CACO2人结直肠腺癌细胞的培养方式与质量检测！

                 CACO2人结直肠腺癌细胞的培养方式与质量检测！

人结直肠腺癌细胞分离自直肠原位癌。人结肠癌Caco-2细胞系在标准培养条件下汇合后，自发分化为肠上皮样细胞，是常用的肠癌细胞模型。当长到满时，细胞表现出特征性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维甲酸结合蛋白I和维甲酸结合蛋白II，并呈角质蛋白阳性。

一、细胞简介

平台编号：Bio-72991

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：Caco-2/CACO2

细胞名称：Caco-2 (人结直肠腺癌细胞)(STR鉴定正确) 

细胞别称：CaCo-2; CACO-2; Caco 2; CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2; Caco2; Caco-2/ATCC

背景描述：Caco-2细胞分离自直肠原位癌；当长到满时，Caco-2细胞表现出特征性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维甲酸结合蛋白I和维甲酸结合蛋白Ⅱ，并呈角质蛋白阳性。

种属：人

年龄（性别）：男；72岁

组织来源：结肠，结直肠腺癌

生长特性：贴壁细胞

细胞形态：上皮细胞样

细胞类型：肿瘤细胞

肿瘤类型：肠癌细胞

生物安全等级：1

生长培养基：MEM（含NEAA）＋20% FBS＋1% P/S

推荐传代比例：1:3-1:4

推荐换液频率：2~3次/周

冻存条件：冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

用途：(STR鉴定正确)

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、培养方式

1、培养基：CACO2 专用培养基【MEM＋20% FBS＋1% P/S +1%NEAA】

2、培养环境：37℃、5%CO2

3、传代培养：当细胞密度达到 80%以上时，可以进行传代，传代比例 1:2~1:4，3~5 天传代一次。

（1）用巴氏滴管吸出细胞培养瓶内的培养基；

（2）加入 1ml 的 PBS，轻轻晃动润洗细胞，然后将 PBS 吸出；

（3）加入 2ml 的胰酶，轻轻晃动浸润细胞，然后放在培养箱内消化消化 3~5 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间）；

（4）在显微镜下观察，发现细胞变圆，轻轻晃动细胞便开始脱落，这时可以终止消化；

（5）加入 4ml 含血清的完全培养基，用移液器吹打细胞，使细胞脱落并形成单细胞悬液；

（6）将细胞悬液转移到 15ml 的离心管，1000rpm 离心 5min；

（7）离心完成后吸出上清丢弃，再用移液管取 10ml 完全培养基将细胞重悬，轻轻吹打混匀；

（8）将细胞悬液分装到两个新的 T25 细胞培养瓶中，放在 37℃的 CO2培养箱中进行培养。传代后细胞贴壁较慢，48h 内不要换液；细胞形态不均一，有一些含有液泡的巨大细胞， 属正常现象。

4、细胞冻存：使用本公司无血清冻存液可直接将细胞冻存在-80℃（无需使用程序降温盒），细胞在-80℃可保存 3 年，长期保存建议使用液氮罐。

5、冷冻复苏细胞：将含有 1mL 细胞冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 6cm 皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

三、质量检测

1、STR 鉴定：正确

2、细菌检测：阴性

3、支原体检测：阴性

四、售后服务

1、收到细胞后请及时查看瓶身有无破损，是否漏液等现象；

2、用 75%的酒精喷洒培养瓶之后，放在培养箱中静置 2-4 小时以稳定细胞状态，然后用显微镜观察细胞状态并拍照记录，40 倍和 100 倍照片各一张（细胞在运输过程中存在少量的漂浮或者死亡属于正常现象）；

3、原瓶中的培养基在细胞传代之后不建议继续使用，请配制新的完全培养基或者购买本公司的专用培养基；

4、建议定期对细胞进行拍照记录；收到细胞后 7 天内，对细胞生长状态有任何问题，可申请售后。

5、强烈建议：在第一次细胞传代时，使用附赠或者购买本公司配置的细胞培养瓶将细胞按照 1:2 进行传代，可以对比测试自配的培养基是否可以养好细胞。如果有以上任何问题，请及时联系本公司。

五、注意事项

1、细胞贴壁慢特别是刚复苏时，一般两到三天贴壁展开，会有空泡；

2、细胞在传代细胞中注意消散，不然难贴壁；

3、成团生长，细胞密度越大，表面空泡黑点越多；

4、一般细胞长至80%传代，细胞成片，其实密度很大；

5、细胞生长太满对细胞状态影响严重，传代后易碎，死亡；

6、细胞生长时间越久，消化难度也会随之增加；消化到轻拍培养瓶侧边细胞可以滑落的时候可以终止。

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