免交叉污染而影响检验结果;干粉培养基易吸潮,如有条件,尽量在湿度较低的房间称取培养基。3.3 复水复水时不得用铜锅或铁锅,以防有离子混入培养基中,影响微生物的生长;容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上,避免在加热溶解过程中,培养基溢出;含有琼脂粉的培养基,在加热溶解之前可以浸泡数分钟;加热培养基时一定要进行搅拌,特别是琼脂类培养基。为避免烧焦和沸腾溢出,对于少量的培养基*使用沸水浴进行加热。烧糊的培养基营养物质被破坏,并可产生有毒物质,如发现焦化,或未溶解均匀前培养基有溢出,该培养基即不能使用,应重新制备。3.4 灭菌一般培养基采用湿热灭菌,即高压蒸汽灭菌,通常是121℃ 15 min,含糖或特殊培养基,按照国家标准或生产商提供的说明灭菌。已配制好的培养基必须立即灭菌,避免微生物生长繁殖而消耗养分,改变培养基的酸碱度。高温可破坏培养基的营养成分,还会使琼脂的凝胶强度下降,因此必须严格控制灭菌温度和时间,并且不可重复灭菌。高压蒸汽灭菌锅的压力表等要定期进行检定,并定期采用生物指示菌法或化学变色纸片对灭菌效果进行验证。3.5 pH测定微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。培养基配方要求的pH为灭菌或消毒后的pH 值,即培养基使用前的pH,并应在25℃温度下采用精密酸度计进行测量,固体琼脂培养基应以特殊的胶体表面测量电极进行测量。使用过程中,如果需要调整培养基的pH,应用1mol/L Na0H或 lmol/L HCL调整,注意不可反复调pH,否则会影响培养基的渗透压。3.6 配制好的培养基保存灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度,避免长时间保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成分或选择性效果。所配制的培养基的量,应该是在最长保存期限内正好使用完。含染料的培养基应闭光保存;倒好的琼脂平板如果配制的当天未使用完,应于冷藏保存,如果保存时间超过2天,应将其放入密封的塑料袋中保存。4、伊红美蓝琼脂(EMB)的性能测试4.1 外观控制制备好的培养基应有相应的颜色,一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化,是否蒸发/脱水。4.2 污染控制从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试(无菌试验),确定无微生物生长方可使用。4.3 性能测试4.3.1 测试菌株选择 测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基*性能的一套菌株,应来自国际/国家标准菌种保藏中心ATCC标准菌株,菌株的选择参考卫生行业标准WS/T232-2002《商业性微生物培养基质量检验规程》。4.3.2 定量测试方法 改良Miles-Misra法 测试菌株过夜培养物10倍递增稀释;测试平板和参照平板划分为4个区域并标记;从*稀释度开始,分别滴一滴稀释液于试验平板和对照平板标记好的区域;将稀释液涂满整个1/4区域,37°C培养18小时;对易计数的区域计数,按公式计算生长率(生长率=待测培养基平板上得到的菌落总数/参考培养基平板上获得的菌落总数)。非选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.7,该类培养基应易于目标菌生长;选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.1。4.3.3 半定量测试方法 改进的划线法接种法 平板分ABCD四区,共划16条线,平行线大概相隔0.5cm,每条有菌落生长的划线记作1分,每个仅一半的线有菌落生长记作0.5分,没有菌落生长或生长量少于划线的一半记作0分,分数加起来得到生长指数G。目标菌在培养基上应呈现典型的生长,而非目标菌的生长应部分或完全被抑制,目标菌的生长指数G大于6时,培养基可接受。4.3.4 定性测试方法 平板接种观察法 用接种环取测试菌培养物,在测试培养基表面划平行直线。按标准中规定的培养时间和温度对接种后的平板进行培养,目标菌应呈现良好生长,并有典型的菌落外观、大小和形态,非目标菌应是微弱生长或无生长。5、讨论伊红美蓝琼脂(EMB)的质量是微生物实验室检测工作的基础,事关检测工作的准确性、可靠性,在微生物实验室检测工作中举足轻重。如果在工作中忽视任何一个环节的质量问题,都将导致检验结果科学性、客观性的偏离。因此,加强培养基的实验室质量控制,认真地做好培养基的质控工作,不断完善和提高培养基的质控水平,才能为微生物检测实验室提供高质量的培养基。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 知识分享：检验员培训之微生物消毒与灭菌技术！ 几种常用的消毒剂 1、乳酸 常用剂量：0.33～1 mol/L 性质与用途：具有很强的杀菌作用，适用于空气消毒，以1～1.5 ml/m3的浓度，熏蒸房间作空气消毒，或与苯酚等量合用，熏蒸，密闭12h以上。 2、高锰酸钾 作用机制：氧化作用。  常用剂量：1%水溶液。 性质与用途：强氧化剂，稳定，使蛋白质、酶氧化变性。常用1%水溶液做皮肤、尿道以及蔬菜、水果、碗筷等消毒。在有机物存在时，可被还原成二氧化锰而降低杀菌效果，故用高锰酸钾液消毒物品时，其表面应先清洁。 3、过氧化氢 作用机制：蛋白质酶类变性。 常用剂量：3%。 性质与用途：利用新生氧杀菌，做皮肤、创伤、溃疡、口腔粘膜、化脓性炎症、厌氧菌感染等消毒。无毒，适用于大量的物具和食品消毒。不稳定，容易失效。 4、氯和次氯酸盐 作用机制：氧化作用。 常用剂量：(0.2~0.5)/106 性质与用途：漂白粉 10%～20%水溶液作脸盆等无渗透设备的表面消毒。次氯酸钠或钾水溶液广泛用于消毒和清洗伤口、溃疡、坏疽和体腔等，可迅速杀死细菌繁殖体，对真菌、病毒均有作用，对分枝杆菌和芽孢菌需较高浓度，接触时间长才有效。 氯有刺激性和毒性。次氯酸盐对金属有腐蚀性，当有机物存在时，活性明显降低，故应补偿氯和次氯酸盐，以保持有效氯的浓度。抗菌效能在pH7.9溶液中，效果降低、消失。 5、甲紫 作用机制：对核酸有亲和力，影响繁殖。 常用剂量：2%~4%。 性质与用途：对革兰阳性菌作用较强，对革兰阴性菌作用较弱，常用2%~4%的水溶液作浅皮创伤、烧伤、溃疡、真菌感染等的消毒，有强抑菌和弱的杀菌作用，特别对葡萄球菌作用较强。 为了更好的服务社会，创造双方利益最大化，我们特设了微生物菌种查询网（www.biobw.org）！专业为各企事业单位，科研院所，各级学校提供微生物菌种产品查询、购买服务！网站主要提供的产品：质控菌种，标准菌种，中国微生物菌种4万多株，细胞系/株1万多株其中金黄色葡萄球菌，大肠埃希氏菌（大肠杆菌），沙门氏菌，黑曲霉，铜绿假单胞菌，枯草芽孢杆菌，链球菌，白色念珠菌，志贺氏菌等为常用菌株。

