放线共生放线杆菌PCR试剂盒的实验操作及应用！ 一、背景 放线共生放线杆菌PCR试剂盒是一种用于检测放线共生放线杆菌的分子生物学试剂。该试剂盒通常包含用于扩增特定DNA片段的引物、DNA聚合酶以及其他的必需试剂，能够在PCR仪中运行，对特定的DNA序列进行快速、灵敏的检测。 二、放线共生放线杆菌PCR试剂盒实验操作 1、放线共生放线杆菌PCR试剂盒模板制备（样本制备区） 建议使用配套水生动物病害基因组DNA/RNA提取试剂盒系列产品，具体过程详见产品说明书。 2、添加模板（模板添加区，放置于冰盒中进行） 请于-20℃条件下保存，有效期12个月 取出所需测试数的已含有反应液A-TSV-I的PCR管，将试剂完全解冻，离心30秒，在管盖上标记管名（阴性对照管NG、样品XX、阳性对照管PG）。打开管盖向各管管底分别加入0.8μL B-I及0.2μL R-I，盖上阴性对照管管盖，其他各管分别沿管壁加入2μL模板，顺序为待测样品模板、PG-TSV-I，依次盖好各管管盖，离心30秒，立即进行扩增反应。 3、放线共生放线杆菌PCR试剂盒扩增反应（扩增及产物分析区） ①恒温仪器63℃条件下反应60 min。待仪器升温至63℃后，新建程序，设置实验名称及反应时间，将步骤2中离心后的PCR反应管放入恒温荧光分子检测仪，点击开始检测。 ②若使用荧光定量PCR仪，则荧光基团选择FAM，淬灭基团选择None，将63℃15 s，63℃45 s作为一个循环，于63℃45 s处收集荧光信号，60个循环。 其他仪器请参照仪器说明书进行设置。 4、设置qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行） 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。 5、数据处理 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。 三、应用 放线共生放线杆菌PCR试剂盒可以用于牙周病原菌在牙周病人龈下菌斑中的分布研究： 牙周病原菌在牙周病人银下菌斑中的分布研究目的应用聚合酶链式反应分别检测牙周病人酿下菌斑中的10种牙周病原菌，观察其分布特点，并初步分析不同的细菌组合与牙周病的关系。 材料与方法：使用放线共生放线杆菌PCR试剂盒将聚合酶链式反应扩增出牙酿叶琳菌部分165 rRNA基因片段的实验方法推广致更多的牙周病病原菌。根据各自特异区的165 rRNA基因(165 rDNA)序列，分别合成10种牙周病病原菌:牙跟叶琳菌(Pg)，福塞类杆菌(Bf)，中间型普里沃菌(Pi)，齿垢密螺旋体(Td)，变黑普里沃菌(Pn)，直型弯曲杆菌(Cr)，溶蚀艾肯菌(Ec)，放线共生放线杆菌(Aa)，黄褐二氧化碳噬纤维菌(C。)，生痰二氧化碳噬纤维菌(CS)的特异引物，然后随机选择62位患者，其中牙周健康者16例，慢性边缘性牙跟炎患者17例，慢性牙周炎患者29例，每例选两个位点，分别取两份跟下菌斑标本，共124份样本。 同时记录各的一般情况：年龄，性别，吸烟情况和各项临床指标:探查袋深，探诊出血情况等，牙周炎患者同时记录附着水平。提取菌斑中的DNA，分别用10对特异引物，TaqDNA聚合酶等以及放线共生放线杆菌PCR试剂盒在适宜的条件和温度下进行聚合酶链式反应，反应产物在加入0.sug/m1澳化已锭(EB)的1.50rk琼脂糖凝胶中电泳，紫外透射仪下进行观察，采用DLZ000 DNA marker记录电泳DNA片段大小，检测是否出现与特异引物相对应的特异扩增带，以鉴定细菌种类。用统计软件分析细菌与一般情况与各项临床指标的关系。 结果：10种牙军医进修学院硕士学位论文周病病原菌在各组中都有检出，其中跟炎组牙跟叶琳菌(Pg)，中间型普里沃菌(pi)和齿垢密螺旋体(Td)的检出率高于健康组;牙周病组牙龋叶琳菌(Pg)，福塞类杆菌(Bf)，中间型普里沃菌(Pi)，齿垢密螺旋体(Td)，变黑普里沃菌(Pn)和黄褐二氧化碳噬纤维菌(Co)的检出率高于健康组;牙周病组的中间型普里沃菌(Pi)，齿垢密螺旋体(Td)和变黑普里沃菌(Pn)高于龋炎组。 随年龄增大，齿垢密螺旋体(Td)的检出率增加;女性龋下菌斑中的牙跟叶琳菌(Pg)检出率多于男性;不吸烟者患者中检出较多的牙龋叶琳菌(Pg)。中间型普里沃菌(Pi)、齿垢密螺旋体(Td)和变黑普里沃菌(Pn)与牙周病关系更为密切。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                      人卵巢癌细胞的复苏与传代及冻存实验步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-129471规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：OVISE细胞名称：人卵巢癌细胞OVISE产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2细胞数量：1x10^6；1x10^6保存温度：37℃；-198℃运输方式：常温保温运输；干冰运输安全等级：1用途限制：仅供科研2类培养体系：DMEM高糖培养基+10%FBS+1%三抗培养温度：37℃二氧化碳浓度：5%简介：人卵巢癌细胞OVISE取自40岁女性供体，该细胞源于JCRB。用途：细胞系注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀 。3、操作离心 ， 调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀 ，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37℃培养箱静置培养。5、次日更换一次培养液，继续培养。6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中 三、细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中 ，愈合度达到 80% ，可进行传代。2、按 T25 培养瓶计 ，吸出完全培养基 ，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消 化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。 1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。 四、细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管实验步骤：1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。 五、细胞冻存操作说明实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，离心机实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管 ，冻存管 ，记号笔实验步骤：1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞 ，则可直接离心收集细胞。2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      粪肠球菌揭密——提升养殖效益的秘密武器！ 粪肠球菌在养殖业中广泛应用，其作为一种益生菌，具有多项重要功能。通过添加粪肠球菌作为饲料添加剂，可以调节动物消化道微生态平衡，促进饲料消化吸收，改善养殖动物的健康状况。 1、消化道调理剂 粪肠球菌可以作为饵料添加剂用于养殖动物的饲养中。粪肠球菌能够在消化道内定植，改善消化道菌群的平衡，促进有益菌的生长，抑制有害菌的繁殖。它们还能分解纤维素和淀粉等复杂碳水化合物，提高养殖动物对饲料的消化吸收能力。 2、免疫调节剂 粪肠球菌能够增强养殖动物的免疫力。它们通过刺激免疫系统的活性，增加免疫细胞的数量和活性，促进抗体的产生，提高养殖动物的抵抗力和免疫功能。这有助于减少养殖动物的感染和疾病发生率。 3、抗应激剂 养殖动物在环境变化、运输、疾病等应激条件下容易出现生长受阻和免疫压力增加等问题。粪肠球菌可以作为一种抗应激剂应用于养殖中，通过调节养殖动物的应激响应，减轻应激对养殖动物健康和生长性能的不利影响。 4、水体调理剂 粪肠球菌可以用于改善水体环境，特别是在养殖池和塘中。它们能够降解底泥中的有机物，减少水体氨氮、硫化氢等有害物质的积累，提高水质的稳定性。此外，粪肠球菌还能够抑制水中的有害细菌和藻类的生长，防止水体富营养化和蓝藻水华的发生。 5、母仔动物健康保护 粪肠球菌被广泛应用于母仔动物的保护中。在猪场等养殖场中，给母猪和仔猪补充粪肠球菌可以改善母猪的乳汁质量，增强仔猪的免疫力，降低仔猪的死亡率。粪肠球菌还可以帮助母猪更好地发挥繁殖潜能，提高产仔量和生产效益。 6、水产品质量保证 粪肠球菌可以用于提高水产品的质量和安全性。在水产养殖中，添加粪肠球菌可以减少水产动物的粪便中的有害菌的数量，降低水产品的致病风险。同时，粪肠球菌还能够分解水中的有机废弃物，提高水产品的味道和口感。 7、畜禽粪便处理剂 畜禽养殖中产生大量的粪便污染问题，容易导致环境污染和传染病传播。粪肠球菌可以作为一种处理剂，应用于畜禽粪便的处理过程中。粪肠球菌能够快速降解粪便中的有机物，减少臭味的产生，降低粪便的氨氮含量，改善环境卫生状况。 8、养殖环境微生态调节 粪肠球菌可以调节养殖环境的微生态平衡。通过有益菌的添加，粪肠球菌可以抑制有害菌的生长，增加有益菌的数量，确保养殖环境中微生物群体的平衡，并减少养殖动物的疾病感染。 综上所述，粪肠球菌在养殖业中的应用十分广泛且有益。通过调节消化道微生态平衡，提高饲料的消化吸收效率，增强动物免疫力和抗病能力，粪肠球菌能够改善养殖动物的健康状况，减少疾病风险。同时，它们在水体调理、畜禽粪便处理和环境微生态调节方面也发挥着重要作用，提高水质稳定性，减少环境污染，并促进养殖业的可持续发展。因此，粪肠球菌的应用对于优化养殖环境、提高产出质量、增加经济效益具有重要意义。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  利用巨大芽孢杆菌提升农业可持续性的新途径！ 巨大芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤中的细菌，具有令人惊叹的农业应用潜力。它的独特特性和功能使其被广泛应用于农业领域的生产和可持续发展。 1、巨大芽孢杆菌在农业生物技术中发挥着重要作用 由于其高效的产孢能力和抗逆性，巨大芽孢杆菌被用作生物农药的生产菌株。它能够制造各种有益的代谢产物，如杀虫剂、杀菌剂和植物生长促进剂，帮助农民减少化学农药的使用，实现绿色农业的目标。 2、巨大芽孢杆菌被用作一种有益的土壤改良剂 它能够分解有机物质并提供植物所需的营养元素，改善土壤的质地和结构。巨大芽孢杆菌的活性代谢产物还可以促进作物的生长和抗逆能力，提高作物产量和品质。 3、巨大芽孢杆菌具有环境修复的潜力 它能够降解土壤中的有机污染物和重金属，减轻环境污染对作物生长的影响。同时，它通过生物固氮作用将空气中的氮转化为可供作物利用的氮源，实现了氮肥的有效利用和环境友好的农业发展。 4、巨大芽孢杆菌被应用于生物肥料的生产 它具有固氮能力，可以将空气中的氮气转化为植物可利用的氮源，进而满足植物的氮营养需求。这有助于减少对化学合成氮肥的依赖，降低农业生产对化石燃料的能源需求，并减少氮肥对土壤和水体环境的负面影响。 5、巨大芽孢杆菌用于农作物的种子处理 通过在种子表面形成生物膜，它可以提供一种保护层，抵御病原菌和有害微生物的入侵。此外，巨大芽孢杆菌还能够激活植物的防御机制，增强植物对逆境、病虫害等的抵抗能力，提高农作物的生长质量和抗性。 6、巨大芽孢杆菌被研究用于生物除草剂的开发 通过特定菌株和代谢产物的筛选和优化，可以实现对多种杂草的有针对性的控制，从而减少对化学除草剂的使用，降低对环境和生态系统的负面影响。 巨大芽孢杆菌作为一种多功能的细菌，在农业中具有广泛的应用前景。它的应用可以减少化学农药的使用、改良土壤和提高作物产量、降低对化学农药和肥料的依赖、保护环境和生态系统、促进环境修复等，为农业的可持续发展提供了有力的支持。随着对巨大芽孢杆菌的深入研究和应用，我们相信它将在农业领域发挥越来越重要的作用，为打造绿色、高效的农业产业链做出积极贡献。 微生物菌种查询网在满足的不同企业的需要方面，站在了专业标准的前沿，有技术的支撑，有专业品质保证的可靠性标准，同时在整体的信息权威与市场相关服务配套方面，满足不同需求的客户，放心进行选择的需要。ATCC菌种有资源的界定，在工业企业中应用，对于相关的管理标准与技术性要求，也同样有较高专业的特色，所以从根本上来说，要保证有更可靠的实用意义，还必须要考虑的重点，就在于拥有专业权威的基础，可以带给实践菌种服务于生产很好的基础。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   青霉素酶制备培养基的知识与应用及使用方法！ 一、背景 青霉素酶制备培养基用于培养高产青霉素酶蜡状芽孢杆菌的专用培养基，主要用于高产青霉素酶蜡状芽孢杆菌的选择培养和青霉素酶发酵制备。 二、用法 称取本品31.9g,另取甘油50g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装于500ml锥形瓶内,每瓶80ml,115℃高压灭菌30分钟,备用。 青霉素酶又称β-内酰胺酶（β-lactamase，EC 3.5.2.6），可水解β-内酰胺类抗生素。 它采用基因重组技术构建了β-内酰胺酶高效表达菌株，通过色谱层析技术获得重组β-内酰酶（TEM1），具有纯度高、活性高、专一性强等特点。本品可以有效的分解β-内酰胺类抗生素，包括青霉素G；氨基青霉素类，如氨苄西林、阿莫西林、匹氨西林；羧基青霉素类，如羧苄西林、替卡西林等；及脲基青霉素类，如呋苄西林、美洛西林等。 青霉素酶是一种作用于青霉素的β-内酰胺环，使青霉素变成无抗菌活性的青霉酮酸的酶。多种青霉素耐药细菌能产生此酶。如金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的青霉素耐药菌株和蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)的青霉素耐药株等。 青霉素酶是一种医疗用酶，适用于治疗一般青霉素的过敏反应，也可用于过敏性休克或严重青霉素过敏反应症患者的辅助治疗。蜡状芽孢杆菌可作为此酶的生产菌种。 三、应用 用于青霉素酶的制备及研究应用研究： β-内酰胺酶是一类能水解β-内酰胺类抗生素的水解酶,目前已发现200多种。根据β-内酰胺酶的结构和水解产物不同,被分为A、B、C、D四类,其中青霉素酶属于β-内酰胺酶的A类。 该酶的主要特点是可以水解青霉素、头孢菌素、肟类β-内酰胺、氯唑西林、羧苄西林和碳青霉烯类等抗生素,其活性可被克拉维酸所抑制。 目前青霉素酶主要应用于抗生素药物的无菌检验,也有用于青霉素酶生物传感器以及以青霉素酶为标记的ELISA的报道,但都属于试剂级产品,尚无工业级产品及应用的报道。 本研究主要成果如下: （1）以蜡状芽孢杆菌kd-01为出发菌株,经紫外诱变和指示菌生长谱法筛选,得到一株高产青霉素酶的菌株,命名为kd-02,使发酵单位由1 035 000U/mL提高到3 016000U/mL,提高了291.4%。 （2）经发酵工艺再次优化,在10%种子接种量,30℃摇瓶发酵温度,初始发酵溶液pH7.0～7.2,装料比为50mL/250mL进行发酵,230 r/min的条件下,发酵单位平均为7 500 000U/mL,最高达7 588 000U/mL。 （3）研究了无菌酶制剂的制备工艺,发酵酶液经0.22μm膜精滤达到了无菌要求,其过滤收率为92.3%。 （4）研究了酶制剂的稳定性,25℃以下保存1个月,其酶活稳定在92%以上。 （5）研究了上述无菌酶制剂在青霉素菌渣无害化处理中的应用,针对某公司提供的菌渣其平均残留为2 179 U/g,约为1.3 mg/g。在青霉素酶活与青霉素效价比为3:1的条件下,37℃,1h可以完全去除其中的青霉素。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   A101D 人黑色素瘤贴壁细胞系的特点与应用！ 一、背景 A101D人黑色素瘤贴壁细胞系是一种来源于人类黑色素瘤的贴壁细胞系。这种细胞系是通过将人类黑色素瘤组织移植到裸鼠体内，然后从移植瘤中分离出的一种细胞系。 二、A101D人黑色素瘤贴壁细胞系具有以下特点 贴壁生长：该细胞系在培养基上能够贴壁生长，形成单层或多层的细胞集落。 高增殖能力：该细胞系具有较高的增殖能力，可以在短时间内快速扩增。 表达多种肿瘤相关基因：该细胞系表达多种与黑色素瘤相关的基因，如MITF、TYR、MC1R等。 对药物敏感性较高：该细胞系对某些化疗药物和靶向药物具有较高的敏感性，可以用于药物筛选和治疗策略的研究。 三、A101D人黑色素瘤贴壁细胞系培养步骤 1）复苏A101D人黑色素瘤贴壁细胞系细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2）A101D人黑色素瘤贴壁细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。 3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。 3）A101D人黑色素瘤贴壁细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。 四、应用 A101D人黑色素瘤贴壁细胞系可以用于光动力治疗对黑色素瘤细胞侵袭、增殖能力的影响及其机制研究： 以小鼠黑色素瘤细胞B16-F10和A101D人黑色素瘤贴壁细胞系进行研究,研究5-ALA-PDT对黑色素瘤细胞系迁移和侵袭能力的影响及其机制,同时也探查了光敏剂5-ALA促进PDT从而影响黑色素瘤细胞的增殖的相关机制,为光动力治疗黑色素瘤提供理论依据和数据支持。 ALA-PDT抑制A101D人黑色素瘤贴壁细胞系和B16-F10(鼠)迁移和侵袭及其机制研究：1、ALA-PDT抑制黑色素瘤细胞A375和B16-F10体外迁移和侵袭能力:利用细胞划痕实验检测黑色素瘤细胞迁移能力时发现,2.4J、4.8J ALA-PDT分别处理B16-F10和A101D人黑色素瘤贴壁细胞系12h及24h后的迁移率相比较空白对照组明显降低(p 同时利用Transwell小室实验检测黑色素瘤细胞侵袭能力, 结果显示：2.4J、4.8J ALA-PDT处理24h后,B16-F10和A101D人黑色素瘤贴壁细胞系通过Matrigel基质胶的细胞数量少于空白对照组A375细胞侵袭数目(p 2、4J、4.8J ALA-PDT分别处理B16-F10和A375细胞12h及24h后对两种细胞自分泌炎症因子IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α、TGF-βm RNA水平进行染料q-PCR检测,发现在光动力治疗能量及时间对两种细胞系炎症因子分泌的影响都呈现一定剂量依赖的关系,但仅TGF-βm RNA水平在两株细胞内均有不同程度下调(P ALA-PDT处理后,A375、B16-F10自分泌炎症因子蛋白的下调:2.4J、4.8J ALA-PDT分别处理B16-F10和A375细胞12h及24h后对A375、B16-F10自分泌炎症因子IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α、TGF-β蛋白水平进行ELISA检测,与mRNA定量检测结果一致,光动力治疗能量及时间对两种细胞分泌到胞外炎症因子的水平的影响同样呈现一定剂量依赖的关系,仅TGF-β有不同程度下调(P 外源性添加TGF-β逆转了PDT对A375、B16-F10迁移和侵袭的能力的抑制:回补10ng/ml TGF-β进行反向验证,分组为:空白对照组、TGF-β组、4.8J PDT组,4.8J PDT+TGF-β组,使用细胞划痕实验检测,结果发现回补TGF-β逆转PDT对A375、B16-F10迁移能力的抑制(P 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 志贺氏菌的背景与概述及制备与检测方法有哪些？ 一、背景及概述 志贺氏菌(Shigella)是目前致肠道感染的主要病原菌之一，属于肠杆菌科的志贺氏菌(Shigella)属，又称痢疾杆菌，为革兰氏阴性杆菌，需氧或兼性厌氧。人类对痢疾杆菌有很高的易感性，幼儿可引起急性中毒，死亡率甚高。临床上通常表现腹部痉挛痛、腹泻和发热，患者将不能从事饮食业、炊事及保育等工作。志贺氏菌在不卫生和人口密集的条件下可迅速传播，如餐厅、食堂。据统计，每年全球感染志贺氏菌的人数高达2 亿，其中95％的致死发生在发展中国家。尽管我国尚未建立完善的食源性致病菌报告和检测机制，每年仅记录的志贺氏菌感染就高达40万，仅次于肝炎和结核。 二、制备方法  一种志贺氏菌培养方法，包括如下步骤： 将硝酸纤维素膜用志贺氏菌抗血清处理一次以上，晾干后再用质量百分数为1％～1.5％的硫代硫酸钠处理，晾干，得到含志贺氏菌抗血清和硫代硫酸钠的硝酸纤维素膜；将所述含志贺氏菌抗血清和硫代硫酸钠的硝酸纤维素膜加入至 含志贺氏菌的悬浮液中，于36.8～37.2℃条件下放置30～35分钟，得到含志贺氏菌的硝酸纤维素膜；将所述含志贺氏菌的硝酸纤维素膜用磷酸缓冲液洗涤；将所述用磷酸盐缓冲液洗涤后的硝酸纤维素膜涂板于培养基，在 36.8～37.2℃条件下培养18～24小时。 本发明志贺氏菌培养方法，通过使用含志贺氏菌抗血清和硫代硫 酸钠的硝酸纤维素膜，根据抗原抗体反应的特异性，硝酸纤维素膜中 志贺氏菌抗血清与样本中的志贺氏菌特异结合，硫代硫酸钠能防止其 他的细菌在膜条上的生长，通过洗涤将其他细菌洗脱，将吸附有较纯浓度志贺氏菌的硝酸纤维素膜条接种于培养基并进行培养，减少了其他细菌，特别是侵袭性大肠菌落对志贺氏菌菌落的影响，保证样本中低浓度志贺氏菌不出现漏检，从而提高志贺菌的检出率。 三、检测方法 （一）检测试剂盒 CN201710552746提供一种用于志贺氏菌的检测试剂盒、检测方法及应用。 采用了如下的技术方案：一种用于志贺氏菌的检测试剂盒，所述检测试剂盒用于实时荧光RPA检测志贺氏菌，以志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因作为靶基因，根据其保守序列设计有一对引物和一条探针，其中，所述的一对引物和一条探针的序列如下所示： 上游引物：5'-CTGCATGGCTGGAAAAACTCAGTGCCTCTG-3' 下游引物：5'-GTTCTGACTTTATCCCGGGCAATGTCCTCC-3' 探针：5'-CCATCAGGCATCTGAAGGCCTTTTCGA-FAM-dT-THF-A-BHQ1 -dT- GATACCGGCGCTCTGCTC-C3-3'。 本发明还提供一种用于志贺氏菌的检测方法，所述检测方法为实时荧光RPA方法，所述检测方法至少包括以下步骤：步骤1、从待测样品中提取基因组DNA；步骤2、采用上述用于志贺氏菌的检测试剂盒对步骤1所提取的所述DNA进行等温 扩增反应；其中，所述等温扩增反应的温度为37-39℃，时间为20-30min；步骤3、通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在志贺氏菌。本研究以志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)作为靶基因，根据其保守序列设 计特异性引物及exo探针，建立了用于食品中志贺氏菌快速检测的real-time RPA方法。 相对于现有技术，本发明提供的用于志贺氏菌检测的实时荧光RPA方法的建立，具有以下优势： (1)操作简便，仅需增菌提取核酸后即可上机检测，所有试剂均以冻干粉的形 式保存在反应管中； (2)反应时间短，不需要热变性，20min内即可完成； (3)反应结果可直接 观察，无需电泳检测； (4)便携式荧光检测设备的使用。 本方法中使用的Genie III等温扩增荧光检测系统紧凑小巧，轻便耐用，仅为1.75kg左右，触摸屏操作，无需连接电脑，其内置长航时锂电池，可在无电源环境中全天户外工作，可用于微生物性食品中毒事件原因的现场检测。进一步地，本发明还提供所述的检测试剂盒或检测方法在志贺氏菌检测技术领域的应用。本研究中运用建立的real-time RPA方法，对人工污染志贺氏菌的不同样品进行检测，当样品污染量为46CFU/25g、增菌6h时，鸡肉中可检出志贺氏菌。 （二）快速检测 一种快速检测志贺氏菌的方法，包括以下步骤： 1)纳米微球的制备： a.添加0.4-0.8mmolFeCl3·6H2O和0.2-1.6mmol FeCl2·4H2O到100mL的去离子水中，向溶液中通入氮气并加热到80-120℃，然后将3-7mL 25％的NH3·H2O添加到混合液中， 反应2h；用永磁铁从反应溶液中分离出黑色的固体物质用高纯水清洗3～5次，得Fe3O4纳米粒子； b.取12mg Fe3O4纳米粒子用1-10mL去离子水和20mL乙醇的混合液重悬，先在缓慢 搅拌的条件下加入0.3-0.9mL的NH4OH溶液，再将10-300uL正硅酸乙酯溶解在50uL乙醇溶液 中逐滴加入，室温下反应12h，在Fe3O4纳米粒子表面形成一层二氧化硅，用去离子水溶液清洗几次，在乙醇溶液中复溶得到二氧化硅包覆的Fe3O4纳米粒子； c.把10-300uL的正硅酸乙酯，20mL无水乙醇，1-10mL去离子水和1mL 0.5-3mg/L的 啡啰啉联钌(Ru(bqy)32+)混合，将混合溶液加入0.5mL二氧化硅包覆的Fe3O4纳米粒子，最后 加入600-900μL的NH4OH，剧烈搅拌3h，得到Fe3O4/ Ru(bqy)32+纳米微球，用去离子水清洗备 用； d.将1mL的巯丙基三甲氧基硅烷添加到10mL的乙醇溶液中，用该混合物复溶Fe3O4/ Ru(bqy)32+纳米微球，在常温下300rpm搅拌12h后，再80℃300rpm搅拌1h，离心得到硅烷化的 Fe3O4/ Ru(bqy)32+纳米微球； e.将硅烷化的Fe3O4/ Ru(bqy)32+纳米微球添加到包含0.06g NaHCO3，0.08g十二烷 基苯磺酸钠，0.05mL苯乙烯，0.15mL丙烯酸和0.5g过硫酸钾溶液的50mL的水溶液，水浴70 ℃，200r/min下搅拌，反应5h后得羧基化的Fe3O4/ Ru(bqy)32+纳米微球； 2)取0.5-2mg羧基化的Fe3O4/ Ru(bqy)32+纳米微球加入1mL偶联缓冲液中，调节pH至 5-10，加入0.05-0.18mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDC)活化羧基，及100-400μg抗志贺氏菌单抗，在温度37℃时，放在10-15rpm的旋转仪上偶联60-120min，磁分离3-5min，弃上清；用清洗缓冲液冲洗3-5遍之后，取1mL封闭剂与纳米微球混合封闭0.5-1h，得到Fe3O4/ Ru(bqy)32+纳米微球-单抗； 所述偶联缓冲液配制方法如下：将3mL 19.07g/mL的硼砂与7mL 12.37g/mL的硼酸 混合后，稀释10倍体积； 所述清洗缓冲液配制方法如下：称取0.43g 2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)溶于200mL 的无菌蒸馏水中，调pH为5.5-6.0； 所述封闭剂配制方法如下：取100mg牛血清白蛋白(BSA)加入1mL磷酸盐(PBS)缓冲 液配成封闭剂； 3)培养志贺氏菌，将菌液调整浓度为106CFU/mL、105CFU/mL、104CFU/mL、103CFU/ mL，各取1mL备用；取待测样品溶液1mL、各浓度菌液1mL，分别与100-150μg Fe3O4/ Ru(bqy)32+纳米微球-单抗，于温度37℃，旋转仪转速10-15rpm混合孵育30-60min，孵育后磁分离3- 5min后，弃上清，用PBS缓冲液清洗后，复溶于PBS中得Fe3O4/ Ru(bqy)32+纳米微球-单抗-菌； 4)免疫层析试纸条的制备：将样本垫用pH 8.50.1M Tris-HCl缓冲液(1％BSA， 0.5％Tween-20)浸泡处理，置于60℃鼓风干燥箱，2h后取出备用；将志贺氏菌兔多抗和驴抗鼠二抗喷到硝酸纤维膜上分别作为检测线(T线)和质控线(C线)，浓度均为1-2mg/mL，喷量 均为0.75uL/cm，37℃真空干燥过夜取出置于干燥缸中备用；将过滤垫、样本垫、硝酸纤维 膜、吸水纸依次粘贴在PVC底板上，贴好后将其切成4mm宽的试纸条，装卡；将制备好的试纸 条装入铝箔袋中，加干燥剂密封，置于干燥缸中保存备用； 5)试纸条对样品的检测：将收集到的Fe3O4/ Ru(bqy)32+纳米微球-单抗-菌稀释到 50-150μg/mL，取100μL滴加到试纸条加样孔中，10-15min后，用荧光读取仪记录T线、C线荧光强度和T/C的值； 6)定性分析：用肉眼观察结果进行定性分析，T线显色则说明样品中有志贺氏菌，T线不显色则说明样品中没有志贺氏菌或是含有志贺氏菌的量低于103CFU/mL； 7)定量分析：使用荧光读取仪测量T线、C线的荧光强度，以及T/C值，以不同菌的浓度为横坐标，T/C值为纵坐标绘制标准曲线，确定普通样品中的志贺氏菌数量。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    SP2/0(小鼠骨髓瘤细胞)的应用及培养操作步骤！ 一、背景 SP20(小鼠骨髓瘤细胞)是一种小鼠骨髓瘤细胞系，它是由一名患有浆细胞瘤的小鼠中分离出来的。这种细胞系在肿瘤学研究中具有重要价值，因为它可以用于评估新的治疗方法和药物的有效性，以及研究浆细胞瘤的发生和发展机制。 SP20细胞系通常被用于体外实验模型，例如细胞培养、基因转染、蛋白质表达等技术。研究人员可以通过改变培养条件、添加生长因子或使用基因编辑技术来改变SP20细胞系的行为，以更好地模拟体内环境并提高治疗效果。此外，SP20细胞系还可以用于研究肿瘤微环境对肿瘤生长和转移的影响。 二、SP20(小鼠骨髓瘤细胞)培养操作 1)复苏SP20(小鼠骨髓瘤细胞)：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)SP20(小鼠骨髓瘤细胞)传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3)SP20(小鼠骨髓瘤细胞)冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 SP20(小鼠骨髓瘤细胞)可以用于大鼠有核红细胞（中幼、晚幼成红细胞）与小鼠浆细胞瘤（SP2/0）细胞杂交调控恶性表型及基因表达的研究： 本研究选用正常大鼠中幼、晚幼成红细胞与SP20(小鼠骨髓瘤细胞)细胞进行异种细胞杂交，研究哺乳动物红细胞胞质因子对肿瘤细胞恶性调控的效应及其机制。 1、通过哺乳动物成体骨髓及造血期胚肝的红系细胞终末分化过程的形态学观察，验证了正常情况下哺乳动物体内红系细胞发育到晚幼成红细胞阶段出现排核现象。用改良的Iscove甲基纤维素方法对动物骨髓红系祖细胞进行体外培养，对形成的红系集落细胞分化进行的形态学观察发现：(1)在低浓度红细胞生成素(Erythropoletin，简称EPO，下同)培养条件下，处于较晚发育期的红系祖细胞CFU-E可形成数十个细胞组成的集落；但集落之间，其细胞数量及发育的同步性有较大差异； (2)在高浓度EPO培养条件下，处于较早发育期的红系祖细胞BFU-E可形成数千个甚至上万个细胞组成的大集落，而且生长同步性较高；(3)在CFU-E及BFU-E的培养集落中均可观察到自然出现的核固缩及排核现象。上述体内、体外晚幼成红细胞排核现象，为红细胞自然排核学说以及薛杜普等提出的红系终末细胞中存在不利于细胞核增殖生长的“胞质因子”工作假说提出了有利的佐证。 