青枯假单胞菌——用途为柠檬桉青枯病病源菌

                  青枯假单胞菌——用途为柠檬桉青枯病病源菌

一、菌种简介

青枯假单胞菌（Pseudomonas solanacearum）或称青枯菌，是引起许多重要经济作物如烟草、花生、番茄等植物的萎焉病。主要通过土壤传染病害,它的寄主范围很广泛,有33科100多个种,危害茄科植物为最多。

二、产品信息

平台编号：Bio-51821

规格：冻干物

拉丁属名：Pseudomonas Solanacearum

菌株名称：青枯假单胞菌

别名：青枯菌

所属学科：微生物学

其他编号：M1.10

培养基编号：151

培养温度：32℃

用途：柠檬桉青枯病病源菌

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

三、实验内容

1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2、干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3、高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4、过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

四、微生物的培养方法，包括以下步骤

（1）前期准备：（A）灭菌处理；（B）制备Biolite水；（C）检查设备和材料；

（2）按比例配制培养材料；

（3）导入曝气，进行繁殖培养；

（4）取液观察；（a）取液；（b）稀释菌液；（c）平板培养；

（5）分离并检测；

（6）取液储存；通过该综合微生物培养方法简单可操作性强，培养的综合微生物均在3代以内，菌类稳定不发生突变，且繁殖快速。

五、仪器设备与器具

1、恒温培养箱：36±1℃。

2、1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。

3、接种针。

4、显微镜。

5、超净工作台。

6、玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。

7、天平：感量0.01g。

8、灭菌釜。

9、培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。

10、试管夹、酒精灯、秒表、载玻片

六、保藏方法

1、传代培养保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4-6℃冰箱内保存。

2、液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3、载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4、寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5、冷冻保藏法

可分低温冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6、冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

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