                   小鼠视网膜感光细胞的处理方法与培养注意事项！  一、细胞简介平台编号：Bio-133757规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：661W细胞名称：RGC-5(661W)小鼠光受体细胞别名：661w; 661 W规格：T25形态特征：上皮细胞样生长特性：贴壁疾病：转化细胞基础培养基：RPMI 1640血清：南美级别胎牛血清配套完全培养基传代比例：1:3-1:6传代（培养面积比）传代方式：消化2-3分钟换液频率：2~3天换液1次冻存液配方：RPMI 1640+10%FBS+10%DMSO特征特性：原本认为是大鼠视网膜神经节细胞，但后来实验证实，该细胞是小鼠来源的，而且特性与原本声称的差距很大，并最后证实受661W细胞交叉污染。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞接受后处理方法1)收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。2)请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。3)弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。5)接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。 三、细胞培养操作1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。  3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。4.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、培养注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。4、静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞汇合度 80%左右时正常传代。5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 Procell 技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。7、该细胞仅供科研使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  大鼠胚胎心肌细胞的应用及培养操作步骤！ 一、背景 大鼠胚胎心肌细胞是一株由Kimes·B和Brandt·B从BD1X大鼠胚胎心脏组织的克隆细胞株亚克隆得到的细胞株；H9c2(2-1)细胞表现出许多骨骼肌的特性。H9c2(2-1)细胞中的成肌细胞能融合形成多核的肌管，并对乙酰胆碱的刺激发生反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%，H9c2(2-1)细胞融合发生得很快。 二、细胞培养操作步骤 1、大鼠胚胎心肌细胞培养基及培养冻存条件准备 1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）大鼠胚胎心肌细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）大鼠胚胎心肌细胞冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、大鼠胚胎心肌细胞处理： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）大鼠胚胎心肌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法： 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）大鼠胚胎心肌细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 下面T25瓶为例； 1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml. 2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。 3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 三、应用 大鼠胚胎心肌细胞可以用于miRNA-193a-3p对大鼠胚胎心肌细胞H9C2增殖和凋亡功能的影响： 胚胎心脏发育和先心病的发生受多种遗传因素共同调节,TBX1(T-box factor1)基因、转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路都已被证实是其中较为重要的环节。 前期研究发现,TBX1基因表达下调对TGF-β2及其通路的靶向调控可能是通过下调miR-193a-3p的表达实现的,但这条通路如何实现细胞水平的调控、对细胞功能有何影响目前仍不明确。鉴于许多miRNA对相关生物学活动的调控都依赖于对细胞的增殖或凋亡的调节,本研究将从miR-193a-3p对大鼠胚胎心肌细胞H9C2增殖和凋亡的影响入手,推断其参与心脏发育和先天性心脏病发病的可能作用机制。 方法： (1)将miR-193a-3p mimics,miR-193a-3p inhibitor分别转染至大鼠胚胎心肌细胞H9C2,qRT-PCR检测转染效率。 (2)以CCK-8法分别检测miR-193a-3p过表达和表达减低后细胞增殖能力的变化。 (3)流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)检测转染48h后心肌细胞的凋亡水平。 (4)实验数据使用SPSS19.0软件分析(计量数据以均值±标准差表示,P 结果： (1)与NC组相比,miR-193a-3p过表达后H9C2细胞的增殖受到抑制(P (2)与NC组相比,转染miR-193a-3p mimics 48h后H9C2细胞的凋亡率增高(P 结论：miR-193a-3p能够负向调节大鼠胚胎心肌细胞H9C2的增殖,正向调控其凋亡,其中对凋亡的调控环节可能位于凋亡早期;miR-193a-3p可能通过抑制心肌细胞的增殖、促进其凋亡参与心脏发育和先天性心脏病的发生。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)完全培养基的应用！ 一、背景 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)完全培养基(无说明书)用于小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的原代培养及传代培养。 实验方法原理：将小鼠的成纤维细胞（MEF）从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置MEF生长培养基培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 二、小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）原代培养步骤 1、用无菌眼科小剪刀或刮胡刀片将鼠胚躯干剪(切)成1mm3以下的碎块，吸置于离心管内。 2、加适量胰酶，将离心管置于培养箱中10-20分钟 3、取出离心管，反复吹打，加足量培养液终止消化。 4、离心1000转，5分钟。 5、弃掉上清，加适量培养液，反复吹打20次。 6、分装到T75中，一般每2个胚胎可以制成一个T75的原代细胞。 7、置37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱培养。 8、待细胞长3-7天细胞互相重叠爬满整个培养瓶底时即可1：3-1：6传代。 9、吸弃培养液上清。 10、PBS（不含钙镁）冲洗两次。 11、加0.25%胰酶-0.02EDT消化。 12、在显微镜下观察，当少量细胞漂浮，贴壁的细胞层出现裂隙时，用移液管吹打冲洗瓶底5-6次。 13、即刻加MEF培养液终止消化。 14、1000转，5分钟离心。吸弃上清。 15、加足培养液，吹打制成单细胞悬液，分装到各T75中。