2、利用Harrison分离骨髓血细胞方法，用40％至70％不连续Percoll介质梯度，从15天Wistar大鼠胚肝中分离中幼、晚幼成红细胞。从70％Percoll梯度介面，比重为1.095g／ml可收集到纯度高达96％的中幼、晚幼成红细胞。经(Giemsa-Wright血细胞染色，联苯胺染色以及透射电镜检查鉴定，除极少量早幼成红细胞和网织红细胞外，几乎没有其他类型细胞杂混。台盼兰活体染色检查表明：分离后的中幼、晚幼成红细胞保持95％以上的活性率。本方法操作简便，需时间少，分离后的细胞纯度及活性率都较高，可直接用作细胞生物学、生化等研究。 3、利用细胞杂交的细胞工程手段，首次系统地研究了大鼠中幼、晚幼成红细胞与SP20(小鼠骨髓瘤细胞)融合后恶性表型的表达状态，分析自然去核前红细胞胞质对骨髓瘤细胞恶性增殖的调控作用，以及晚幼期固缩核重新被激活的可能性。 实验结果表明：杂交细胞出现瘤细胞与网织红细胞杂交同样的表型逆转及去恶性化特征，主要表现在细胞体积增大、核质比例减小；DNA合同速率降低、分裂指数下降，细胞生长显著减慢；在软琼脂中不形成集落，在裸鼠体内失去了长瘤能力。超微结构分析表明，杂交细胞表面膜微绒毛、指状突及皱褶突等均明显减少，核内异染色质比例增高，核仁数目减少或消失，细胞质中常可见有空泡或黑色致密颗粒出现；少数杂交细胞出现线粒体肿胀、核固缩甚至排核现象。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  非发酵革兰阴性杆菌推测性鉴定的重要试验方法！ 1、麦康凯 在麦康凯平板上不生长的非发酵菌: 林肯莫拉菌、少动鞘氨醇单胞菌、类少动鞘氨醇单胞菌、水氏鞘氨醇杆菌、无色杆菌F群、高山巴丝菌、侵蚀艾肯菌、人心杆菌、链杆菌、二氧化碳纤维菌、伴放线菌、脲放线菌、产吲哚顿氏菌、米氏西蒙菌、甲基杆菌属、奥斯陆莫拉菌、啡液化莫拉菌、静止嗜冷杆菌、嗜温鞘氨醇杆菌、黏膜莫拉菌、腔隙莫拉菌、动物溃疡伯杰菌和敏捷食酸菌等。 2、触酶试验 触酶试验阴性的非发酵菌: 莫拉菌属、艾肯菌属、心杆菌属、二氧化碳嗜纤维菌属、长奈瑟球菌、米氏西蒙斯菌(S. muelleri) 、S. moniliformis。值得注意的是: 应在不含血的培养基上作触酶试验，区分待检菌触酶试验阳性或阴性。 3、硫化氢(TSI)试验 硫化氢试验阳性的非发酵菌: 海藻希瓦菌(H2 S 100 % 阳性)、腐败希瓦菌( H2 S 96%阳性) 、苍白杆菌属(H2 S 43 % 阳性)、COC halophilic 群I 和放射根瘤菌(H2 S 11 % 阳性)等。 4、吲哚试验 吲哚试验阳性的非发酵菌: 脑膜服毒金黄杆菌( C. meningosepticum) 、黏金黄杆菌(C. Bacteriumgleum) 、动物溃癌伯杰菌(B. zoohelcum) 、高山巴丝菌(B. alpica) 、产吲哚金黄杆菌(C. indologenes ) 、有毒威克斯(Weeksella virosa ) 、短稳杆菌(Empedobacter  breue) 和CDC群(IIb 、IIc 、IIe 、IIg 、IIh 、IIi) 等。 5、脲酶试验 快速分解脲酶的非发酵菌:支气管败血症鲍特菌( 4 h 产生红色阳性)和解脲寡源杆菌(几分钟内即呈阳性)等。 6、苯丙氨酸脱氨酶试验 苯丙氨酸脱氨酶阳性的非发酵菌:苍白杆菌属、腔隙莫拉菌、犬莫拉菌、奥斯陆莫拉菌、尿道寡源杆菌、解脲寡肃、杆菌、苯丙氨酸嗜冷杆菌和放射根瘤菌等。 7、气味 可初步鉴别细菌，如铜绿假单胞菌有生姜昧，产碱杆菌属有水果昧，腐败希瓦菌、恶臭假单胞菌、洋葱伯克霍德菌有腐败样气味。 8、色素 色素的产生有利于细菌的鉴别，不同的细菌可产生不同的色素，如: 产黄色色素的有脑膜服毒金黄杆菌、黠金黄杆菌、产呵|喋金黄杆菌、洋葱伯克霍德菌、唐富蒲伯克霍德菌、少动黯氨醇单胞菌、类少动黯氨醇单胞菌、浅黄假单胞菌、栖稻假单胞菌、嗜麦芽寡养单胞菌、德氏食酸菌、中等食酸菌、水氏鞘氨醇杆菌、多食鞘氨醇杆菌、嗜温黯氨醇杆菌、食神鞘氨醇杆菌等;产蓝绿色色素的有铜绿假单胞菌等;产荧光色素的有恶臭假单胞菌、荧光假单胞菌和铜绿假单胞菌等;产红棕色或淡紫色色素的有腐败希瓦菌等;产粉红色色素的有颈玫瑰单胞菌、甲基杆菌属、吉氏玫瑰单胞菌、费氏玫瑰单胞菌、玫瑰基因种4 、5 、6 等产紫色色素的有紫色杆菌等。 9、动力和硝酸盐试验 硝酸盐试验阴性( 0% ) 的无动力非发酵菌: 霍氏鲍特菌、副百日咳鲍特菌、林肯莫拉菌、尿道寡源杆菌、沃氏奈瑟菌、长奈瑟菌、水氏鞘氨醇杆菌、食神黯氨醇杆菌、脑膜服毒金黄杆菌和不动杆菌属(硝酸盐试验阴性94 % ) 等。 10、动力和氧化酶试验 11、动力、硝酸盐和氧化酶试验 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   荔枝炭疽病菌的病原特征与为害症状及防治方法！ 一、知识简介 荔枝炭疽是由盘长孢状刺盘孢或胶孢刺盘孢菌侵染所引起的、发生在荔枝上常见病害。可引起幼苗部分枯死结果树落花落果，直接影响荔枝的产量和品质。荔枝炭疽是荔枝的重要病害。主要为害嫩叶、花穗，尤其为害接近成熟或成熟的果实，造成大量落果，影响荔枝品质和产量。  荔枝炭疽病分布于中国广东、广西、福建的荔枝产区。荔枝炭疽病在多雨、潮湿的天气发生较重。果园管理不善、植株生长衰弱和种植密度过大，则发病较重。  荔枝炭疽病的防治方法以农业防治和化学防治为主。首先需要加强管理，保持树势健壮，增强抗病力。及时剪除枝梢、病果，适时清除落地病果集中深埋。再结合化学方法进行防治，修剪后及时喷20%龙克菌悬浮剂800倍液或40%多·硫悬浮剂500倍液预防。春梢期、花穗期全树喷25%炭特灵可湿性粉剂500倍液，或25%使百克乳油1200倍液，或50%施保功可湿性粉剂1500倍液，隔10天喷1次，连续2-3次。  二、病原特征 荔枝炭疽病病原有2种。为害叶片的是盘长孢状刺盘孢（Colletrichum litchi Trag.），又称荔枝炭疽菌，属半知菌亚门真菌。孢子盘为盘状，分生孢子椭圆形或圆柱形，单胞无色，有1个油点。为害果实的是胶孢刺盘孢菌（Colletotrichum gloeosporioides (Penz) Saec），孢子盘为盘状。分生孢子椭圆形或圆柱形单胞，无色，有1个油点。 胶孢刺盘孢菌：该菌菌丝生长的温度范围为8-38℃，最适28℃；产生分生孢子的温度范围为12-36℃，最适28-32℃；分生孢子萌发的温度范围为8-38℃，最适28-32℃。在pH3-10的范围内该菌均能生长和产孢，菌丝生长最适pH5-6；产生分生孢子最适pH3-4，分生孢子萌发最适pH6-7。分生孢子在饱和湿度或水滴中萌发快，相对湿度低于85%时不能萌发。光照处理对该菌生长发育无显著性影响。葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖对分生孢子萌发有促进作用。分生孢子的致死温度为50℃（10分钟），菌丝体的致死温度为60℃（30分钟）。  三、为害症状 1、枝干：枝梢染病，病部初呈灰褐色，病斑圆形或长椭圆形，后病斑中央稍凹陷，并散生许多小黑点，严重者整个枝梢枯死。 2、叶片：叶片染病初在叶上生圆形至不规则形浅褐色小斑，后逐渐扩展成深褐色大斑，边缘不清晰；也可在叶尖或叶缘处生褐色斑，后变成灰色斑块；后期病斑背面产生许多褐色或黑色小粒点。  3、果实：病初生直径2-5毫米的圆形炭疽斑，褐色，边缘棕褐色，常发生在柄端部，中央生橙红色戮质小粒，果肉变酸腐烂。 四、侵染循环 病原以分生孢子在病叶、枝梢及果实病斑上越冬，第2年春季遇适宜的温度或梅雨期湿度大时，病原孢子萌发，先侵入春梢及叶片，发病后在新病斑上又产生分生孢子，这时果园又逢修剪，加之环境、气候条件适宜，病原通过风雨或昆虫传播，孢子从修剪造成的伤口或虫伤侵入后，形成初侵染。 五、流行规律 荔枝炭疽病在多雨、潮湿的天气发生较重。果园管理不善、植株生长衰弱和种植密度过大，则发病较重。荔枝炭疽病始病期为4月中旬至5月上旬。4月下旬至5月中旬及5月下旬至6月中旬，24-28℃最适合其发病故形成春、夏梢期两次发病高峰。  六、防治方法 1、农业防治 加强管理：坚持正常的栽培管理工作，注意深耕改土，增施有机肥和磷钾肥，实行配方追肥，避免偏施氮肥，以增强树势，提高抗病力。保持树势健壮，增强抗病力。及时剪除枝梢、病果，适时清除落地病果集中深埋。  压低菌源：冬季结合修剪，剪除病叶枯梢，扫除地面的落叶病枝，并集中烧毁，减少菌源。 2、化学防治 在冬季清园后，结合防治其他病虫害，喷一次波美0.5-0.8度的石硫合剂。修剪后及时喷20%龙克菌悬浮剂800倍液或40%多·硫悬浮剂500倍液预防。春在各新梢的幼叶已展开但尚未转绿时、花蕾期、幼果5-10毫米大时用药。对历年发病较重的投产果园，在花蕾和幼果期，应喷药2-3次。可选用的农药品种：70％甲基托布津800-1000倍液，或40％多菌灵800-1000倍液，90％百菌清或50％退菌特或45％代森铵水剂500-600倍液，或1:1:200倍波尔多液，或77％可杀得可湿性粉剂600-800倍液等。  微生物菌种查询网在满足的不同企业的需要方面，站在了专业标准的前沿，有技术的支撑，有专业品质保证的可靠性标准，同时在整体的信息权威与市场相关服务配套方面，满足不同需求的客户，放心进行选择的需要。ATCC菌种有资源的界定，在工业企业中应用，对于相关的管理标准与技术性要求，也同样有较高专业的特色，所以从根本上来说，要保证有更可靠的实用意义，还必须要考虑的重点，就在于拥有专业权威的基础，可以带给实践菌种服务于生产很好的基础。

                 霜霉病菌的使用技术与方法及发病症状与防治措施！ 霜霉病指的是由真菌中的霜霉菌引起的植物病害。霜霉菌是专性寄生菌，极少数的霜霉菌已可人工培养，如引起谷子白发病的禾生指梗霉、引起白菜霜霉病的寄生霜霉。 一、基本信息中文名：霜霉病外文名：Downy mildew病症原因：由卵菌纲引起的植物病害病症：引起谷子白发病的禾生指梗霉等传播途径：通过气流、浇水、农事及昆虫传播防治方法：HILOT凯霜稀释600倍液喷施注意：类似病症白粉病，但由真菌引起 二、菌株分类引起谷子白发病的禾生指梗霉 （Sclerospora graminicola）、引起白菜霜霉病的寄生霜霉（Peronospora parasitica）。有的种存在不同的生理型，如引起莴苣霜霉病的莴苣盘梗霉（B.remiarlactucae）和引起黄瓜霜霉病的古巴假霜霉（Pseudoperonospora cubensis）。除上述几种外，还有甘蔗霜霉病、大豆霜霉病、葡萄霜霉病和黄瓜霜霉病。烟草霜霉病和黄瓜霜霉病等是毁灭性较大的病害。 三、病症状况此病从幼苗到收获各阶段均可发生，以成株受害较重。主要危害叶片，由基部向上部叶发展。发病初期在叶面形成浅黄色近圆形至多角形病斑，容易并发角斑病，空气潮湿时叶背产生霜状霉层，有时可蔓延到叶面。后期病斑枯死连片，呈黄褐色，严重时全部外叶枯黄死亡，类似黄萎病。传播途径和发病条件：病菌以菌丝在种子或秋冬季生菜上为害越冬，也可以卵孢子在病残体上越冬。主要通过气流、浇水、农事及昆虫传播。病菌孢子萌发温度为6～10℃ 适宜侵染温度15～17℃，田间种植过密、定植后浇水过早、过大、土壤湿度大、排水不良等容易发病。春未夏初或秋季连续阴雨天气最易发生，病害严重时可造成20%～40%产量损失。 四、侵染循环霜霉菌主要有2个类型：①局部性的侵染。产生点发性病斑，生长季中不断产生孢子囊频繁地再侵染，病害流行速度非常快。大多数霜霉病属这种类型。②系统侵染。卵孢子从植物的芽鞘侵入后，菌丝随寄主生长点侵入全株，引起全株性症状，病害流行速度较慢，如谷子白发病。霜霉菌以卵孢子在土壤中、病残体或种子上越冬（如谷子白发病），或以菌丝体潜伏在茎、芽（如葡萄霜霉病）或种子内越冬（如白菜霜霉病），成为次年病害的初侵染源，生长季由孢子囊进行再侵染。在中国南方温湿条件适宜的地区可周年进行侵染。霜霉菌主要靠气流或雨水传播，有的也可以靠介体昆虫或人为传播。 五、使用技术及方法（一）治疗方案轻微发病时，按照400-600倍液HILOT凯霜稀释喷雾，5-7天用药一次；病情较重时，按100-300倍喷施HILOT凯霜，3天用药一次，具体施药次数视病情而定。（二）施药时间尽量避开高温时间段，适宜温度20℃－30℃。（三）物理防治1、选用抗病良种。2、加强栽培管理，适当稀植，采用高畦栽培：浇小水，严禁大水漫灌，雨天注意防漏，有条件的地区采用滴灌技术可较好地控制病害。3、收获后彻底清除病残落叶，并带至棚、室外妥善处理。4、有条件优先应用粉尘剂或烟雾剂防治。发病初期适当控制浇水，保护地栽培注意增强通风，降低空气湿度。无病壮苗，增施有机底肥，注意氮、磷、钾肥合理搭配。收获后彻底清除病株落叶。 六、发病症状霜霉病一般先从下部叶片开始发病，发病初期产生淡绿色水渍状小点，病斑边缘不明显，后期发展为黄色不规则病斑，湿度大时叶背产生灰白色霉层，逐渐变为深灰色。棚室内干旱时病叶逐渐变黄、干枯，空气湿度大时发病叶片霉烂。 七、发生规律霜霉病菌为专性寄生菌，菠菜霜霉病菌只能侵染菠菜。病菌以卵孢子在病株残叶内或以菌丝在被害寄主和种子上越冬。翌春产生孢子囊，孢子囊成熟后借气流、雨水或田间操作传播，萌发时产生芽管或游动孢子，从寄主叶片的气孔或表皮细胞间隙侵入。在发病后期，霜霉病菌常在组织内产生卵孢子，随同病株残体在地上越冬，成为下一个生长季节的病菌初次侵染源。孢子囊的萌发适温为7~18℃。除温度外，高湿对病菌孢子囊的形成、萌发和侵入更为重要。在发病温度范围内，多雨多雾，空气潮湿或田间湿度高，种植过密，株行间通风透光差，均易诱发霜霉病。一般重茬地块、浇水量过大的棚室，该病发病重。 八、防治措施1、农业防治。一是重病田要实行2-3年轮作。施足腐熟的有机肥，提高植株抗病能力。二是合理密植，科学浇水，防止大水漫灌，以防病害随水流传播。加强放风，降低湿度。三是如发现被霜霉病菌侵染的病株，要及时拔除，带出田外烧毁或深埋，同时，撒施生石灰处理定植穴，防止病源扩散。收获时，彻底清除残株落叶，并将其带到田外深埋或烧毁。2、药剂防治。可以在发病初期用75%百菌清可湿性粉剂500倍液喷雾，发病较重时用58%甲霜·锰锌可湿性粉剂500倍液或69%烯酰·锰锌可湿性粉剂800倍液喷雾。隔7天喷一次，连续防治2~3次，可有效控制霜霉病的蔓延。同时，可结合喷洒叶面肥和植物生长调节剂进行防治，效果更佳。3、物理防治。病发前2周喷布200倍液高脂膜（乳剂），约10天喷一次，叶背叶面要周到。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 霜霉病菌的使用技术与方法及发病症状与防治措施！ 霜霉病指的是由真菌中的霜霉菌引起的植物病害。霜霉菌是专性寄生菌，极少数的霜霉菌已可人工培养，如引起谷子白发病的禾生指梗霉、引起白菜霜霉病的寄生霜霉。 一、基本信息中文名：霜霉病外文名：Downy mildew病症原因：由卵菌纲引起的植物病害病症：引起谷子白发病的禾生指梗霉等传播途径：通过气流、浇水、农事及昆虫传播防治方法：HILOT凯霜稀释600倍液喷施注意：类似病症白粉病，但由真菌引起 二、菌株分类引起谷子白发病的禾生指梗霉 （Sclerospora graminicola）、引起白菜霜霉病的寄生霜霉（Peronospora parasitica）。有的种存在不同的生理型，如引起莴苣霜霉病的莴苣盘梗霉（B.remiarlactucae）和引起黄瓜霜霉病的古巴假霜霉（Pseudoperonospora cubensis）。除上述几种外，还有甘蔗霜霉病、大豆霜霉病、葡萄霜霉病和黄瓜霜霉病。烟草霜霉病和黄瓜霜霉病等是毁灭性较大的病害。 三、病症状况此病从幼苗到收获各阶段均可发生，以成株受害较重。主要危害叶片，由基部向上部叶发展。发病初期在叶面形成浅黄色近圆形至多角形病斑，容易并发角斑病，空气潮湿时叶背产生霜状霉层，有时可蔓延到叶面。后期病斑枯死连片，呈黄褐色，严重时全部外叶枯黄死亡，类似黄萎病。传播途径和发病条件：病菌以菌丝在种子或秋冬季生菜上为害越冬，也可以卵孢子在病残体上越冬。主要通过气流、浇水、农事及昆虫传播。病菌孢子萌发温度为6～10℃ 适宜侵染温度15～17℃，田间种植过密、定植后浇水过早、过大、土壤湿度大、排水不良等容易发病。