汉逊德巴利酵母的培养方法与实验内容及注意事项！

                汉逊德巴利酵母的培养方法与实验内容及注意事项！

汉逊德巴利酵母是Debaryomyces属的微生物，原产地为中国。以多极茁芽进行无性繁殖；细胞圆形或卵圆形；假菌丝极简单或不形成；在液体培养基中沉淀成块后又形成浮膜。有性生殖行异形交配，细胞与本身的芽交配后生孢子1~2个。孢子球形或拟球形，中部含油球1个。孢子壁上时有小瘤。主要用途为研究；教学。

一、菌种简介

平台编号：Bio-64676

提供形式：冻干物

拉丁属名：Debaryomyces Hansenii

中文名称：汉逊德巴利酵母

拉丁名称：Debaryomyces hansenii

来源历史：←湖南轻工研究院有限责任公司（5.325）

收藏时间：2008/9/22

原始编号：Y46

资源归类编码：15151113106

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究；生产

特征特性：不发酵葡萄糖、蔗糖、棉籽糖、山梨糖、麦芽糖、乳糖、纤维二糖、木糖、半乳糖、可溶性淀粉；同化木糖、半乳糖、葡萄糖、乙醇、蔗糖、棉籽糖、麦芽糖、乳糖、纤维二糖、山梨糖、可溶性淀粉。

具体用途：发酵水解液废液酵母。

生物危害程度：四类

培养基编号：CM0077

培养基名称：5 °Bé麦芽汁琼脂

培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。

培养温度：28-30℃

需氧类型：好氧

保存方法：真空冷冻干燥法

共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享

用途：发酵水解液废液酵母。

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、产品优势

1、产品质量稳定，是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。

2、国内首创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法，保证菌种的复苏质量。

3、严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。

4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等。

三、培养条件

0013 麦芽汁琼脂 I

12Brix.麦芽汁 1.0 L 琼脂 15.0 g 自然 PH

13 号培养基或用下列培养基代替

葡萄糖 1% 蛋白胨 1% 酵母提取物 0.5% 琼脂 2%

四、培养方法

1、平板划线分离法:把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环圈在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落。

2、稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养,在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。

上述两种方法虽然都可以实现观察菌落特征的目的,但平板划线分离法不能对菌落计数,而稀释涂布平板法培养过程复杂,对平板的要求比较高,可参照以下步骤:

a、制备平板培养基将氯化钠蔗糖琼脂培养基加热溶化并冷却至65℃,向氯化钠蔗糖琼脂培养基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均匀,然后取20ml混合均匀的培养基溶液倒入培养皿,轻轻摇动培养皿,使培养基溶液均匀分布在培养皿底部,待培养基溶液凝固后即得平板培养基。

b、制备活性污泥混合液称取活性污泥土样15g,放入盛100ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇15~20min混合均匀,用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀,制成活性污泥混合液。

c、培养基涂布从活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培养基表面的中央位置,用无菌玻璃涂棒将活性污泥混合液沿同心圆方向轻轻地向外扩展,使之分布均匀。

五、实验内容

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

六、注意事项

1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。

2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。

3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。

4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。

5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。

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