完成传代。 16、原代细胞中还有少量组织块未被充分消化，在以后的每次传代过程中要尽量制成单细胞悬液，组织块会逐渐消失。 17、原代细胞中混有一些杂细胞，一般传到第3代时，杂细胞逐渐减少。小鼠胚胎成纤维细胞为梭状；但连成片时，细胞互相交联，形态不典型。 三、应用 用于Ptpn11E76K激活突变协同miR-100失活促进小鼠胚胎成纤维细胞的恶性转化研究： 用小鼠胚胎成纤维细胞研究Ptpn11编码的SHP-2蛋白激活突变调控肿瘤发生的分子生物学机制,并寻找改善患者预后的新型靶向肿瘤标志物。SHP-2是一种普遍存在的非受体蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP）,该PTP包括两个串联Src同源结构域（N-SH2和C-SH2）,它们起磷酸酪氨酸结合域的作用,并介导该PTP与底物相互作用,在多种信号转导途径中发挥着至关重要的作用。SHP-2的功能失调能够诱发Noonan综合征、白血病、肺癌等。 前期研究发现,SHP-2激活突变不仅增强细胞扩散及血管生成,而且能够调节肿瘤发展中起重要作用的RAS-RAF等信号异常活化;还发现其突变增加了小鼠结直肠癌的发生。micro RNA（miRNA）是一类内源性非编码小RNA（约22个核苷酸）,它与其靶基因3’-UTR区结合,降解靶mRNA或抑制其翻译,参与基因转录后调控,从而在许多人类癌症中异常表达并发挥作用。我们前期在砷诱导的SHP-2 D61G功能性突变的小鼠胚胎成纤维细胞中做基因芯片检测多种miRNA表达谱发现miR-100的表达显著下降。研究发现miR-100参与调控多种细胞过程,在许多恶性肿瘤中异常表达并发挥作用。 方法： 1、取13.5d不同基因型的孕鼠制备原代小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）,通过相应胚胎组织的基因型鉴定后得到所需的MEFs并且纯化。 2、用表达Cre重组酶的腺病毒（Ad-Cre-GFP）同时感染制备的四组MEF细胞。在Cre重组酶作用下,能够将E76K前面的neo基因盒子敲除,从而表达E76K;并且Cre重组酶还可以利用识别loxp位点切除miR-100,实现miR-100功能失活。因此得到Ptpn11E76K突变和miR-100失活的MEF细胞株,进一步通过荧光定量PCR检测各组细胞中Cre,SHP-2,miR-100的表达情况来验证转染效率。 3、衰老相关β-半乳糖苷酶染色和相关细胞行为学实验检测Ptpn11E76K激活突变和miR-100失活对MEF细胞的生物学行为的影响:a.增殖实验:MTT,Ki67的免疫荧光和流氏细胞术,细胞周期分析b.细胞集落生长能力:平板克隆c.细胞非锚定生长情况:软琼脂集落形成d.迁移和侵袭能力:Transwell实验,划痕实验； 4、体内实验,建立裸鼠移植瘤模型检测四组MEF细胞在裸鼠体内增殖情况并将移植瘤接种在C57/BL6小鼠皮下进行传代培养。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 土曲霉酮的知识背景与主要应用及制备方法！ 一、背景及概述 土曲霉酮(terrein)是从曲霉菌特雷斯中提取的一种生物活性代谢产物，可以抑制黑色素的生成。同时，由于土曲霉酮的结构相对简单，容易体外合成。目前，已有多篇文章报道土曲霉酮可以在体外抑制多种肿瘤细胞的增殖。 二、应用 土曲霉酮化合物具有黑色素生物合成抑制作用。如同常规黑色素生物合成抑制剂曲酸一样，土曲霉酮化合物以剂量依赖的方式抑制黑色素生物合成，抑制作用是曲酸的10倍。尽管土曲霉酮化合物不直接抑制酪氨酸酶，但是它通过加速黑色素嗜铬细胞中的ERK(胞外信号调节激酶)活化作用而特异性地抑制MITF(小眼畸形相关转录因子)表达，从而进行增白。由于与直接抑制酪氨酸酶的常规黑色素生物合成抑制剂相比具有低的细胞毒性，因而副作用更小。此外，当与常规抑制剂一起使用时，由于它们不同的作用机制，增白效果会增强。因此，土曲霉酮可以有效地用作皮肤病治疗剂、皮肤增白剂或褐变抑制剂。 此外，土曲霉酮对乳腺癌、卵巢癌、肝癌等多种肿瘤细胞有抑制增殖的作用以人舌鳞状细胞癌细胞系SCC9作为研究对象，探讨土曲霉酮对SCC9细胞增殖的影响。研究发现，土曲霉酮可以抑制SCC9细胞的增殖，并且随着给药浓度的增大及作用时间的延长，抑制增殖的效果越明显。土曲霉酮处理2周可以明显抑制SCC9细胞的克隆形成。为进一步了解土曲霉酮是否通过影响了SCC9细胞周期或凋亡的改变从而抑制了细胞的增殖，实验结果发现，与对照组相比，5μmol/L及10μmol/L的土曲霉酮处理SCC9细胞48h后，使得处于G2/M期的SCC9细胞从(24.8±0.61)%分别增加到(26.2±0.40)%和(34.2±1.16)%，提示土曲霉酮使SCC9细胞阻滞在G2/M期，从而抑制细胞的增殖。真核细胞的细胞周期进程受细胞周期素(cyclins)及细胞周期素依赖性激酶(cyclin-dependentkinases，CDK)的调控。从G1期进入S期主要由CyclinA-Cdk2和CyclinE-Cdk2复合物调控，而CyclinB1-Cdk1则在G2/M期转换中起到重要作用。另外，周期素依赖性激酶抑制因子(CDKI)通过与CyclinB1-Cdk1复合物结合并抑制其活性，从而负调控G2/M期转换。有研究证实，药物通过上调p21及pcdk1的水平可以介导G2/M期阻滞。最近，有学者报导一种喜树碱衍生物CKD-602通过引起口腔鳞状细胞癌的G2/M期阻滞而起到抗肿瘤增殖的作用。研究中，与对照组相比，5μmol/L及10μmol/L的土曲霉酮处理并没有明显提高SCC9细胞的凋亡比例，提示土曲霉酮并不是通过促进SCC9细胞的凋亡来抑制细胞增殖的，而可能是土曲霉酮通过影响细胞周期相关的调节因子从而介导了SCC9细胞周期阻滞，进而抑制了细胞的增殖，但具体的机制还需进一步研究。 三、制备 土曲霉酮可以从由土壤中分离的青霉菌sp菌株的肉汤培养基中分离出来。具体而言，在500mlErlenmeyer烧瓶中，以140rpm的转速将青霉菌spF020135(保藏号：KCTC26245)(一种从土壤中分离出的真菌菌株)在100ml酵母-麦芽提取物(YM)介质上在28℃培养8天。使用滤纸将细胞和培养液彼此分离，将细胞置于等量丙酮中，放置过夜。用滤纸过滤除去细胞，减压浓缩得到丙酮提取物。将丙酮提取物和培养液置于等量乙酸乙酯中，进一步提取。减压浓缩混合物，得到乙酸乙酯提取物。通过硅胶柱色谱从制备的乙酸乙酯提取物得到馏份。首先，制备20：1的CHCl3和甲醇的混合溶剂，用于洗脱。逐渐提高混合溶剂中的甲醇含量，以提高极性，直到比例达到1∶1。在得到的馏份中，选择表现出黑色素生物合成抑制活性的那些馏份。使用100％甲醇溶剂饱和的交联葡聚糖LH-20柱色谱纯化得到的馏份。此时，甲醇用作洗脱溶剂，仅收集活性馏份，以得到土曲霉酮化合物。 土曲霉酮即一种黑色素生物合成抑制剂，它是白色粉末。经NMR数据分析和13CNMR谱研究，观察到8个碳峰：19.2(CH3)，78.0(CH)，82.5(CH)，125.0(CH)，126.1(CH)，145.0(CH)，170，和205.5ppm。经1H-NMR谱研究，还观察到其他峰：1.94ppm(3H，dd，J＝6.9，1.5Hz)，4.07ppm(1H，d，J＝2.7Hz)，4.67ppm(1H，d，J＝2.7Hz)，6.0ppm(1H，s)，6.44ppm(1H，dd，J＝15.6，1.5)，和6.81ppm(1H，aq，J＝6.9，15.6)。基于分子量分析和NMR数据分析结果，该化合物的结构最终确定为土曲霉酮。 微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！ 