春未夏初或秋季连续阴雨天气最易发生，病害严重时可造成20%～40%产量损失。 四、侵染循环霜霉菌主要有2个类型：①局部性的侵染。产生点发性病斑，生长季中不断产生孢子囊频繁地再侵染，病害流行速度非常快。大多数霜霉病属这种类型。②系统侵染。卵孢子从植物的芽鞘侵入后，菌丝随寄主生长点侵入全株，引起全株性症状，病害流行速度较慢，如谷子白发病。霜霉菌以卵孢子在土壤中、病残体或种子上越冬（如谷子白发病），或以菌丝体潜伏在茎、芽（如葡萄霜霉病）或种子内越冬（如白菜霜霉病），成为次年病害的初侵染源，生长季由孢子囊进行再侵染。在中国南方温湿条件适宜的地区可周年进行侵染。霜霉菌主要靠气流或雨水传播，有的也可以靠介体昆虫或人为传播。 五、使用技术及方法（一）治疗方案轻微发病时，按照400-600倍液HILOT凯霜稀释喷雾，5-7天用药一次；病情较重时，按100-300倍喷施HILOT凯霜，3天用药一次，具体施药次数视病情而定。（二）施药时间尽量避开高温时间段，适宜温度20℃－30℃。（三）物理防治1、选用抗病良种。2、加强栽培管理，适当稀植，采用高畦栽培：浇小水，严禁大水漫灌，雨天注意防漏，有条件的地区采用滴灌技术可较好地控制病害。3、收获后彻底清除病残落叶，并带至棚、室外妥善处理。4、有条件优先应用粉尘剂或烟雾剂防治。发病初期适当控制浇水，保护地栽培注意增强通风，降低空气湿度。无病壮苗，增施有机底肥，注意氮、磷、钾肥合理搭配。收获后彻底清除病株落叶。 六、发病症状霜霉病一般先从下部叶片开始发病，发病初期产生淡绿色水渍状小点，病斑边缘不明显，后期发展为黄色不规则病斑，湿度大时叶背产生灰白色霉层，逐渐变为深灰色。棚室内干旱时病叶逐渐变黄、干枯，空气湿度大时发病叶片霉烂。 七、发生规律霜霉病菌为专性寄生菌，菠菜霜霉病菌只能侵染菠菜。病菌以卵孢子在病株残叶内或以菌丝在被害寄主和种子上越冬。翌春产生孢子囊，孢子囊成熟后借气流、雨水或田间操作传播，萌发时产生芽管或游动孢子，从寄主叶片的气孔或表皮细胞间隙侵入。在发病后期，霜霉病菌常在组织内产生卵孢子，随同病株残体在地上越冬，成为下一个生长季节的病菌初次侵染源。孢子囊的萌发适温为7~18℃。除温度外，高湿对病菌孢子囊的形成、萌发和侵入更为重要。在发病温度范围内，多雨多雾，空气潮湿或田间湿度高，种植过密，株行间通风透光差，均易诱发霜霉病。一般重茬地块、浇水量过大的棚室，该病发病重。 八、防治措施1、农业防治。一是重病田要实行2-3年轮作。施足腐熟的有机肥，提高植株抗病能力。二是合理密植，科学浇水，防止大水漫灌，以防病害随水流传播。加强放风，降低湿度。三是如发现被霜霉病菌侵染的病株，要及时拔除，带出田外烧毁或深埋，同时，撒施生石灰处理定植穴，防止病源扩散。收获时，彻底清除残株落叶，并将其带到田外深埋或烧毁。2、药剂防治。可以在发病初期用75%百菌清可湿性粉剂500倍液喷雾，发病较重时用58%甲霜·锰锌可湿性粉剂500倍液或69%烯酰·锰锌可湿性粉剂800倍液喷雾。隔7天喷一次，连续防治2~3次，可有效控制霜霉病的蔓延。同时，可结合喷洒叶面肥和植物生长调节剂进行防治，效果更佳。3、物理防治。病发前2周喷布200倍液高脂膜（乳剂），约10天喷一次，叶背叶面要周到。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   幼虫类芽孢杆菌的储存与培养及冻干管打管说明！ 一、菌种简介平台编号：Bio-02880提供形式：冻干物拉丁属名：Paenibacillus Larvae中文译名：幼虫类芽孢杆菌拉丁学名：Paenibacillus larvae原始编号：NBRC 15408菌株来源：←NBRC保藏人：周宇光直接来源国家：日本保藏时间：6/6/2004其他保藏编号：=ATCC 13537 =CIP 104990 =DSM 3615 =LMG 15974 =NRRL B-3685生物危害：四类模式菌株：非模式菌株菌株用途：模式菌株of Bacillus larvae subsp. pulvifaciens培养温度：30℃培养基：0002    分离源：死亡蜜蜂幼虫的粉状残留物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。  三、培养条件营养肉汁琼脂蛋白胨 10 克 NaCl 5 克蒸馏水 1L 牛肉膏 3 克琼脂 15 克 pH=7.0 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  利福霉素小单孢菌的培养与使用及实验操作步骤！ 利福霉素小单孢菌是Micromonospora属的微生物，原产地为中国。主要用途为分类学研究，具体用途为模式菌株；Produces rifamycin S。 一、菌种简介平台编号：Bio-03143提供形式：冻干物拉丁属名：Micromonospora Rifamycinica中文译名：利福霉素小单孢菌拉丁学名：Micromonospora rifamycinica原始编号：AM105菌株来源：←中国热带农业科学院热带生物技术研究所保藏人：黄惠岑直接来源国家：中国保藏时间：11/30/2005其他保藏编号：=DSM 44983 =JCM 15474生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株；Produces rifamycin S培养温度：28℃培养基：0038    分离源：红树林土壤采集地点：南海采集国家：中国用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征革兰氏阳性，不抗酸，好气或微好气。无真正的气丝，基丝发达，分枝，有隔。基丝上长单个孢子，有梗或无梗。孢子不游动。细胞壁含meso-二氨基庚二酸（或3-OH-二氨基庚二酸或微量L-二氨基庚二酸）和甘氨酸。主要的醌为MK-9（H4），MK-10（H6），MK-10（H4）或MK-12（H4，H6，H8）。 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯 菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、使用范围(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  解脂亚罗酵母的形态特征与注意事项及保藏方法！  解脂亚罗酵母是Yarrowia属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为用于石油脱蜡。 一、菌种简介平台编号：Bio-58050规格：冻干物拉丁属名：Yarrowia Lipolytica中文名称：解脂亚罗酵母属名：Yarrowia种名加词：lipolytica其它中心编号：=ATCC 20460来源历史：←美国ATCC收藏时间：1983.00.00资源归类编码：15151113135模式菌株：非模式菌株主要用途：研究    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：酵母膏 3.0g，麦芽浸膏 3.0g，蛋白胨 5.0g，葡萄糖 10.0g，琼脂 20.0g，蒸馏水 1.0L。培养温度：24℃资源保藏类型：培养物保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征化能异养；嗜温；趋酸；兼性厌氧。5Be′麦芽汁琼脂30℃培养3天，菌落圆形，米黄色，褶皱，边缘毛状，质干，5-7mm。细胞单个，卵形、腊肠形, 2.1-3.6×3.4-12µm。有真、假菌丝。无性繁殖方式为多边芽殖。不发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、D-半乳糖、海藻糖、棉子糖；不同化麦芽糖、蔗糖、D-半乳糖、海藻糖、D-松三糖、纤维二糖、D-木糖、阿东醇、D-山梨醇、棉子糖、蜜二糖、L-山梨糖、D-柳醇、硝酸钾。能分解脂肪。  三、培养基酵母菌培养基(Yeast Culture Medium)培养基成分酵母膏 3.0g，麦芽浸膏 3.0g，蛋白胨 5.0g，葡萄糖 10.0g，琼脂 20.0g，蒸馏水 1.0L。推荐使用商品化成品培养基。  四、保藏条件安瓿冻干和培养物菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存，甘油管请置于-80°C保存;请勿长期置于室温。  五、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 六、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   人眼脉络黑色素瘤细胞的培养操作步骤及应用！ 一、背景 人眼脉络黑色素瘤细胞分离自脉络膜黑色素瘤组织的贴壁多角形细胞样细胞，STR检测发现，三株人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞C918、M619和Mum-2B为同一遗传背景，怀疑存在交叉污染。 二、细胞培养操作步骤 1、人眼脉络黑色素瘤细胞培养基及培养冻存条件准备 1）准备DMEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）人眼脉络黑色素瘤细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）人眼脉络黑色素瘤细胞冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、人眼脉络黑色素瘤细胞处理： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）人眼脉络黑色素瘤细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法： 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 3）人眼脉络黑色素瘤细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 下面T25瓶为例； 1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml. 2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。 3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 三、应用 人眼脉络黑色素瘤细胞可以用于Butein通过线粒体途径诱导人葡萄膜黑色素瘤细胞凋亡： 探索Butein的细胞毒作用，研究在体外对人类葡萄膜黑色素细胞瘤可能的防止及治疗作用，并研究其对正常的人类巩膜成纤维细胞及视网膜色素上皮细胞的作用。Butein诱导葡萄膜黑色素瘤细胞生物学改变，线粒体膜电位的变化后释放细胞色素C，活化细胞凋亡蛋白酶9及3，通过这些研究阐明了Butein诱导黑色素细胞的信号通路。 1、方法三种人葡萄膜黑色素瘤细胞系(M17、SP6.5和人眼脉络黑色素瘤细胞)，视网膜色素上皮细胞及巩膜成纤维细胞与不同浓度的Butein培养，通过MTT评价Butein对细胞活力的影响，通过流式细胞仪分析细胞的凋亡，用JC-1酶标仪评价线粒体膜电位改变，酶联免疫吸附试验分析细胞凋亡蛋白3、8、9的改变。 2、结果Butein减少培养的人葡萄膜黑色素瘤的活性，呈剂量依赖效应(10、30、100μM)，SP6.5的半数抑制浓度IC50在13.3μM，M17在15.8μM，在转移的恶性人眼脉络黑色素瘤细胞有类似的剂量，为16.7μM，Butein在较低的浓度时选择性的抑制葡萄膜黑色素细胞的活性，而对视网膜色素上皮细胞及成纤维细胞作用较小，Butein通过增加线粒体膜通透性及增加细胞色素C及凋亡蛋白9、3（不通过凋亡蛋白8）活性诱导肿瘤细胞凋亡。 3、结论30μM Butein诱导培养的人葡萄膜黑色素细胞凋亡，所以即使都是通过同一通路引起凋亡，人葡萄膜黑色素瘤与鼠皮肤黑色素瘤细胞相比前者对Butein更加敏感。 本研究表明100-300μM Butein可以杀伤3种人葡萄膜黑色素细胞瘤细胞(M17、SP6.5和C918)。人眼脉络黑色素瘤细胞是转移性细胞系，也可被Butein抑制，表明即使是高度侵入性的葡萄膜黑色素瘤细胞系也对Butein敏感。10μM及30μMButein对正常的视网膜色素上皮细胞及巩膜成纤维细胞无影响，表明Butein对葡萄膜黑色素细胞的特殊抗肿瘤特性。用低浓度Butein培养细胞后，部分细胞被膜连蛋白染色，而不被EtD-III染色，提示存在早期的凋亡。用高浓度的Butein处理细胞后，大部分被膜连蛋白染色，一部分被EtD-III染色，提示凋亡已经处于晚期，细胞膜已经损坏。Butein损害了线粒体膜电位，增加了细胞色素C及凋亡蛋白酶9,3的表达，并呈剂量依赖性。而凋亡蛋白酶8没有明显改变。这表明Butein是通过线粒体途径引起葡萄膜黑色素细胞瘤凋亡。 总之，低浓度的Butein可以诱导人葡萄膜黑色素瘤细胞凋亡而对正常细胞影响较小，表明在体外Butein对人葡萄膜黑色素瘤是一个选择性的有效的细胞凋亡药物。因为转移的黑色素瘤细胞对于传统的化疗药物有很强的抗药性，而Butein对转移的人眼脉络黑色素瘤细胞具有杀伤作用，所以Butein可能有望成为具有转移的黑色素瘤细胞的治疗及防治药物，由于Butein的生物利用度及血浆浓度的研究刚刚起步，有必要进一步改变剂型及研究其与其他抗肿瘤药物的相互作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      毒蝇鹅膏菌的功效作用与临床症状及治疗方法！ 一、菌种简介毒蝇鹅膏菌，拉丁学名：[Amanita miscaria (L.: Fr.) Pers. ex Hook.]，又称哈蟆菌、捕蝇菌、毒蝇菌、毒蝇伞。子实体较大。菌盖宽6-20cm。边缘有明显的短条棱，表面鲜红色或桔红色，并有白色或稍带黄色的颗粒状鳞片。为典型的毒菇，有一个大的白色菌褶、白色斑点，通常是深红色的菇类，是最广为认识的蕈类，并且在大众文化中广泛出现。 二、知识概述毒蝇伞的毒性发作通常发生在吃下它的儿童或是成年人，并会导致幻觉。偶尔，未成熟的扣子体也会被当成可食用的马勃而误食。此外，在一场大雨之后，白色的斑点就会消失，变得和食用菇类橙盖鹅膏菌相似。毒蝇伞包含了一些生物的有效成分，至少有两种，蝇蕈素（muscimol）和鹅膏蕈氨酸（ibotenic acid），是已知的精神刺激物质。在成人当中，其毒性剂量为6毫克的蝇蕈素和30－60毫克鹅膏蕈氨酸，这是在大量采集毒蝇伞之后所测得的典型剂量。然而，每朵菇所含有的化学化合物比率会随着地区或季节而有很大的改变，因此对于每朵菇的剂量情形有所混淆和争议。报告指出，春季和夏季的毒蝇伞比起秋季的含有高达10倍的蝇蕈素和鹅膏蕈氨酸。致命剂量经计算后，大约为15朵。而毒蝇伞的致死案例，在历史上的期刊文章和新闻报导中被报导；许多早期的书籍将毒蝇伞错误地列成是会致死的菇类，导致出现了一想像：毒蝇伞的毒性，比实际上的还要强，但并非如此。北美真菌学会说明，在过去100年来，并没有可靠的文件说明致死率。大多数的蕈类毒性致死案件（90%或更多），主要是吃下微绿色到微黄色的毒鹅膏或是多种白色系列的鹅膏菌属蕈类之一，例如鳞柄鹅膏。毒蝇伞的毒性有效成分属于水溶性，只要将毒蝇伞加水煮沸，并且把煮过的水丢弃，就可以部份解毒。然而，把毒蝇伞干燥，会增加毒性，因为干燥会导致促进鹅膏蕈氨酸转换成更具毒性的蝇蕈素。根据一些资料来源，一旦解毒之后，毒蝇伞就会变得更可以食用。 三、症状毒蝇伞为人所知的，是对于吃进去后的影响有不可预测性。根据栖息地和每种体重的大量摄取结果，症状可以是有变化的，从恶心、痉挛，到倦睡、胆碱激素危机类症状（低血压、流汗与唾液过多分泌）、视觉和听觉的扭曲、情绪改变、兴奋、弛缓、协调失能和眩晕都有。有些案例当中，严重毒性还会导致妄想。 四、治疗如果碰上疑似的中毒症状，药物治疗方式应可以被找到。早期的治疗由胃消毒药剂组成。如果从吸收到被治疗的时间小于4小时，活性碳是适合的药剂。