HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系的培养操作规程！

                   HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系的培养操作规程！

一、背景

HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系是一种人类小细胞肺癌的体外细胞模型，用于研究该疾病的发生、发展和治疗。该细胞系是由美国国立卫生研究院(NIH)建立的，是从一名患有小细胞肺癌的患者身上获取的肿瘤组织进行培养而得到的。

HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系在形态学上表现为多边形或长方形，具有高度的异质性和增殖能力。它们表达多种与小细胞肺癌相关的分子标志物，如神经元特异性烯醇化酶(NSE)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)等。此外，HOP-92细胞系还表现出对多种化疗药物和靶向药物的不同敏感性，这为临床治疗提供了重要的参考依据。

HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系已经被广泛应用于小细胞肺癌的基础研究和药物筛选等领域。研究人员可以通过对该细胞系的研究来探索小细胞肺癌的发生机制、寻找新的治疗靶点以及评估新药物的疗效和安全性等。

二、HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系培养方法

1、HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

三、应用

HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系可以用于miR-542-5p在非小细胞肺癌中的临床意义及初步机制研究：

miR-542-5p潜在靶基因网络生物信息学分析

1、通过12个预测软件预测出57233个miR-542-5p预测靶基因,按至少同时出现在六个软件预测为条件,筛选出452个靶基因。

2、DAVID软件测出miR-542-5p预测的GO分析结果中,生物过程GO分析(GOTERM BP FAT)中有147条通路信息,其中最显著的前三条通路如下：RNA聚合酶引物调控的转录通路(regulation of transcription from RNA polymerase II promoter；GO:0006357,P=0.002)；蛋白质定位通路(protein localization；GO:0008104,P=0.002)；Wnt受体信号通路(Wnt receptor signaling pathway；GO:0016055,P=0.002).细胞组成GO分析(GOTERM CC FAT)中有15条,其中排前三条通路如下：神经元投射通路(neuron projection；GO:0043005,P=0.003)；突触调控通路(synapse；GO:0045202,P<0.001):体元投射(cell projection；GO:0042995,P<0.001).分子功能GO分析(GOTERM MF FAT)中有37条,其中三条最显著通路如下：蛋白质糖基绑定(protein C-terminus binding；GO:0008022,P=0.003):转录调节活性(transcription regulator activity:GO:0030528,P=0.017)；蛋白质自联(protein self-association；GO:0043621,P=0.037).

3、DAVID软件测出miR-542.5p参与的KEGG通路分析13条通路信息,其中三条最显著为：卵母细胞成熟分裂调控通路(Oocyte meiosis；hsa04114,P=0.01):扩张性心肌病调控通路(Dilated cardiomyopathy；hsa05414,P=0.012):黑素原生成调控通路(Melanogenesis；hsa04916,P=0.018).

4、DAVID软件测出miR-542-5p参与的PANTHER通路分析有12条通路信息,其中参与的最显著三条通路为：GABA.BⅡ受体信号(GABA-BreceptorⅡsignaling;P05731,P=0.001);谷氨酸受体组第三途径(Metabotropic glutamate receptor groupⅢpathway;P00039,P=0.013);胰岛素／胰岛素样生长因子通路蛋白激酶B信号级联(Insulin/IGF pathway-protein kinase B signaling cascade;P00033,P=0.024)。

5、452个靶基因在String上分析结果显示：GO分析中miR-542-5p参与的生物过程通路(GOTERM BP FAT)中有121有意义的作用结果(P<0.05),其中参与的前三条依次为神经系统的发展(nervous system development)(GO:0007399),神经(nervous)(GO:0022008),细胞分化(cell differentiation)(GO:0030154);细胞组成通路(GOTERM CC FAT)中有20条有意义的作用结果(P<0.05),其中参与的前三条依次为细胞反射(cell projection)(GO:0042995),神经反射(neuron projection)(GO:0043005),神经系统的部分(neuron part)(GO:0097458);分子功能通路(GOTERM MF FAT)中仅参与蛋白绑定(protein blind)(GO:0005515)的作用(P<0.05)。KEGG通路中有7条作用结果,其中参与的前三条依次为吗啡慢性中毒(Morphine addiction);可卡因成瘾(Cocaine addiction),心肌细胞的肾上腺素信号通路(Adrenergic signaling in cardiomyocytes)(P<0.05)。并通过网络分析及网站评分信息检测出21个hub gene,分别为RMT8,ADAMTS8,MASP1,HOXC9,ARTN,NPDC1,CASC3,NCDN,ARPC4,PGPEP1,TNNI3K,SLC24A3,EPS8L2,FARSA,PDDC1,PLEKHM1,UNKL,PRDM9,ISYNA,BCL2L1。

6、通过将靶基因注释在NCI-60 cell lines不同癌症细胞系中的表达图谱,显示出多个靶基因在HOP-92人小细胞肺癌贴壁细胞系,HOP62;NCI-H226;NCI-H23;NCI-H322;NCI-460及EKVX肺癌细胞系中高表达,依次为NSD1,ELF4,HOXA9,ABL1,ABL2,NOTCH1,TCF3,SEPT6,NUP214,CRTC1。

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