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              大肠埃希氏菌宿主的培养条件与注意事项及打管说明！ 一、菌种简介平台编号：Bio-72762规格：冻干粉拉丁属名：Escherichia Coli中文名称：大肠埃希氏菌拉丁名称：Escherichia coli来源历史：←日本收藏时间：2015-02-13原始编号：K-12 BW25113原产国：日本资源归类编码：15131122101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：ilvG基因缺陷型，乙酰乳酸合酶 II(Ahas) 缺陷型。具体用途：用于缬氨酸抑制实验。生物危害程度：四类培养基编号：CM0002培养基名称：营养肉汁琼脂培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：37℃需氧类型：好氧保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。  三、培养条件1、培养基编号：CM00022、培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。3、需氧类型：好氧4、培养温度：37℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，并取 100μL 转接到固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    MCF-7B人乳腺癌细胞系的培养特点及应用！  一、背景 MCF-7B人乳腺癌细胞系是从一名69岁白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立，常用于乳腺癌发病机理的研究。MCF-7B人乳腺癌细胞系来源于MCF-7细胞的一个亚克隆，表达高水平的褪黑素MT1受体的mRNA，对褪黑素有一定的敏感性。 人乳腺癌细胞系是用于研究乳腺癌的重要工具之一。通过研究这些细胞系，科学家们可以更好地了解乳腺癌的生物学特性、治疗靶点以及药物敏感性等方面的信息。MCF-7细胞系是其中一种广泛使用的细胞系，而MCF-7B则是从MCF-7细胞系中获得的一个亚克隆。MCF-7B人MCF-7B人乳腺癌细胞系属于贴壁细胞，显微镜下呈现上皮细胞形态，且保留了多个分化乳腺上皮的特性， 包括：1）能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构（domes）； 2）能表达WNT7B癌基因； 3）肿瘤坏死因子α（TNF alpha）可以抑制MCF-7B人乳腺癌细胞系细胞生长； 4）细胞经抗雌激素处理能调节胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）的分泌。 MCF-7B人乳腺癌细胞系细胞常用DMEM培养基，含10%胎牛血清，在37度、5%CO2培养箱中培养。MCF-7B人乳腺癌细胞系复苏后贴壁相对较慢，每周2-3次更换新鲜培养基，按1:2至1:3比例传代，胰酶消化室温1-2分钟，细胞培养时可添加0.01mg/mL胰岛素，需要注意的是MCF-7生长较快，如不及时传代可出现整瓶细胞漂浮。 二、MCF-7B人乳腺癌细胞系细胞培养特点 1、MCF-7细胞一般情况下是生长缓慢的细胞系，前期呈岛状生长，随着细胞生长，细胞会逐步变成扁平单层细胞。通常需要6~12天才能达到80%生长密度，如果生长速度比正常情况还要缓慢，可能需要换另外批次的血清，把血清浓度提高到20%也有助于改善细胞生长情况。 2、细胞在复苏和传代后，会在培养基中观察到成团的细胞漂浮物，对于这个细胞来说这是正常的情况，在复苏和传代后前三天可以静置细胞不做处理，三天后贴壁情况会有所改善，但悬浮的细胞团仍会出现，这些悬浮的细胞是活细胞在换液和传代时需要离心回收，这些悬浮细胞团可以通过使用移液器（5mL或者更小）来吹散，重新打入到贴壁细胞培养瓶中。丢弃这些悬浮细胞会使细胞密度变低，细胞生长缓慢。 3、使用BC-CE-005胰酶-EDTA消化液（0.25%胰酶，含酚红）消化细胞。 4、细胞消化较快，室温消化即可；消化时不要通过敲击或摇晃培养瓶来搅动细胞，以免形成细胞团。 三、应用 MCF-7B人乳腺癌细胞系可以用于miR let-7b抑制乳腺癌MCF-7细胞迁移及其机制的研究： 探讨miR let-7b是否抑制乳腺癌细胞迁移及其可能与IL-6相关的作用机制，在评估乳腺癌患者的转移及临床早期预防和治疗方面乳腺癌细胞的转移提供理论依据。 方法： 1、体外培养人乳腺癌MCF-7细胞，将实验组分为四组：空白对照组、miR let-7b转染组、miR-control转染组、anti-miR let-7b转染组并分别转染对应的人工合成miRNA，应用划痕实验方法，在显微镜下观察转染后24h不同实验组划痕距离的改变而判断细胞迁移能力的变化。 2、miR let-7b转染组、miR-control转染组、anti-miR let-7b转染组分别转染对应的人工合成miRNA培养48h后，粉碎细胞、提取RNA并反转录cDNA及提取蛋白，运用PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞内IL-6的表达水平。 3、通过capitalbio数据库和生物信息学软件TargetScan、DIANA-micoT3.0这两个软件两两比对，用载体构建、双荧光酶素报告基因方法验证miR let-7b与IL-6结合。 4、统计学分析：所有数据资料以均数±标准差(x±S)表示。采用SPSS17.0统计软件统计处理，用方差分析方法进行各实验组结果数据对比，采用LSD-t检验方法进行两两比较，认为当P 结果： 1、划痕实验：将转染miR-control、miR let-7b、anti-miR let-7b以及未转染的MCF-7细胞分别接种于6孔板中，分为空白对照组、miR-control转染组、miR let-7b转染组、anti-miR let-7b转染组，待细胞贴壁长满进行划痕实验，在细胞生长0h、24h后分别进行拍照，结果显示转染miR let-7b的细胞的划痕距离与空白对照组细胞的划痕距离相比明显增大，而转染anti-miR let-7b的细胞其划痕距离远小于空白对照组划痕距离。miR let-7b组与anti-miR let-7b组划痕距离差距更为明显，本实验方法表明miR let-7b能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移能力，而anti-miR let-7b能够明显促进乳腺癌MCF-7细胞的迁移。 2、PCR实验：将转染miR-control、miR let-7b、anti-miR let-7b的乳腺癌MCF-7细胞培养48h后粉碎并提取总RNA、反转cDNA，以其为模板进行PCR，PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳进行检测并照相，并分析灰度值。miR-control、miR let-7b组和anti-miR let-7b组的PCR灰度值（IL-6/GADPH）为0.89±0.24，0.23±0.18，1.03±0.21，经比对各组PCR条带灰度值总体比较时差异有统计学意义（F=5.77，P 3、蛋白质印迹法(Western blot)：将转染miR let-7b、miR-control、anti-miR let-7b的乳腺癌MCF-7细胞培养48h后粉碎并提取总蛋白，实验后行灰度值分析，蛋白质条带印迹灰度值（IL-6/β-肌动蛋白）分别为miR-control组0.76±0.28，miR let-7b组0.59±0.16，anti-miR let-7b组为1.22±0.23，各实验组对比时发现各实验分组总体比较时有差异（F=6.01，P 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                微生物检测培养基的分装与灭菌方法及质量检查！ 