如果病人在摄取后1小时以内症状就存在，灌胃治疗可以被采用。和吐根糖浆一起引导呕吐，在任何中毒状况下，不再被推荐。在没有解毒剂之下，支持性疗法变成主要针对中毒的长远治疗法。 五、功能功效和致幻性菇类光盖伞属不同，毒蝇伞甚少作为养生食用的用途。然而，在英国宣布含有二甲-4-羟色胺磷酸（psilocybin）的菇类为非法之后，大量增加的合法毒蝇伞则可以贩卖和使用。在西伯利亚东部，萨满教僧侣使用毒蝇伞，其他的人则喝下僧侣们的尿液。而这种尿液，仍然含有有效的致幻物质，并且实际上可能比毒蝇伞的菇体（只有少许的负面影响）更有效，例如流汗和痉挛，促使原先的食用者可能对于毒蝇伞其它的化合物，产生像是大脑装了筛选过滤器的效果。在科里亚克地区里面，一份报道认为，贫穷人会食用这种有能力买到毒蝇伞的富裕人家尿液。 六、其他描述在西伯利亚以外，在毒蝇伞被拿来作迷幻用途的，只有独立和未经证实的描述。芬兰历史学家T. I. Itkonen叙述到萨米族曾经有使用毒蝇伞，伊纳里的魔术师在7个地方都描述到了毒蝇伞。1979年，塞德·高兰·莫克塔尔（Said Gholam Mochtar）和哈特穆·吉尔肯（Hartmut Geerken）出版一篇文章，里面宣称发现到阿富汗帕拉奇语言民族有毒蝇伞作为养生用途的传统。有未证实的报道指称在靠近北极的印第安部落，使用毒蝇伞为宗教用途。欧及布威族人类植物学家吉威蒂诺圭·佩修（Keewaydinoquay Peschel）报道在她的民族之间毒蝇伞的用途，而在欧及布威族的语言为“miskwedo”。这些资讯被华生大力接受，纵使其他来源的证据仍然很缺乏。有一份来自欧裔美国人的报道，他们宣称最早使用毒蝇伞的是传统的特里邱（Tlicho）地区。 七、药理学发现于1869年的蝇蕈素，长期以来被认为是毒蝇伞里面有迷幻效果的药剂。蝇蕈素结合到蝇蕈素乙酰胆碱受器，导致神经的兴奋，并支持着这些受器。然而，当我们比较其他的有毒真菌时，毒蝇伞的等级是很低的，像是变红丝盖伞（Inocybe erubescens），或小型的白色杯伞属物种，如变色杯伞（Clitocybe dealbata）和环带杯伞（Clitocybe rivulosa）都比毒蝇伞毒，而且毒蝇伞毒性实在是太微不足道，因此在中毒的症候上并不扮演一个角色。 八、食用烹调毒蝇伞的毒性物质是水溶性的。当切细或切碎成方块状，并且使用大量水煮沸时，毒性似乎就会解除。纵使使用毒蝇伞为食用用途没有广泛应用，但是已解毒的毒蝇伞仍然在欧洲部份地区（尤其是在移民到西伯利亚的俄罗斯人）经常使用，至少在19世纪起，或可能更早就开始了。德国内科医师和博物学家乔治·亨利屈·冯·朗斯道夫（Georg Heinrich von Langsdorff）在1823年，于早期的已出版报道中，写下如何将毒蝇伞解毒。19世纪晚期，法国内科医师菲利斯·阿奇曼德·波却（Felix Archimede Pouchet）曾写过，提倡可以和木薯属植物（一种在热带南美洲重要的食物来源，但仍然必须在食用前先解毒）同等方式来食用毒蝇伞。在北美洲，也存在使用毒蝇伞作为食物来源。 九、艺术方面1、近代绘画毒蝇伞自从文艺复兴开始，就被使用在绘画当中，虽然画家使用时，是用微妙的方法。在维多利亚时代，画家在绘画毒蝇伞时变成写实化，并且在仙女主题画作上成为主要题材。2、大众文化有红白相间斑点的伞菌在大众文化的很多场景是普遍的概念，尤其是在儿童的书籍、电影、花园装饰、贺卡和电脑游戏。花园装饰和描绘地精、仙女的儿童图画书，像是《蓝精灵》，经常会出现将毒蝇伞用在座位或是房子。两种最著名使用毒蝇伞的例子，是《超级玛利欧》电玩系列，和1940年迪士尼动画《幻想曲》里跳舞的菇类。3、圣诞节文化毒蝇伞出现在全球的圣诞卡或新年贺卡上，代表着好运。民族植物学家强纳森·欧特提出，圣诞老人的构想和传统上在壁炉上面挂长筒袜的中心基础可能和毒蝇伞自身有关。由于毒蝇伞一般有红色和白色的轮廓，他主张圣诞老人的服装和毒蝇伞有关。他也表示毒蝇伞也和飞翔的驯鹿有类似关联：驯鹿被描述是吃了毒蝇伞，之后在迷幻的情绪当中腾跃飞翔。美国民族药理学家史考特·哈金雪特-多伯斯金（Scott Hajicek-Dobberstein），研究宗教迷信和红色菇类的关系，记录到，“如果圣诞老人只有1只眼睛（像是奥丁），或者如果神奇的尿液是他传说中的一部份，他和毒蝇伞的关系会更容易去相信。” 十、毒菇辨别看形状：毒蘑菇一般比较黏滑，菌盖上常沾些杂物或生长一些像补丁状的斑块。菌柄上常有菌环（像穿了超短裙一样）。无毒蘑菇很少有菌环。观颜色：毒蘑菇多呈金黄、粉红、白、黑、绿等较为鲜艳的颜色。无毒蘑菇多为咖啡色、淡紫色或灰红色。闻气味：毒蘑菇有土豆或萝卜味。无毒蘑菇为苦杏或水果味。看分泌物：将采摘的新鲜野蘑菇撕断菌杆，无毒的分泌物清亮如水，个别为白色，菌面撕断不变色；有毒的分泌物稠浓，呈赤褐色，撕断后在空气中易变色。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 SW1088人脑星形胶质瘤细胞的复苏与冻存操作说明！ 一、背景 SW1088细胞系具有较高的增殖能力和自我更新能力，同时也容易进行基因突变和表达调控等实验操作。因此，它成为了神经胶质瘤研究领域中一种重要的细胞模型。 二、SW1088细胞系|人脑星形胶质瘤细胞的复苏操作步骤 1、准备培养基：使用DMEM/F12培养基(含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液和0.25%的非必需氨基酸),并添加1%的L-谷氨酰胺和1%的β-巯基乙醇。 2、准备细胞冻存液：将SW1088细胞悬液转移到离心管中，用离心机离心5分钟(4000rpm),然后用PBS洗涤两次。接着，将细胞沉淀加入含有50ml DMEM/F12培养基的冰上预冷的离心管中。在室温下缓慢加入5ml冷冻保存液(含DMSO),轻轻摇晃使细胞充分接触冷冻保存液。将该管放入冰箱中，等待冷冻保存液完全渗透到细胞中。最后，用新的DMEM/F12培养基替换掉原来的冷冻保存液。 3、解冻细胞：将含有SW1088细胞的离心管放在冰上，等待其完全解冻。注意不要让细胞沉淀重新悬浮在液体中。 4、SW1088细胞系|人脑星形胶质瘤细胞传代培养：当SW1088细胞达到约70%~80%的密度时，将其转移到新的培养皿或瓶子中进行传代培养。通常情况下，每隔2-3天进行一次传代。 需要注意的是，在进行SW1088细胞复苏操作时，一定要注意无菌操作，避免污染。此外，为了保证细胞的健康生长，还需根据具体的实验需求调整培养条件和药物处理方案。 三、SW1088细胞系|人脑星形胶质瘤细胞在进行细胞冻存之前，需要做好以下准备工作 1、细胞培养：将SW1088细胞培养到所需的密度，通常为80%-90%。确保细胞生长良好，没有明显的病变或死亡。 2、冻存试剂：选择合适的冻存试剂，如冷冻保护剂、DMSO等。这些试剂可以保护细胞免受冰晶损伤，并有助于细胞复苏。 3、冻存设备：准备适当的冻存设备，如液氮罐、冷冻机等。确保设备的温度稳定，并且符合冻存要求。 4、冻存操作：将SW1088细胞悬液转移到冻存管中，并加入适量的冻存试剂。然后将冻存管放入液氮罐中，等待细胞冻结。在冻存过程中，需要定期检查细胞的状态，以确保细胞没有受到冰晶损伤。 5、复苏操作：当需要使用SW1088细胞时，需要先将其从液氮罐中取出，然后将其转移到复苏培养基中进行复苏。在复苏过程中，需要控制好温度和时间，以避免细胞受到过度刺激或死亡。 四、应用 SW1088细胞系|人脑星形胶质瘤细胞可以用于胶质瘤细胞糖蛋白及糖鞘脂特异性糖链谱研究： 利用凝集素芯片技术分析多种胶质瘤细胞的总蛋白、膜蛋白及糖鞘脂糖链谱,并将之与正常胶质细胞糖链谱相比较,分析胶质瘤细胞中的异常表达糖链结构,最终为发现胶质瘤细胞的糖链结构标记物提供一个新的思路。 实验方法：本研究以两株胶质母细胞瘤细胞U87MG和A172,两株星形胶质细胞瘤细胞SW1088和CCF-STTG1,以及一株永生化正常胶质细胞SVGp12为研究对象。对上述细胞进行培养后,分别提取细胞的总蛋白、膜蛋白和糖鞘脂,之后对所获取样本进行荧光标记,并将之与凝集素芯片孵育,随后扫描获取芯片图像并利用GenePix7.0软件读取荧光信号值。接下来对实验所获取之原始数据进行中值归一化和Raito值分析,分别比较不同细胞间的糖蛋白糖链谱和糖鞘脂糖链谱的差异,筛选胶质瘤细胞中具有显著性差异表达的糖链结构。 实验结果：在总蛋白糖链谱的研究与比较中,在四株胶质瘤细胞中共筛选出15种具有整体显著性上调/下调(Ratio≥1.5 or Ratio≤0.67,p≤0.05)趋势的凝集素。其中ECA识别的Galβ1-3/4GlcNAc、WFA识别的GalNAcα/β1-3/6Gal、MAL-Ⅱ识别的Siaα2-3Gal/GalNAc、PHA-E识别的Bisecting GlcNAc、PTL-I识别的GalNAc,GalNAcα1-3Gal和GalNAcα1-3Galβ1-3/4Glc、PNA识别的Galβ1-3GalNAc-Ser/Ter(T)、EEL识别的Galα1-3(Fucα1-2)Gal、LTL识别的Fucαl-2Galβ1-4GlcNAc和Fucα1-3(Galβ1-4)GlcNAc、GSL-I识别的αGalNAc和αGal、VVA识别的GalNAc和GalNAcα1-3Gal-Ser/Ter(Tn)、MAL-I识别的Galβ1-3/4GlcNAc均有较显著上调趋势,而NPA识别的High-Mannose和Manαl-6Man、PWM识别的Branched(LacNAc)n、GNA识别的High-Mannose和Manα1-3Man、BPL识别的Galβ1-3GalNAc和Terminal GalNAc均有较显著下调趋势。在膜蛋白糖链谱的研究与比较中,在四株胶质瘤细胞中共筛选出了6种具有整体显著性上调/下调趋势的凝集素。 其中PNA识别的Galβ1-3GalNAc-Ser/Ter(T)以及VVA识别的GalNAc和GalNAcα1-3Gal-Ser/Ter(Tn)显著性上调,而LEL识别的(GlcNAc)n、SNA识别的Siaα2-6Gal/GalNAc、LTL识别的Fucα1-2Galβ1-4GlcNAc和Fucα1-3(Galβ1-4)GlcNAc以及PTL-I所识别的GalNAc,GalNAcα1-3Galβ1-3/4Glc和GalNAcα1-3Gal显著性下调。由于糖鞘脂糖链与糖蛋白糖链有一定差异,相同凝集素所识别糖链在两组样本中不一定完全相同,在糖鞘脂糖链谱的比较中,在四株胶质瘤细胞中共筛选出10种具有整体显著性上调/下调趋势的凝集素。 其中EEL识别的Galα1-3(Fucα1-2)Gal以及MAL-I识别的Galβ1-4GlcNAc均显著性上调,而NPA识别的Fucα1-4GlcNAc和poly-Man、GNA识别的α1-3Man和Galα1-3Galβ1-4GlcNAc、MPL识别的Galβ1-3GalNAc,Galβ1-3GlcNAc和GalNAc、HHL识别的α1-3/1-6Man和Galα1-3Galβ1-4GlcNAc、LCA识别的Fucα1-6GlcNAc、PSA识别的Fucα1-6GlcNAc和Fucα1-3GlcNAc均显著性下调。 由上述发现进一步整理筛选可得,胶质瘤细胞总蛋白中Galβ1-3/4GlcNAc、Siaα2-3Gal/GalNAc、Bisecting GlcNAc、Fucαl-3(Galβ1-4)GlcNAc、Galα1-3(Fucα1-2)Gal、GalNAcα1-3Galβ1-3/4Glc、GalNAc-Gal等结构糖链显著性上调,而High-Mannose、Branched(LacNAc)n糖链显著性下调。在胶质瘤细胞膜蛋白中Gal-GalNAc结构糖链上调,而Siaα2-6Gal/GalNAc、Fucαl-3(Galβ1-4)GlcNAc、GalNAcαl-3Galβ1-3/4Glc、(GlcNAc)n糖链显著性下调。在胶质瘤细胞糖鞘脂中Galα1-3(Fucα1-2)Gal、Galβ1-4GlcNAc显著性上调,而Galal-3Galβ1-4GlcNAc、Fuc-GlcNAc、Gal-GlcNac结构糖链显著性下调。其中值得注意的是,膜蛋白中Siaα2-6Gal/GalNAc具有下调趋势且差异极其显著(p≤0.01),但该糖链在总蛋白样本中虽有下调趋势但差异性不显著(p≥0.05)。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                 产酸克雷伯氏菌 CAV1374的知识解析及注意事项！ 一、菌种简介产酸克雷伯氏菌是Klebsiella属的微生物，原产地为中国。革兰氏染色为阴性（G－）；正常条件下可利用L组氨酸、D丝氨酸、L丝氨酸、尿苷、胸苷、甘油、D丙氨酸、L丙氨酸、L天门冬酰胺等碳源，但不利用N乙酰D半乳糖胺、D葡萄糖胺酸、α羟丁酸、β羟丁酸、γ羟丁酸、2,3丁二醇等。主要用途为研究；教学。  二、产品信息平台编号：Bio-82285规格：2ml甘油管拉丁属名：Klebsiella Oxytoca Strain CAV1374中文名称：产酸克雷伯氏菌 CAV1374货期：款到1-3天出库运输：冰袋泡沫盒快递培养方式：LB,30℃保存：2ml甘油管，-80℃用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、基因型请查阅相关文献 四、基本信息抗性：无抗培养基：LB菌株类别：克雷伯氏菌培养条件：30℃，有氧，LB质粒转化：保存方式：基本应用：备注： 五、注意事项1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。本产品仅可用于实验室研究，不能用于动物，人体以及作为食品添加剂等用途。2、使用甘油菌时可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可，也可完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，菌株的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                人神经母细胞瘤细胞的培养操作步骤及应用研究！ 一、背景 人神经母细胞瘤细胞是一种人神经母细胞瘤细胞系。这种细胞通常用于研究和了解神经母细胞瘤的生物学特征，以及探索相关的治疗策略。 神经母细胞瘤是儿童最常见的颅外肿瘤，通常起源于交感神经系统的任意神经脊部位。SH-SY5Y细胞是在神经母细胞瘤的背景下分离出来的，因此，它们可以作为这种疾病模型的一部分，用于研究和理解疾病的病因、进程和响应治疗方案。 二、人神经母细胞瘤细胞培养步骤 1、人神经母细胞瘤细胞培养基及培养冻存条件准备： 1）准备基础培养基(GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。 2）人神经母细胞瘤细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。 2、人神经母细胞瘤细胞处理： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）人神经母细胞瘤细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）人神经母细胞瘤细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。 三、应用 人神经母细胞瘤细胞可以用于核蛋白PCNP对人神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响： 探讨PCNP基因过表达及沉默对人NB细胞增殖、迁移、侵袭和成瘤的影响,并寻找可能导致这些变化的机制。 方法：将PCNP过表达及干扰质粒转染人NB细胞SH-SY5Y和SK-N-SH,并分别采用G418和嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株,将得到的稳定株采用MTS、EDU法检测细胞增殖;采用TUNEL染色法检测细胞凋亡水平变化;采用划痕、transwell、invasion、soft agar实验检测细胞迁移和侵袭能力;并通过蛋白免疫印迹法Western blot检测MAPK及PI3K/AKT/mTOR通路相关分子表达的变化;将PCNP过表达及沉默的人NB细胞注射入裸鼠腋下检测PCNP对人NB细胞成瘤能力的影响。 