一、称取　　用精度度0.01的电子天平称取培养基所需药品。先根据配方计算出配制一定量培养基所需各种成分药品的量，然后用天平准确称取。称量时用称量纸折叠成簸箕状盛放药品。称量纸折叠方法如图所示。 二、溶化　　培养基放入烧杯或烧瓶中，慢慢加入少量所需水，边加入边用玻棒搅拌。如果培养基中不含有琼脂，培养基不需要加热;如果含有琼脂，则需要用电炉或者电热板等加热煮沸，完全溶解后，再补齐所需水，并搅拌均匀(如图3所示)。如果配制的培养基量很大，可用不锈钢锅加热溶化，可先用温水加热并随时搅动，防止焦化，如有焦化现象，配制的培养基就不能使用，要重新配制。 配制培养基时不可用铜或铁的容器溶化，因铜或铁制容器可能会使培养基中的铜和铁的含量超标，影响实验(培养基中铜含量大于0.3mg/L，细菌不宜生长，铁含量超过0.14mg/L，妨碍细菌产毒素)。对容易发生反应，产生沉淀的药品，要分开溶解，后加入培养基，如磷酸氢二钾和硫酸镁。 三、调pH　　虽然培养基中含有缓冲物质成分，能使培养基的pH尽可能的保持在要求的范围内，但是配出的培养基若不符合要求，就要进行必要的调整。如果有已校准pH计，可用pH计，如果没有，可用精密的pH试纸，再根据需要用1 mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸(微调可用0.1氢氧化钠或0.1mol/L盐酸)调制所需的pH。培基的pH一般为7.4～7.6，也有酸性或碱性的。用氢氧化钠调整的需要高压灭菌的培养基，在调整pH时要调至高出所需0.1个～0.2个单位，因用氢氧化钠调整时，高压灭菌后，培养基的pH要降低0.1~0.2。如培养基中含有碳酸钙成分，可不pH。 四、过滤　　配成的培养基，若无特殊要求，可省略此步。若有沉淀或浑浊.需要澄清的.液体培养基可用油纸过滤。而固体培养基可用中间夹一薄层脱脂棉的双层纱布过滤。如果过滤法还不能达到澄清的要求，则可用蛋清澄清法，即培养基加热冷却到50~60℃，装入三角瓶内(不超过容量的二分之一)，按1000mL加人1个～2个鸡蛋的蛋清，用力摇晃3-5min，高压蒸汽灭菌121℃、20min，取出趁热过滤即可。 五、分装　　配制好的培养基根据不同的用途分装在三角瓶、试管等容器中，分装试管，如果试管量很大，可用自动分液器，如果试管量少，可用漏斗分装。分装量不超过容器容积的三分之二。三角瓶以不超过容积的二分之一为宜;琼脂斜面以不超过试管长度的五分之一为宜，灭菌后，摆成的斜面为培养基量的三分之一，底层为三分之二的量为宜;半固体琼脂分装量为试管长度的三分之一;用来接种或保菌的高层琼脂，分装量为试管长度的四分之一或三分之一，用来接种厌氧菌的要达到三分之二;琼脂平板，内径为90mm的以13mL~15 mL为宜，内径70mm的平板为8mL~10 mL，制成的琼脂平板若表面水分较多，可将平板倒扣，放置在37℃培养箱内30min，干燥后再用。每批培养基应另外分装一小玻璃瓶(约20mL)与该批培养基同时灭菌，为测定该批培养基终pH。 六、灭菌　　分装好的培养基应立即进行灭菌。灭菌的方法种类如下：　　1、高压蒸汽灭菌法　　大多耐热培养基都可用此法，小量分装时，用121℃，15min;灭菌量大时，用121℃，30min灭菌;含糖类的培养基只能113~115℃，15min灭菌，避免糖类遭破坏。　　2、煮沸灭菌法　　对含有不耐高温物质的培养基，可使用此方法。　　3、过滤除菌　　以过滤的方法除菌，用无菌操作技术，定量加入培养基。血液、抗生素可用无菌操作技术抽取，加入冷却到50℃左右的培养基中。培养基含有不耐热的物质时，可用此法。　　对LST培养基进行灭菌时，有时发酵管内会有气泡。为防止发酵管内产生气泡，可以采取以下几项措施：　　1、小倒管浸满培养基(不留气泡)后再加入到盛LST的试管中。　　2、灭菌锅关闭放气阀前，将锅内气体排干净。　　3、试管塞不要塞得太紧(使用硅胶塞的时候)，勿使用橡皮塞。　　4、不要过早打开灭菌锅，要等灭菌锅内气压和温度都降到与室温一致或相差不大时再打开灭菌锅。　　如果以上情况都做到还有气泡，可用水做培养基组的对照试验，若培养基组有气泡，而对照组没有气泡可确定是培养基自身的原因。 七、倒平板　　灭菌融化的培养基冷却到50℃后，倒入无菌干燥的培养皿中。培养基的温度不能过高，否则容易在培养皿的内盖上形成太多的冷凝水;温度太低，培养基又容易凝固成块，无法制成平板。倒平板时，应在靠近酒精灯火焰进行，以免外界的杂菌落入平板内，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部，用左手的小指和手掌部位把三角瓶的棉塞拔下，灼烧瓶口，用大拇指和食指把培养皿盖打开一条缝，至瓶口刚好伸入，倒入培养基，以铺满底为限，不超过培养皿高度的三分之一，迅速盖好盖，放在桌面上，轻轻地转动培养皿，使培养基分布均匀，冷凝后即可。 八、摆斜面　　装在试管中的琼脂培养基，在灭菌完成后，趁热立即摆放在木棒(或玻璃棒)上，并成适当的斜度，冷却后，琼脂凝固即成斜面。斜面长度不用超过试管二分之一。 九、质量检查　　培养基灭菌后仔细检查一遍，发现有破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染，都要丢弃，不能再用。并测定其终pH。还需进行无菌检查和效果检查。无菌检查是将灭菌后的培养基取1管(瓶)~2管(瓶)，37℃恒温培养1d～2d，确定无杂菌生长;效果检查是用标准菌株接种在相关的培养基上检查检查菌的生长、形态及生化情况，与已知情况相符。两种情况都合格，配制的培养基方可使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              食源性致病菌检测技术——分子生物学方法鉴定系统！ 百欧博伟生物：随着微生物学、生物化学和分子生物化学的飞速发展，对病原微生物的鉴定己不再局限于对它的外部形态结构及生理特性等一般检验上，而是从分子生物学水平上研究生物大分子，特别是核酸结构及其组成部分。在此基础上建立的众多检测技术中，核酸探针和聚合酶链反应，以其敏感、特异、简便、快速的特点成为世人瞩目的生物技术的新产物，业已逐步应用于食源性病原菌的检测。分子生物学方法除了可用于初筛检测，由于其具有高特异性和敏感性，因此可直接用于微生物的鉴定。 核酸探针在快速检测食品中致病菌的研究现状   原理：将己知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法标记，加入己变性的被检DNA样品中，在一定条件下即可与该样品中有同源序列的DNA区段形成杂交双链，从而达到鉴定样品中DNA的目的。 核酸探针：能认识到特异性核苷酸序列，且有标记的单链DNA分子。 核酸探针的应用主要的范围： (1)用于检测无法培养，不能用作生化鉴定、不可观察的微生物产物以及缺乏诊断抗原等情况，如肠毒素基因。 (2)用于检测同食源性感染有关的病毒病，如检测肝炎病毒，流行病学调查研究，区分有毒和无毒菌株。 (3)检测细菌内抗药基因。 (4)分析食品是否会被某些耐药菌株污染，判定食品污染的特性。 (5)细菌分型，包括rRNA分型。  核酸探针检测技术的最大优点是： (1)特异性； (2)敏感性。 存在的问题： 检测一种菌就需要制备一种探针；要达到检测量还要对样品进行一定时问的培养；探针检测是分析基因序列，对毒素污染的食品有时因样品中不含产毒菌而无法检测。 制备核酸探针杂交技术： (1)夹心杂交法 (2)核酸置换杂交分析法 (3)浸染棒法 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  停滞棒状杆菌的培养及单层冻干物打管说明书！ 一、菌种简介平台编号：Bio-04705提供形式：冻干物拉丁属名： Corynebacterium Stationis中文译名：停滞棒状杆菌拉丁学名：Corynebacterium stationis曾用名：产氨棒杆菌Corynebacterium ammoniagenes原始编号：11菌株来源：←中国科学院微生物研究所直接来源国家：中国保藏时间：3/1/1972生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：肌苷酸培养温度：30℃培养基：0002    用途：肌苷酸注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一种）、原种（二种）和栽培种（三种）三。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备 ，其中(1)～(4)为孢子制备过程。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。放线菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于28～37℃培养5～14天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐(6)的种子。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶(5)液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃)：是适用范围广的微生物保存法。 五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 六、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 CACO2人结直肠腺癌细胞的培养方式与质量检测！ 人结直肠腺癌细胞分离自直肠原位癌。人结肠癌Caco-2细胞系在标准培养条件下汇合后，自发分化为肠上皮样细胞，是常用的肠癌细胞模型。当长到满时，细胞表现出特征性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维甲酸结合蛋白I和维甲酸结合蛋白II，并呈角质蛋白阳性。 一、细胞简介平台编号：Bio-72991规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：Caco-2/CACO2细胞名称：Caco-2 (人结直肠腺癌细胞)(STR鉴定正确) 细胞别称：CaCo-2; CACO-2; Caco 2; CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2; Caco2; Caco-2/ATCC 背景描述：Caco-2细胞分离自直肠原位癌；当长到满时，Caco-2细胞表现出特征性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维甲酸结合蛋白I和维甲酸结合蛋白Ⅱ，并呈角质蛋白阳性。 种属：人 年龄（性别）：男；72岁 组织来源：结肠，结直肠腺癌 生长特性：贴壁细胞 细胞形态：上皮细胞样 细胞类型：肿瘤细胞 肿瘤类型：肠癌细胞 生物安全等级：1 生长培养基：MEM（含NEAA）＋20% FBS＋1% P/S 推荐传代比例：1:3-1:4 推荐换液频率：2~3次/周 冻存条件：冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮 培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃ 用途：(STR鉴定正确)注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方式1、培养基：CACO2 专用培养基【MEM＋20% FBS＋1% P/S +1%NEAA】2、培养环境：37℃、5%CO23、传代培养：当细胞密度达到 80%以上时，可以进行传代，传代比例 1:2~1:4，3~5 天传代一次。（1）用巴氏滴管吸出细胞培养瓶内的培养基；（2）加入 1ml 的 PBS，轻轻晃动润洗细胞，然后将 PBS 吸出；（3）加入 2ml 的胰酶，轻轻晃动浸润细胞，然后放在培养箱内消化消化 3~5 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间）；（4）在显微镜下观察，发现细胞变圆，轻轻晃动细胞便开始脱落，这时可以终止消化；（5）加入 4ml 含血清的完全培养基，用移液器吹打细胞，使细胞脱落并形成单细胞悬液；（6）将细胞悬液转移到 15ml 的离心管，1000rpm 离心 5min；（7）离心完成后吸出上清丢弃，再用移液管取 10ml 完全培养基将细胞重悬，轻轻吹打混匀；（8）将细胞悬液分装到两个新的 T25 细胞培养瓶中，放在 37℃的 CO2培养箱中进行培养。传代后细胞贴壁较慢，48h 内不要换液；细胞形态不均一，有一些含有液泡的巨大细胞， 属正常现象。4、细胞冻存：使用本公司无血清冻存液可直接将细胞冻存在-80℃（无需使用程序降温盒），细胞在-80℃可保存 3 年，长期保存建议使用液氮罐。5、冷冻复苏细胞：将含有 1mL 细胞冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 6cm 皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。  三、质量检测1、STR 鉴定：正确2、细菌检测：阴性3、支原体检测：阴性 四、售后服务1、收到细胞后请及时查看瓶身有无破损，是否漏液等现象；2、用 75%的酒精喷洒培养瓶之后，放在培养箱中静置 2-4 小时以稳定细胞状态，然后用显微镜观察细胞状态并拍照记录，40 倍和 100 倍照片各一张（细胞在运输过程中存在少量的漂浮或者死亡属于正常现象）；3、原瓶中的培养基在细胞传代之后不建议继续使用，请配制新的完全培养基或者购买本公司的专用培养基；4、建议定期对细胞进行拍照记录；收到细胞后 7 天内，对细胞生长状态有任何问题，可申请售后。5、强烈建议：在第一次细胞传代时，使用附赠或者购买本公司配置的细胞培养瓶将细胞按照 1:2 进行传代，可以对比测试自配的培养基是否可以养好细胞。如果有以上任何问题，请及时联系本公司。 五、注意事项1、细胞贴壁慢特别是刚复苏时，一般两到三天贴壁展开，会有空泡； 2、细胞在传代细胞中注意消散，不然难贴壁； 3、成团生长，细胞密度越大，表面空泡黑点越多； 4、一般细胞长至80%传代，细胞成片，其实密度很大； 5、细胞生长太满对细胞状态影响严重，传代后易碎，死亡； 6、细胞生长时间越久，消化难度也会随之增加；消化到轻拍培养瓶侧边细胞可以滑落的时候可以终止。  北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                汉逊德巴利酵母的培养方法与实验内容及注意事项！ 汉逊德巴利酵母是Debaryomyces属的微生物，原产地为中国。以多极茁芽进行无性繁殖；细胞圆形或卵圆形；假菌丝极简单或不形成；在液体培养基中沉淀成块后又形成浮膜。有性生殖行异形交配，细胞与本身的芽交配后生孢子1~2个。孢子球形或拟球形，中部含油球1个。孢子壁上时有小瘤。主要用途为研究；教学。 