结果：(1)成功构建PCNP过表达及沉默稳定株; (2)MTS、EDU检测SH-SY5Y细胞和SK-N-SH细胞增殖情况,结果显示PCNP过表达抑制细胞增殖,沉默促进细胞增殖; (3)Tunel染色法检测细胞凋亡,结果显示PCNP过表达促进NB细胞凋亡,沉默抑制凋亡; (4)划痕和transwell法检测PCNP对NB细胞迁移能力的影响,结果表明PCNP过表达后细胞迁移能力减弱,沉默后增强; (5)invasion和soft agar实验检测细胞侵袭能力,结果表明PCNP过表达减弱NB细胞侵袭能力,而PCNP沉默侵袭增强; (6)Western blot结果显示PCNP过表达后Cleaved Caspase3、Cleaved Caspase8、Cleaved Caspase9表达增多,而PCNP沉默后表达减少;PCNP过表达导致SH-SY5Y细胞bax表达增多,bcl-2表达减少;相反PCNP沉默导致细胞bax表达减少,bcl-2表达增加,与凋亡实验结果一致;因此PCNP可能通过调控细胞凋亡而影响生长; (7)Western blot检测MAPK及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关分子表达的变化,结果显示PCNP过表达后p-JNK、p-P38和p-Erk表达增多,而磷酸化的PI3K、AKT、mTOR与对照相比表达减少;而PCNP沉默后磷酸化的JNK、P38和Erk表达减少,磷酸化的PI3K、AKT、mTOR表达增多,因此PCNP可能通过MAPK信号转导通路调控NB细胞凋亡,通过PI3K/AKT/mTOR通路调控NB增殖; (8)注射PCNP过表达细胞的裸鼠腋下肿瘤较对照组减小,注射PCNP沉默细胞的裸鼠腋下形成的肿瘤较对照组增大。 结论：1、PCNP抑制人NB细胞SH-SY5Y和SK-N-SH增殖; 2、PCNP促进人NB细胞凋亡; 3、PCNP抑制人NB细胞迁移和侵袭; 4、PCNP可能通过MAPK信号转导通路和PI3K/AKT/mTOR通路调控细胞凋亡及增殖; 5、PCNP抑制人NB细胞移植瘤形成。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  化验室的管理要求与制度及安全管理规定有哪些？ 一、管理要求 （1）化验员必须遵守公司保密制度和相关的规定。 （2）检验程序 ①按规定要求采取样品，并做好登记和标识。 ②采样后，按规定的标准和试验方法进行检验和试验。然后按要求备好保留样品，并做好标识。 ③检验过程要严格遵守操作规程，对那些影响检验结果准确度的因素诸如尘埃、温湿度、振动、噪声等要密切注意，并严加控制。杜绝主观随意性，注意样品处理的安全性和操作安全性以及仪器的灵敏性和稳定性。操作时，不得擅自离开工作岗位。 ④检测过程中，要按照方法规定进行测定，其结果应符合方法精密度要求。数据处理与结果计算要遵循数字修约规则，有效数字不得随意舍弃。 ⑤若发现检测结果异常或试验偏差与方法规定有偏离时，检验人员不要轻易下结论，应认真检查记录、查计算、查操作、查试剂、查方法、查样品，找出原因后有针对性的进行复检。 ⑥要认真及时填好质量记录。所有原始记录必须使用专用表格，书写工整、清楚、真实、准确、完整。不准用铅笔记录，不得随意涂改、乱写、乱画和折叠。， ⑦质量记录分为检验原始记录、检验报告单、质量监督日报表三种。化验室涉及到原始记录和报告单两种。 ⑧分析数据应该及时填入原始记录，需计算的分析结果应在确认无误后填写，分析检验原始记录必须由分析者本人填写，在岗其它分析人员复核（两检制），确认无误后，报告给主管。分析者应对原始记录的真实性和检验结果的准确性负责，复核人员对计算公式以及计算结果的准确性负责。 ⑨主管接到分析数据，经审核确认无误，加盖审核章后，由化验员将检验报告单报给有关部门相关负责人。主管对数据报告的及时性，准确性和完整性负责。 （3）执行国家关于质量记录和文件管理规定，妥善保管质量记录，中控记录一般保存一年，原料和产品分析原始记录、分析检验报告单一般保存３年。 （4）质量记录在保存过程中，应防止潮湿、霉变、虫蛀、丢失和盗用，注意防火与通风。质量记录的使用与管理要遵守质量体系程序文件的规定。 （5）遵守化验室分析检验、试验工作的基本规则。 二、管理制度 1、化验员工作制度 （1）严格执行检验操作规程，认真负责，杜绝弄虚作假，出现问题追究责任，并按经济责任制相关内容处理。 （2）化验数据要求实事求是，准确无误，杜绝虚报谎报，要对检验报告结果、数据及结论负责，检验报告要加盖化验专用章及化验员章后，及时上报各部室。 （3）负责对原辅料、成品、半成品的化验及检验工作。取样及时，要按取样原则取样，要有代表性，及时向有关部门及有关领导报送检验报告单。 （4）严格遵守仪器使用记录，掌握本岗位所用计量器具校验周期，及时和主管沟通，保证计量器具的准确性和可靠性。 （5）对工作失误造成损失负全部责任，对以上四项标准规定中所出现问题负全面责任，对本岗位安全操作负全责。 （6）遵守和执行公司制定的规章制度。 （7）有提合理化建议并享有权利，有拒绝将不合格检验报告单开成合格检验报告单的权利，有维护自身合法利益的权利。 2、化验员交接班制度 （1）化验人本班取样，争取本班化验完毕，如因特殊原因本班不能完成，在交接班时，应交待清楚，并在交接班记录中说明，同时应在检验原始记录中已做完项目后签字。 （2）在交接班时，应在所用各种玻璃仪器及化验、检验设备完好情况进行交接，玻璃仪器破损，不洁净、数量不符不接，检验设备损坏不接。当以上问题被确认后说明原因方可交接，并在交接班记录中说明，双方签字，交接中发现问题，化验负责人以书面形式上报至主管领导。 （3）本班取样未做，需下班化验，应在交接班记录中说明原因，并口头交待清楚。 （4）下班化验员因特殊原因而未按时接班，上班人员不得下班，，导致空岗。 （5）交接班时，应认真填写交接班记录，主要内容有本班检验项目情况，仪器完好情况、试药剩余情况及本班所存在问题。 3、化验室卫生管理制度 （1）化验室取样工具应清洁，无污染，防止原辅料、半成品及成品在取样过程中受到污染，取样工具应定期进行灭菌、消毒处理。 （2）化验员所穿白大褂应定期洗涤，特别是无菌服，要随时保持清洁，并定期灭菌，绝不可将无菌副穿出无菌室外。 （3）无菌室应定时消毒灭菌，保证无菌室是卫生级别，化验室每班随时清扫，不留死角，保证整洁。 （4）玻璃仪器应保持清洁，保证待用状态，检测仪器更应物见本色，不可有试药痕迹、药品痕迹等出现。 （5）化验室各室操作台，地面不得有试纸、滤纸、试药滴、散落样品等杂物出现。 4、化学药品使用保管制度 （1）化学试剂必须保持标签完整。 （2）一般药品可按元素周期分类或按氧化物、酸、碱、盐分类存放于阴凉通风处，理想温度在30℃以下。 （3）有些药品要低温存放，以免发生事故，如石油醚、乙醚等。存放温度要求在20℃以下。 （4）贵重的试剂和一般药品分开，妥善保管。 （5）易燃、易爆的药品要远离火源。 （6）剧毒药品必须有两人以上保管，并有专柜保存，使用时做好记录。 （7）使用危险药品一定要注意安全。 （8）领用化学药品必须填写“化学品领用登记表”。 5、玻璃仪器的洗涤方法与要求 一般的玻璃仪器先用自来水冲洗，然后用洗衣粉洗洁精等擦洗，在用自来水清洗，最后用蒸馏水冲洗3次。精密或难刷的仪器（滴定管、容量瓶、移液管、垂溶玻璃漏斗），先用自来水冲洗，沥干，用洗液浸泡后，再用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗3次。一个洗净的玻璃仪器应不沾油腻，不挂水珠。洗涤后仍挂水珠，则要重洗直达至要求为止。 三、安全管理规定 （1）实验人员进入化验室，应穿着实验服、鞋、帽。 （2）严格遵守劳动纪律、坚守岗位、精心操作。 （3）实验人员必须学习安全防护及事故处理知识。 （4）实验人员必须熟悉化验仪器设备的性能和使用方法，并按要求进行实验操作。 （5）凡进行有危险性的实验，工作人员应先检查防护措施，确认防护妥当后，才可开始进行实验。在实验进行中，实验人员不得擅自离开，实验完成后应立即做好清理善后工作，以防事故发生。 （6）凡有毒或有刺激性气体发生的实验，应在通风柜内进行，并要求加强个人防护。实验中不得把头部伸进通风柜内。 （7）酸、碱类等腐蚀性物质，不得放置在高处或实验试剂架的顶层。开启腐蚀性和刺激性物品的瓶子时，应佩带护目镜；并禁止用裸手直接拿取上述物品。 （8）不使用无标签（或标志）容器盛放的试剂、试样。 （9）实验中产生的废液、废渣和其他废物，应集中处理，不得任意排放。酸、碱或有毒物品溅落时，应及时清理、除毒。 （10）严格遵守安全用电规程。不使用绝缘损坏或绝缘不良的电器设备。不准擅自拆修电器。 （11）实验完毕，实验人员必须洗手后方可进食。并不得把食物、食具带进化验室。化验室内禁止吸烟。 （12）化验室内应配备足够的消防器材，实验人员必须熟悉其使用方法，并掌握有关的灭火知识和技能。 （13）实验结束，人员离室前应检查水、电、燃气和门窗，以确保安全。 （14）禁止无关人员进入化验室。 四、信息安全管理规定 （1）对接触的公司商业秘密要采取恰当的安全措施对涉秘文件必须妥善保管。 （2）不得将检化验结果透露给无关人员。 （3）在化验单的传递过程中保证亲自交到接收的相关人员手中，不得随意委托他人代交。 （4）不得在公共场合谈论公司的机密。 （5）发现泄密及时报告，采取相应的补救措施，避免或减轻对公司的损害。 （6）客户问及公司的秘密时，应予以婉言谢绝。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    铜绿假单胞菌——非发酵革兰氏阴性杆菌 铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）是假单胞菌属的代表菌种，广泛分布于自然界和人体，其在外界环境中存在的重要条件是潮湿环境；为条件致病菌，主要引起医院内感染。 1、细菌特性 （1）形态染色   革兰阴性杆菌，菌体呈球杆状或长丝状，长短不一；单个、呈双或短链状排列；无芽胞，有荚膜，一端有单鞭毛，运动活泼，临床分离株常有菌毛。 （2）培养特性   专性需氧菌，部分菌株能在兼性厌氧环境中生长，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，可生长温度范围是25℃~42℃，最适生长温度35℃，4℃不生长而42℃生长是该菌的鉴别点之一。 在血平板、麦康凯平板上均可形成5种不同形态的菌落：①典型型，菌落呈灰绿色，大小不一，扁平湿润，边缘不规则，呈伞状伸展，表面常可见金属光泽；②大肠菌样型，菌落圆形凸起，灰白色半透明，似大肠埃希菌菌落；③黏液型，菌落光滑凸起，呈黏液状；④侏儒型，细小，无光泽半透明菌落；⑤粗糙型，菌落中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。在血平板上常可见透明溶血环，有生姜气味；在液体培养基中呈混浊生长，表面可形成菌膜，在SS琼脂平板上，该菌经过24h培养形成较小无色半透明菌落，一般不易与沙门菌和志贺菌菌落相区别，但经48h培养菌落中央呈棕绿色。铜绿假单胞菌在普通琼脂平板上生长时，可产生多种色素，主要为绿脓素（为铜绿假单胞菌特征性色素）和青脓素（荧光素），前者为蓝绿色。从临床标本分离的铜绿假单胞菌约有80%~90%产生绿脓素和青脓素。 （3）生化反应   氧化酶阳性，在OF培养基上，能氧化利用葡萄糖、木糖产酸，精氨酸双水解酶阳性，乙酰胺酶阳性，液化明胶，利用枸橼酸盐，还原硝酸盐并产生氮气，吲哚阴性。 （4）抗原构造   铜绿假单胞菌有菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原、黏液（S）抗原和菌毛抗原。O抗原有两种成分：一种是外膜蛋白，为保护性抗原，免疫性强，具有属特异性；另一种为脂多糖（LPS），具有型特异性，可用于细菌分型。 （5）抵抗力   铜绿假单胞菌对外界因素的抵抗力比其他无芽胞菌强，在潮湿的环境中能长期生存。对干燥、紫外线有抵抗力，但对热抵抗力不强，临床分离菌株对多种抗生素不敏感。 2、临床意义 铜绿假单胞菌可从医院内许多消毒不严的器皿和溶液中分离出来，常见为水溶液包括洗涤水、消毒液和液体药物等。医院内铜绿假单胞菌所致的肺部感染常见的入侵途径是雾化吸入、氧气吸入，各种侵袭性检查和治疗，如纤维支气管镜、导管、胆道、手术后引流等，破坏了机体皮肤或黏膜屏障，常引起本菌侵袭。 严重铜绿假单胞菌感染常发生在局部组织损伤或抵抗力降低的患者，如烧伤病人、各种癌肿患者和应用广谱抗生素、激素、抗肿瘤药及免疫抑制剂等患者；早产、先天畸形儿童和囊性纤维化等疾病及老年患者，也易发生严重的铜绿假单胞菌感染。 铜绿假单胞菌的致病作用与多种毒力因子有关，主要有以下几种： （1）黏附和定植   形成黏附的条件包括：①铜绿假单胞菌表面的荚膜多糖物质阻止白细胞和吞噬细胞的吞噬作用；②细菌表面的黏附素（主要是菌毛）和上皮细胞上存在的相应受体结合；③宿主防御机制异常。后者使细菌得以驻足，并保持和上皮细胞长时间的接触。 完整的皮肤黏膜是天然的屏障，故铜绿假单胞菌很少成为健康人的原发病原菌，但改变或损伤宿主正常的防御机制，如皮肤黏膜破坏、留置导尿管、气管切开插管或免疫机制缺损如粒细胞缺乏、低蛋白血症、各种肿瘤患者、应用激素和广谱抗生素的患者，常可导致感染。烧伤焦痂、婴儿或儿童的皮肤、脐带和肠道、老年人的尿道则是较常见的原发病灶或入侵门户。如果人体抵抗力降低或细菌毒力强，数量多，就可在血中生长繁殖，发生败血症。 （2）外毒素A   为主要毒力因子，是铜绿假单胞菌产生的最强有力毒素，可抑制蛋白质合成，对皮肤黏膜有坏死作用，约90%菌株产生外毒素A，在烧伤病人，其致死作用特别突出。 （3）其他尚有蛋白酶、胞外酶S、溶血素、肠毒素、色素、杀白细胞素、内毒素等。  3、微生物学检验 （1）检验程序  （2）标本采集   按疾病和检查目的分别采取不同的临床标本，如伤口分泌物、尿液、脓及穿刺液、血液、脑脊液、胸腹水、关节液等。医院环境检测可从空气、水、物体表面等处采样。 （3）检验方法 1）显微镜检查   脑脊液、胸腹水离心后取沉淀物涂片，绿色脓汁、分泌物直接涂片革兰染色镜检。为革兰阴性杆菌，有鞭毛。 2）分离培养   血液和体液标本可先增菌后在转种血琼脂平板和麦康凯平板，脓液、分泌物、中段尿等可直接接种上述培养基。 3）鉴定与鉴别   根据培养物的菌落特征、产生水溶性绿色色素、特殊的生姜气味、氧化酶试验、OF试验等即可作出初步鉴定。但对色素产生不典型的铜绿假单胞菌还需要做其它生化反应（如明胶液化、精氨酸双水解试验、42℃生长试验等，乙酰胺酶检测试验有一定的价值，）与其他假单胞菌鉴别。 从临床标本中分离出铜绿假单胞菌，需要排除污染，从患者血及无菌体液、尿液中分离到本菌，特别是反复检出者，结合临床表现即可确定是感染病原菌，铜绿假单胞菌下呼吸道感染需连续三次痰培养阳性才能确立，如患者无感染的临床表现，虽然分离到铜绿假单胞菌亦应作为正常菌群。 （4）耐药性    铜绿假单胞菌对多数抗生素不敏感，呈现明显的固有耐药性。长期以来假单胞菌的固有耐药性认为是由于该菌具有外膜的低通透性（主要是外膜微孔蛋白突变，阻止抗生素由外膜进入胞质），最近的研究表明，假单胞菌耐药的产生机制与细菌具有能量依赖性的主动外排系统有关，也可能同时存在其他耐药机制。由于在长期抗生素治疗过程中铜绿假单胞菌可能发生耐药，因此，初代敏感的菌株在治疗3~4周后，测试重复分离株的抗生素敏感性是必要的。目前，对假单胞菌感染多采用联合治疗，如选用一种β内酰胺类抗生素与一种氨基糖苷类或一种喹诺酮类抗菌药物联合治疗严重的铜绿假单胞菌感染。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     人白血病细胞的知识与应用及培养操作步骤！ 一、背景 人白血病细胞是一种起始于血液形成组织的癌症。