一、菌种简介平台编号：Bio-64676提供形式：冻干物拉丁属名：Debaryomyces Hansenii中文名称：汉逊德巴利酵母拉丁名称：Debaryomyces hansenii来源历史：←湖南轻工研究院有限责任公司（5.325）收藏时间：2008/9/22原始编号：Y46资源归类编码：15151113106模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产特征特性：不发酵葡萄糖、蔗糖、棉籽糖、山梨糖、麦芽糖、乳糖、纤维二糖、木糖、半乳糖、可溶性淀粉；同化木糖、半乳糖、葡萄糖、乙醇、蔗糖、棉籽糖、麦芽糖、乳糖、纤维二糖、山梨糖、可溶性淀粉。具体用途：发酵水解液废液酵母。生物危害程度：四类培养基编号：CM0077培养基名称：5 °Bé麦芽汁琼脂培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：28-30℃需氧类型：好氧保存方法：真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：发酵水解液废液酵母。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品优势1、产品质量稳定，是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法，保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等。 三、培养条件0013 麦芽汁琼脂 I12Brix.麦芽汁 1.0 L 琼脂 15.0 g 自然 PH13 号培养基或用下列培养基代替葡萄糖 1% 蛋白胨 1% 酵母提取物 0.5% 琼脂 2% 四、培养方法1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系的培养操作规程！  一、背景 HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系是一种人类小细胞肺癌的体外细胞模型，用于研究该疾病的发生、发展和治疗。该细胞系是由美国国立卫生研究院(NIH)建立的，是从一名患有小细胞肺癌的患者身上获取的肿瘤组织进行培养而得到的。 HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系在形态学上表现为多边形或长方形，具有高度的异质性和增殖能力。它们表达多种与小细胞肺癌相关的分子标志物，如神经元特异性烯醇化酶(NSE)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)等。此外，HOP-92细胞系还表现出对多种化疗药物和靶向药物的不同敏感性，这为临床治疗提供了重要的参考依据。 HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系已经被广泛应用于小细胞肺癌的基础研究和药物筛选等领域。研究人员可以通过对该细胞系的研究来探索小细胞肺癌的发生机制、寻找新的治疗靶点以及评估新药物的疗效和安全性等。 二、HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系培养方法 1、HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系传代：细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化； ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止； ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清； ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基； ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞复苏： ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。 3、HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶） ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化； ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞； ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 三、应用 HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系可以用于miR-542-5p在非小细胞肺癌中的临床意义及初步机制研究： miR-542-5p潜在靶基因网络生物信息学分析 1、通过12个预测软件预测出57233个miR-542-5p预测靶基因,按至少同时出现在六个软件预测为条件,筛选出452个靶基因。 2、DAVID软件测出miR-542-5p预测的GO分析结果中,生物过程GO分析(GOTERM BP FAT)中有147条通路信息,其中最显著的前三条通路如下：RNA聚合酶引物调控的转录通路(regulation of transcription from RNA polymerase II promoter；GO:0006357,P=0.002)；蛋白质定位通路(protein localization；GO:0008104,P=0.002)；Wnt受体信号通路(Wnt receptor signaling pathway；GO:0016055,P=0.002).细胞组成GO分析(GOTERM CC FAT)中有15条,其中排前三条通路如下：神经元投射通路(neuron projection；GO:0043005,P=0.003)；突触调控通路(synapse；GO:0045202,P 3、DAVID软件测出miR-542.5p参与的KEGG通路分析13条通路信息,其中三条最显著为：卵母细胞成熟分裂调控通路(Oocyte meiosis；hsa04114,P=0.01):扩张性心肌病调控通路(Dilated cardiomyopathy；hsa05414,P=0.012):黑素原生成调控通路(Melanogenesis；hsa04916,P=0.018). 4、DAVID软件测出miR-542-5p参与的PANTHER通路分析有12条通路信息,其中参与的最显著三条通路为：GABA.BⅡ受体信号(GABA-BreceptorⅡsignaling;P05731,P=0.001);谷氨酸受体组第三途径(Metabotropic glutamate receptor groupⅢpathway;P00039,P=0.013);胰岛素／胰岛素样生长因子通路蛋白激酶B信号级联(Insulin/IGF pathway-protein kinase B signaling cascade;P00033,P=0.024)。 5、452个靶基因在String上分析结果显示：GO分析中miR-542-5p参与的生物过程通路(GOTERM BP FAT)中有121有意义的作用结果(P 6、通过将靶基因注释在NCI-60 cell lines不同癌症细胞系中的表达图谱,显示出多个靶基因在HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系,HOP62;NCI-H226;NCI-H23;NCI-H322;NCI-460及EKVX肺癌细胞系中高表达,依次为NSD1,ELF4,HOXA9,ABL1,ABL2,NOTCH1,TCF3,SEPT6,NUP214,CRTC1。