白血病细胞是一种异常的白细胞，它不会在应该死亡的时候死亡，反而会过度增殖，影响正常的血细胞，如白细胞、红细胞和血小板。白血病主要分为急性白血病和慢性白血病两大类，包括急性淋巴细胞白血病（ALL）、急性粒细胞性白血病（AML）、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）以及慢性粒细胞白血病（CML）等。 人白血病细胞（NOMO-1 Cell）是从一名25岁的白人男性肺腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞具有淋巴母细胞样的形态特征，并且能够在体外培养中表现出悬浮生长的特点。在科学研究领域，NOMO-1 Cell被广泛应用于白血病的研究、药物筛选和毒性测试等方面。 二、人白血病细胞培养步骤 1、人白血病细胞培养基及培养冻存条件准备： 1）准备基础培养基(GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸钠0.11g/L)；优质胎牛血清，10%。 2）人白血病细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。 2、人白血病细胞处理： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）NOMO-1人白血病细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）人白血病细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。 三、应用 人白血病细胞可以用于Venetoclax联合地塞米松对急性髓系白血病细胞的作用及初步机制研究： 探索BCL-2抑制剂Venetoclax联合地塞米松在体外对急性髓系白血病(AML)细胞的抗肿瘤作用,以及减弱骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对AML细胞系的保护作用及其潜在的调控机制。 方法：Venetoclax和地塞米松单独或联合处理AML细胞系MOLM-13、NOMO1和THP-1,实验分组:未加药的对照组、Venetoclax单药组、地塞米松单药组、Venetoclax和地塞米松联合组;通过CCK-8检测AML细胞的活力;通过Annexin V-FITC/PI双染试剂盒检测其凋亡;通过Western blot(WB)检测凋亡相关蛋白PARP,BCL-2家族蛋白BCL-2、MCL-1和BCL-XL等蛋白的表达水平;qRT-PCR验证BCL-2家族BCL-2、MCL-1和BCL-XL等基因的表达;使用Mitotracker Deep Red试剂对MSCs的线粒体进行染色,然后将其与AML细胞共培养,Venetoclax与地塞米松单独或联合作用于共培养体系,实验分组同上,通过流式细胞术检测AML细胞的凋亡、线粒体膜电位(MMP)、活性氧(ROS)水平和线粒体荧光信号。 结果：地塞米松对AML细胞活力和凋亡没有显著影响。相对于Venetoclax单药处理,地塞米松与Venetoclax联合后,会增强Venetoclax的降低AML细胞活力的作用,引起更多的AML细胞凋亡。WB结果表明,与对照组相比,地塞米松单独使用会增加AML细胞中MCL-1蛋白的表达,地塞米松与Venetoclax联合作用,也增加了AML细胞中MCL-1蛋白的表达。AML细胞与MSCs共培养后,MSCs的存在减少了Venetoclax诱导的AML细胞凋亡,地塞米松联合Venetoclax仍会增加Venetoclax诱导的凋亡。 共培养时,Venetoclax会增加AML细胞中的ROS水平和MSCs向AML细胞转移的线粒体,地塞米松会降低AML细胞中的ROS水平和MSCs向AML细胞转移的线粒体,地塞米松联合Venetoclax会降低AML细胞中Venetoclax诱导的ROS水平,使MSCs向AML细胞转移的线粒体减少,这可能会导致MSCs对AML细胞的保护作用减弱。 结论：地塞米松增强了Venetoclax在体外的抗肿瘤效果,Venetoclax联合地塞米松会减少AML细胞中Venetoclax诱导的ROS水平,并减少MSCs向AML细胞转移的线粒体,这可能导致减弱MSCs对AML细胞的保护作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  异常威克汉姆酵母：用于酒精或白酒的生产 异常威克汉姆酵母是Wickerhamomyces属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；生产，具体用途为酿造曲酒。 一、菌种简介平台编号：Bio-63569规格：冻干物拉丁属名：Wickerhamomyces Anomalus中文名称：异常威克汉姆酵母拉丁名称：Wickerhamomyces anomalus来源历史：←黑龙江省轻工科学研究院（W11）←大连科学研究所收藏时间：2005/9/2原始编号：大连Y284资源归类编码：15151113000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产特征特性：无性繁殖；细胞为芽殖；呈卵圆形。兼性厌氧。在含50%葡萄糖的高渗培养基中能生长。在添加1%乙酸的培养基中能生长。最适pH4.5-5.0。具体用途：用于酒精或白酒生产。生物危害程度：四类培养基编号：CM0077培养基名称：5 °Bé麦芽汁琼脂培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L，琼脂 15.0g，自然pH。培养温度：25-28℃需氧类型：好氧保存方法：真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：研究；生产；用于酒精或白酒生产。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养条件1、培养基编号：CM0077 5 °Bé麦芽汁琼脂2、培养基成分：5°Bé麦芽汁 1.0L（或用 MEB 代替），琼脂 15.0g，自然 pH。推荐使用商品化成品培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：25℃ 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中的 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养，以液体培养结果为准。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                  肠道微生物：解析肥胖与瘦身之间的微生物密码！ 百欧博伟生物：人类的肠道中居住着数万亿个微生物，它们构成了肠道微生物群落，对人体健康起着重要的作用。最新的医学科学研究表明，肠道微生物与肥胖和瘦身之间存在着密切关系。本文将为您分享这一新颖的发现，并介绍肠道微生物在肥胖预防和瘦身过程中的影响和应用。 肠道微生物是指寄生在人体肠道内的微生物群落，主要包括细菌、真菌和病毒等。研究发现，肠道微生物与人体的新陈代谢、免疫调节、能量平衡和营养吸收等方面密切相关。近年来，越来越多的研究表明肠道微生物与肥胖和瘦身之间存在着紧密的联系。 首先，肠道微生物可以影响人体能量代谢。 研究发现，肥胖人群的肠道微生物群落与正常体重人群存在明显差异。肥胖人群的肠道微生物更倾向于从食物中提取更多的能量，并将其储存为脂肪。另外，一些肠道微生物还会产生短链脂肪酸（SCFA），这些物质可以促进能量消耗和脂肪的分解。因此，通过调整肠道微生物组成，可以调节人体能量代谢，从而影响体重的变化。 其次，肠道微生物可以影响食欲和食物消化吸收。 一些研究表明，肠道微生物可以产生一些信号分子，影响我们对食物的感觉和食欲调控。此外，一些肠道微生物可以帮助消化吸收食物中的纤维素和其他难以被人体消化的物质，从而提高食物的利用率。通过调整肠道微生物的组成，可以改变食欲的调控机制，从而影响食物的消化吸收过程。 最后，肠道微生物可以影响免疫系统的功能。 免疫系统在肥胖和瘦身过程中发挥着重要作用。研究发现，肠道微生物可以通过调节免疫系统的活性和免疫细胞的功能，影响身体对脂肪的存储和代谢。一些肠道微生物可以调节炎症反应的程度，从而影响体内脂肪的燃烧和分解。 通过对肠道微生物的研究，科学家们正在探索用微生物来预防和治疗肥胖的方法。例如，通过给予肥胖人群特定的益生菌，可以改变肠道微生物组成，从而调节能量代谢和食欲。此外，一些研究还发现，通过粪便移植可以改变肠道微生物群落，从而帮助人体实现瘦身的目标。 总结 肠道微生物与肥胖和瘦身之间的密切联系成为了医学科学研究的热点。肠道微生物可以通过影响人体能量代谢、食欲和食物消化吸收、免疫系统功能等方面，对肥胖和瘦身产生影响。未来，随着对肠道微生物的进一步研究，我们有望利用微生物来预防和治疗肥胖，并为人们提供更加科学有效的瘦身方法。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  如何对无菌隔离器进行实时监测？快来看一看吧！ 百欧博伟生物：无菌隔离器是现代生物医学实验室中常用的设备，用于提供无菌环境，确保实验的可靠性和准确性。无菌环境的灭菌情况对于实验结果的有效性至关重要。 在生物医学研究和实验中，无菌隔离器被广泛应用于细胞培养、细菌学研究、药物研发等领域。无菌隔离器通过过滤空气、提供无菌工作区域和消毒功能，保持实验过程中的无菌状态。然而，为了确保无菌环境的灭菌情况，科研人员需要对无菌隔离器进行实时监测。 一、温度监测无菌隔离器内的温度对于细胞培养和实验的成功至关重要。 科研人员可以使用温度传感器来实时监测无菌隔离器内的温度情况。这些传感器可以定期校准，确保其准确度和灵敏度。温度监测的结果可以通过仪表板或监控系统显示，让科研人员了解无菌隔离器内的温度变化。 二、压力监测无菌隔离器内的正压状态对于防止外部空气污染起着重要作用。 通过在无菌隔离器内安装压力传感器，科研人员可以实时监测隔离器内的正压情况。传感器可以检测到任何压力波动或变化，并通过警报系统通知科研人员。这样，如果压力异常，科研人员可以及时采取措施，确保无菌环境的完整性。 三、消毒效果质量监测无菌隔离器内的消毒液有效成分浓度的保证是保持无菌环境的关键因素之一。 科研人员可以使用欧菲姆DH-01气体浓度监测仪来监测无菌隔离器内的消毒液有效成分水平。欧菲姆牌DH-01系列过氧化氢气体检测仪，可以用于实时在线检测过氧化氢气体浓度、温湿度，主要采用的电化学传感器，DH-01内置的电路设计和的算法处理，取得了多项软件著作和外观。可以检检测空间或管道中以及大气环境中的气体浓度，也可以定制传感器检测其他各种气体泄漏和各种背景气体为氮气或氧气的高浓度单一气体纯度，检测种类超过500多种。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  克罗诺杆菌属的性质与用途及生产工艺！ 一、菌种简介克罗诺杆菌原称为阪崎肠杆菌，生活于人和动物肠道内，为兼性厌氧革兰氏阴性杆菌，隶属于肠杆菌科。婴幼儿是克罗诺杆菌感染的高危人群。该致病菌致病剂量较低，克罗诺杆菌在婴幼儿奶粉、肉类、水、蔬菜等多种食品中被检测到，其中奶粉是该菌的主要感染渠道。 二、产品信息平台编号：Bio-85118规格：冻干物拉丁属名：Cronobacter Sp.中文名称：克罗诺杆菌属拉丁名称：Cronobacter sp.来源历史：←某乳品检测中心收藏时间：2016/4/14原始编号：2原产国：中国资源归类编码：15131122000模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：阪崎肠杆菌显色培养基，37℃培养24h，菌落深绿色，圆形、表面光滑、湿润。具体用途：检测质量控制。生物危害程度：三类培养基编号：CM0002培养基名称：营养肉汁琼脂培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：36℃需氧类型：好氧分离基物：婴幼儿乳粉保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：检测质量控制。注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 三、培养基*营养琼脂培养基（NA） 四、保藏条件斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油管请置于-80°C 保存;请勿长期置于室温。  五、注意事项1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支斜面或平板；或直接接种液体培养基，以不超过 5ml 为宜）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降；11）西林瓶开封：用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖， 注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用 75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入 0.5ml 适宜的液体培养基复溶冻干粉末。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                人黑色素瘤细胞系M14的培养操作步骤及应用研究！ 一、产品信息 平台编号：Bio-73228 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：M14 细胞名称：人黑色素瘤细胞系M14 产品规格：T25培养瓶x1;1.5ml冻存管x2 细胞数量：1x10^6;1x10^6 保存温度：37℃;-198℃ 运输方式：常温保温运输；干冰运输 安全等级：1 用途限制：仅供科研2类 培养体系：90%DMEM+10%FBS+1%三抗 培养温度：37℃ 二氧化碳浓度：5% 简介：人黑色素瘤细胞系M14取自33岁男性供体。贴壁培养。 用途：研究 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、知识背景 人黑色素瘤细胞株源自一位54岁女性，是由D·J·Giard等人建立的一系列细胞株中的一株。A-375细胞在抗胸腺细胞球蛋白、血清处理的NIH瑞士小鼠中形成类似于恶性黑素瘤的快速增长的皮下肿瘤；A-375在普通成纤维细胞和琼脂上形成克隆。 三、人黑色素瘤细胞株细胞培养步骤 1、人黑色素瘤细胞株培养基及培养冻存条件准备： 1）准备DMEM基础培养基87%， 优质胎牛血清10% GlutaMAX-1谷氨酰胺1% Sodium Pyruvate丙酮酸钠1% P/S青霉素-链霉素1% 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 2、人黑色素瘤细胞株细胞处理： 1）复苏人黑色素瘤细胞株细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）人黑色素瘤细胞株细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁人黑色素瘤细胞株细胞，传代可参考以下方法： 1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）人黑色素瘤细胞株细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； 1、人黑色素瘤细胞株细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。 