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      超实用——高压灭菌器的日常维护及保养！ 百欧博伟生物：工欲善其事,必先利其器，GB 4789.1-2016《食品安全国标准 食品微生物学检 总则》中要求：实验设备应定期进行检查和/或检定（加贴标志）、维护和保养，以确保工作性能和操作安全。高压灭菌器作为实验室常用的实验设备，除了在操作过程中注意安全外，日常的维护及保养也特别重要。 注意：仪器保养维护前要确保仪器处于断电、冷却状态！ 一、仪器的保养、维护及管理 内置水箱的排水： 用硅胶管连接水箱排水口至接水容器或下水道，然后打开排水球阀即可排干水箱里的水。 建议：每周排水一次 灭菌腔换水： 灭菌腔内水如长期反复使用，水中赃物容易堵塞电磁阀，导致电磁阀生锈、会产生噪音。 建议：每周换水一次，若灭菌物中含有轻微腐蚀物，建议一天换水一次。 注意： 1、打开灭菌腔排水阀、水箱排水阀前先确认机器未运行且主控温度低于40℃； 2、久置不用及运输时，须将腔体内的水及内置水箱的水排空。 灭菌腔清洗： 定期清理灭菌腔，去除水垢和杂物，用带柄的刷子清洁灭菌腔底部，注意不要用力过猛，损坏电热管及温度控制开关。用润湿的软布将灭菌腔擦洗干净，再用热水冲洗（不要加入任何清洁剂）。 建议：每周清洗一次 电热管的清洗与保养： 取出水位板，查看电热管表面是否干净，如有污垢可以用软毛刷轻轻地擦洗冲水，然后将脏水排出。擦洗时注意不要移动、碰坏温度控制开关。 建议：每月清洗一次 水位传感器的清洁与保养： 应注意保持水位传感器的清洁，如污垢附着在传感器的表面，容易导致误报，甚至停止工作。 建议：每周用柔软的布擦拭一次，去除传感器表面附着的污垢。 仪器表面清洁： 用柔软的布轻轻擦拭仪器外表，对于较难以除去的污渍可以使用少许中性洗剂擦拭后注意用布擦干，不要用苯酚或油稀释剂清洁仪器表面，以免损坏仪器表面或导致油漆脱落。 建议：每周清洗一次 密封圈的保养： 检查密封圈是否破损，如果有损坏，须立即更换。应定期清洁密封圈表面，去除污垢，清洁时可加少许清洁剂并用湿布擦拭。 建议：每次使用前检查密封圈，每周清洗一次。 二、仪器的检测与维护 漏电开关检查： 按下漏电断路器的测试按钮，如果漏电断路器跳闸，表示正常，否则请关闭漏电断路器，联系经销商。 建议：每月检查一次。 安全阀工作测试： 进入用户管理员菜单选择安全阀测试程序，如果温度超过后台最高工作温度（依海拔而变化）安全阀仍未启动排汽，则安全阀异常，马上停止测试，联系经销商。 建议：每月测试一次并每年将安全阀送当地特检院校验一次。 压力表定期标定： 压力表每半年送当地特检院检定一次； 建议：多备一套压力表及安全阀。 无论是日常的维护还是定期的保养，对于仪器而言都是一次焕发的机会，可以延长灭菌器的使用寿命，降低故障几率，减少安全隐患，提高灭菌效率。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 念珠状链杆菌的知识概念与注意事项及打管说明！ 念珠状链杆菌是存在于健康鼠口腔和咽部的一种菌，为美国鼠咬热的最主要病因。它并不是一种螺旋体。已发现感染的暴发与饮入未消毒的和污染的牛奶有关系，当疾病是以此种方式传播时被称为哈弗里尔热（Haverhill）。然而，感染常常是由受染的野生大鼠或小鼠咬伤后发病，偶尔感染亦可由鼬鼠和其他啮齿类动物传播。 一、产品信息平台编号：Bio-098855规格：冻干物拉丁属名：Streptobacillus Moniliformis菌株名称：念珠状链杆菌收藏时间：2009/9/14资源归类编码：15131715000模式菌株：非模式菌株主要用途：分类；研究；教学特征特性：杆菌，常排列成链和丝状体，不被荚膜，不运动，革兰氏阴性，发酵性代谢，兼性厌氧，对大鼠和其他哺乳动物寄生以至致病，不液化明胶生物危害程度：三类致病对象：动物致病名称：鼠咬热传播途径：鼠咬伤,抓伤而传染，也可通过奶制品和水污染而引起培养基编号：861培养温度：37℃注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、基本概念念珠状链杆菌是存在于健康鼠口腔和咽部的一种菌，为美国鼠咬热的最主要病因。它并不是一种螺旋体。已发现感染的暴发与饮入未消毒的和污染的牛奶有关系，当疾病是以此种方式传播时被称为哈弗里尔热（Haverhill）。然而，感染常常是由受染的野生大鼠或小鼠咬伤后发病，偶尔感染亦可由鼬鼠和其他啮齿类动物传播。 三、链杆菌鼠咬热鼠咬热是由两种不同的病原体之一经鼠咬而传染的一种感染。达10%的被鼠咬伤的人可发生鼠咬热，主要发生于贫困区居民，无家可归者和生物医学实验室工作人员。念珠状链杆菌是存在于健康鼠口腔和咽部的一种菌，为美国鼠咬热的最主要病因。它并不是一种螺旋体。已发现感染的暴发与饮入未消毒的和污染的牛奶有关系，当疾病是以此种方式传播时被称为哈弗里尔热（Haverhill）。然而，感染常常是由受染的野生大鼠或小鼠咬伤后发病，偶尔感染亦可由鼬鼠和其他啮齿类动物传播。  四、培养基*脑心琼脂（BHI）心提取物 5g 脑提取物 12.5g 月示胨 10g 葡萄糖 2gNaCl 5g Na2HPO4 2. 5g 琼脂 2.5g 蒸馏水 1LpH7.4 五、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油请置于-80 度。  六、注意事项1）冻干粉以 200ul-500ul 推荐培养基的液体溶解，最适接种量为 2 支 18*180 试管或者 2 支5ml 液体（请不要在锥形瓶中复苏菌种），待菌种活化成功后才能扩大培养。经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；2）若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  青枯假单胞菌——用途为柠檬桉青枯病病源菌 一、菌种简介青枯假单胞菌（Pseudomonas solanacearum）或称青枯菌，是引起许多重要经济作物如烟草、花生、番茄等植物的萎焉病。主要通过土壤传染病害,它的寄主范围很广泛,有33科100多个种,危害茄科植物为最多。 二、产品信息平台编号：Bio-51821规格：冻干物拉丁属名：Pseudomonas Solanacearum菌株名称：青枯假单胞菌别名：青枯菌所属学科：微生物学其他编号：M1.10培养基编号：151培养温度：32℃用途：柠檬桉青枯病病源菌注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、微生物的培养方法，包括以下步骤（1）前期准备：（A）灭菌处理；（B）制备Biolite水；（C）检查设备和材料；（2）按比例配制培养材料；（3）导入曝气，进行繁殖培养；（4）取液观察；（a）取液；（b）稀释菌液；（c）平板培养；（5）分离并检测；（6）取液储存；通过该综合微生物培养方法简单可操作性强，培养的综合微生物均在3代以内，菌类稳定不发生突变，且繁殖快速。 五、仪器设备与器具1、恒温培养箱：36±1℃。2、1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。3、接种针。4、显微镜。5、超净工作台。6、玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。7、天平：感量0.01g。8、灭菌釜。9、培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。10、试管夹、酒精灯、秒表、载玻片 六、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！