3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 人黑色素瘤细胞株可以用于EGCG和ECG基于PI3K/AKT/mTOR通路调节人黑色素瘤细胞的凋亡和自噬： 以4种儿茶素,表没食子儿茶素3没食子酸(Epigallocatechin-3-Gallate,EGCG)、表儿茶素3没食子酸(Epicatechin-3-Gallate,ECG)、表没食子儿茶素(Epigallocatechin,EGC)、表儿茶素(Epicatechin,EC)为研究对象,结合恶性黑色素瘤模型,系统评估其通过凋亡和自噬机制调节黑色素瘤细胞增殖的具体机制,为儿茶素治疗黑色素瘤提供实验依据和理论支持。 主要研究内容如下： (1)不同儿茶素对人黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用。结果显示,4种儿茶素(EGCG、ECG、EGC、EC)里只有EGCG和ECG对人黑色素瘤A375细胞的增殖表现出明显的抑制作用,且呈现出时间和剂量依赖性。 (2)EGCG和ECG对人黑色素瘤A375细胞凋亡的作用。流式细胞仪实验结果表明,与对照组相比,细胞经过EGCG和ECG处理后凋亡比例增加。EGCG,ECG可诱导A375细胞周期阻滞在G0/G1期;同时,EGCG也可将A375细胞周期阻滞在S期,ECG也可将A375细胞周期阻滞在G2/M期。线粒体膜电位实验表明,EGCG和ECG处理降低细胞内线粒体膜电位。Western blotting实验结果表明,EGCG和ECG处理细胞后,抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2基因(B Cell Lymphoma-2 Gene,Bcl-2)表达水平下调,促凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cysteinyl Aspartate Specific Proteinase,Caspase-3)的表达水平上调,促进细胞凋亡。 (3)EGCG和ECG对人黑色素瘤A375细胞自噬的作用。RT-PCR和Western blotting实验结果表明,在基因和蛋白水平上,EGCG和ECG降低沉默信息调节因子3(Sirtuin3,Sirt3)和两个自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-associated Protein1-Light Chain 3,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)和自噬效应蛋白-1(Beclin-1)的表达水平。此外,Western blotting实验检测得到,EGCG和ECG通过抑制腺苷酸激活蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Adenine Monophosphate-activated Protein Kinase/Mammalian Target of Rapamycin,AMPK/mTOR)和升高磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Phosphatidylinositol-3-Kinase/Protein Kinase B/Mammalian Target of Rapamycin,PI3K/AKT/mTOR)通路相关蛋白的表达,从而发挥凋亡和自噬调节作用。 (4)加入自噬激活剂雷帕霉素检测凋亡和自噬两者的关系。结果显示,与对照组相比,加入自噬激活剂雷帕霉素后,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平升高,Caspase-3水平升高,Bcl-2水平下降,雷帕霉素诱导A375细胞发生凋亡和升高自噬。与单独使用EGCG和ECG处理后相比,EGCG,ECG和雷帕霉素共处理后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达依旧显著增加,但细胞凋亡的趋势并没有改变。说明对于人黑色素瘤A375细胞,细胞凋亡和自噬两者是相互独立的关系。 (5)EGCG对裸鼠恶性黑色素瘤的抑制作用。裸鼠腋下注射人源黑色素瘤细胞构建异种黑色素瘤模型,在动物水平上评估EGCG通过凋亡和自噬对黑色素瘤的作用。实验结果表明,与对照组相比,EGCG能够抑制肿瘤体积的增大,上调总的Caspase-3以及或活化型Caspase-3的表达,下调Bcl-2的表达,诱导肿瘤组织凋亡;EGCG下调Beclin-1和LC-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达水平,从而下调肿瘤组织内自噬水平。 综上所述,儿茶素EGCG和ECG能够抑制黑色素瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞自噬水平,对黑色素瘤具有一定的治疗作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

              NK-92MI人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系的应用！ 一、背景 NK-92MI人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株，亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化，可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。NK-92MI细胞细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。 NK-92细胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而亲本细胞不合成表达。1998年9月提交到ATCC的培养物污染了支原体，其后代通过BM细胞周期蛋白处理21天消除支原体，处理后6周，用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测，结果都呈阴性。 该细胞系的研究对于了解恶性非霍奇金淋巴瘤的发病机制、诊断和治疗具有重要意义。研究人员可以通过观察该细胞系的生长特性、增殖能力、杀伤活性等指标，探究其在肿瘤发生和发展过程中的作用。此外，该细胞系还可以用于制备疫苗、抗体等生物制品，为临床治疗提供新的思路和方法。 二、NK-92MI人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系复苏、传代、冻存操作 （一）NK-92MI人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系细胞复苏 ①新制100mm平皿1个，含12mL上述培养液； ②冻存管从液氮或-80℃中取出，37℃水浴1~2min,待完全溶解后尽快移入安全柜复苏； ③用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，顺时针摇匀； ④放入（37℃，5%CO2）培养箱中，过夜换液，2-4天长满。 注意：建议复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸造成人员伤害。 （二）NK-92MI人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系细胞传代 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入2mL（/100mm皿/T25瓶）胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA），在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约1min取出。传代用6mL培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可1:2传代。 （三）NK-92MI人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系细胞冻存 冻存则用3mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为3支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存。 三、应用 NK-92MI人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞系可以用于神经肽P物质对NK-92MI细胞迁移及趋化因子受体表达的影响： 通过检测SP对NK92-MI细胞迁移能力和细胞表面趋化因子受体表达的影响,探讨SP对NK细胞的迁移活性的直接或间接调控作用;并通过测定SP对NK92-MI细胞上CCR7、CXCR3和CXCR4表达水平的影响,以及SP受体NK-1R在SP调控NK92-MI细胞迁移活性中的作用,进一步讨论SP调控NK细胞迁移活性的机制。 研究方法： (1)Transwell法检测不同浓度的SP(10-12 mol/L、10-10 mol/L、10-8 mol/L、10-6 mol/L)对NK92-MI细胞迁移能力的影响以及不同浓度SP对趋化因子CCL21(CCR7配体)和CXCL12(CXCR4配体)对NK92-MI细胞趋化作用的影响。 (2)Real-time PCR检测不同浓度的SP(10-12 mol/L10-6 mol/L)对NK92-MI细胞趋化因子受体CCR7、CXCR3和CXCR4 m RNA表达水平的影响。 (3)流式细胞术检测不同浓度的SP(10-12 mol/L10-6 mol/L)对NK92-MI细胞趋化因子受体CCR7、CXCR3和CXCR4膜表达的调控。(4)NK-1R拮抗剂作用NK92-MI细胞后,再用Transwell法测定不同浓度SP及趋化因子CCL21和CXCL12对NK92-MI细胞的趋化作用;Real-time PCR测定趋化因子受体CCR7、CXCR3和CXCR4 m RNA表达水平的变化。 结果： (1)SP对NK92-MI细胞的直接趋化作用,在10-12 mol/L10-10 mol/L浓度范围内,随SP浓度增高,NK92-MI细胞的迁移力也逐渐增强,10-10 mol/L浓度SP的促迁移作用最强;其后,SP浓度继续增高,其促迁移作用反而逐渐减弱。不同浓度SP同样可以增强趋化因子CXCL12和CCL21对NK92-MI细胞的趋化作用,在低浓度范围(10-12 mol/L10-10 mol/L)SP作用下,NK92-MI细胞迁移力逐渐增加,而随着SP浓度继续增高(10-8 mol/L10-6 mol/L),NK92-MI细胞迁移力又有所减弱。 (2)SP可明显增加趋化因子受体CCR7、CXCR3和CXCR4的m RNA表达。10-12mol/L10-6 mol/L浓度范围的SP作用NK92-MI细胞6h,CCR7、CXCR3和CXCR4的m RNA表达均明显增高;仅在10-12 mol/L浓度组,CXCR4的m RNA表达增高不明显,与对照组相比无统计学意义。SP作用NK92-MI细胞12h,各浓度(10-12mol/L10-6 mol/L)SP仍能显著促进CXCR3和CXCR4的m RNA表达,而CCR7的m RNA表达水平无明显增高。 (3)10-12 mol/L10-6 mol/L浓度范围的SP对趋化因子受体CCR7、CXCR3和CXCR4的膜表达作用各不相同,其中CCR7的表达具有随着SP浓度的增高而增加的趋势,在10-8 mol/L和10-6 mol/L浓度组CCR7的表达有显著增加(P (4)经NK-1R拮抗剂处理后,SP、CCL21和CXCL12均不能明显增加NK92-MI细胞的迁移活性,且各浓度SP对CCR7、CXCR3和CXCR4 m RNA的表达无明显促进作用,说明NK-1R拮抗剂发挥了阻断作用,提示NK-1R是SP调控NK细胞迁移活性发挥作用的途径。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 茯苓的形态特征与产地生境及培育技术与主要价值！ 一、菌种简介 茯苓（学名：Wolfiporia cocos (F.A. Wolf) Ryvarden & Gilb.）是多孔菌科、茯苓属真菌。菌丝体呈白色绒毛状，幼时白色，老时淡褐色。气生菌丝短而直立，更多的是纵横交错，密集贯穿于基质中，菌核由外皮膜、内皮膜、多糖粒形成层及多糖粒积累层构成。菌核是茯苓的休眠器官，又是贮藏器官，菌核发育到一定阶段，向上膨大增长，露出土面，菌丝在菌核表面生长扩大，顶端菌丝不断向外生长，发育成子实体。子实体大小不一，平卧于菌核表面或菌丝体表面，初时白色，后淡褐色，孢子无包透明，表面光滑，主要分布于中国、美洲、大洋洲和日本及东南亚的一些国家。中国人工栽培产量大的地区有湖南、湖北、贵州、云南、广西、福建、安徽等省，区。茯苓多生于松属植物根上，适宜中海拔、气候凉爽、干燥、砂质土壤、10-35°坡地。 茯苓是中国传统中药。茯苓味甘、淡、性平无毒，入心、脾、肺，肾四经，具有渗湿利水，益脾胃保肾，安神生津等功效。 二、形态特征 1、菌丝体：外观，菌丝体呈白色绒毛状，幼时白色，老时淡褐色。菌落在基质表面呈放射状快速生长，形成线网状或膜状，气生菌丝短而直立，更多的是纵横交错，密集贯穿于基质中，起着分解、吸收、转化和运输营养物质和水分的作用，同时又具有分裂和生殖的功能，只要条件适宜，基质中的菌丝体可以长期生活下去。茯苓菌丝有单核菌丝和双核菌丝。单核菌丝在一生中只存在一段很短的时间。可亲和的单核菌丝相融合，经过质配和核配，发育成双核菌丝。双核菌丝直径约为2-5微米，具锁状联台，能独立地无限地进行繁殖，是茯苓菌丝体存在的主要形态。 2、菌核：双核菌丝在松根的新表皮与老表皮间隙中生长，发育到一定程度聚结特化形成菌核。菌核由外皮膜、内皮膜、多糖粒形成层及多糖粒积累层构成。菌核是茯苓的休眠器官，又是贮藏器官，里面贮藏着大量营养物质，在环境条件适宜时进入生殖阶段。菌核的形态各异，多为不规则的球状，大的数斤、几十斤、上百斤，小的不足一斤。幼时棕褐色，老时黑褐色，新鲜时质软有弹性，干后质地坚硬，表面皱缩粗糙。菌核内部白色或淡粉红色。菌核是药用和食用部分。 3、子实体：菌核发育到一定阶段，向上膨大增长，露出土面，俗称“冒风”，菌丝在菌核表面生长扩大，顶端菌丝不断向外生长，基部逐渐致密变厚，进一步发育成子实体。子实体大小不一，平卧于菌核表面或菌丝体表面，厚3-8毫米，初时白色，后淡褐色，管孔蜂窝状，管口呈多角形至不规则形，直径0.2-2.0毫米，管壁薄，管内壁表面发育成子实层。子实层由担子组成，担子棒状，上各产生四个孢子，孢子无包透明，表面光滑，椭圆形有歪尖7-9微米×3-4微米。  三、产地生境 主要分布于中国、美洲、大洋洲和日本及东南亚的一些国家。中国人工栽培产量大的地区有湖南、湖北、贵州、云南、广西、福建、安徽等省，区。茯苓多生于松属植物根上，适宜700-1000米的中海拔、气候凉爽、干燥、砂质土壤、10-35°坡地。茯苓子实体正常发育的温度为24-28℃菌核对温度的适应能力很强，能经受40℃的高温和冰冻严寒，常不会引起灼烧或冻害。  四、培育技术 1、茯苓场地选择：场地选择方位应朝南，或东南、西南，切忌北向阴坡，阴向阳光不足，地温低，不宜菌丝生长和结苓，且易生白蚁。场地要有一定的坡度，以15-35°的缓坡为宜，利于排水，平地易积水，坡度过陡不保水且土壤易流失。土质偏沙、土层深厚为好，必须是未耕种和未载过茯苓的老林地或生荒地，或者弃耕三年以上的土地。春节前后进行挖场翻耕，一般要求不得浅于50厘米，除去杂草、石块、树根等杂物，然后顺坡挖窖，窖深60-80厘米，长和宽根据木段多少及长短而定，一般长90厘米，窖间距为20-30厘米。然后曝晒，苓场四周开好排水沟。接种前1周按15克遍撒白蚁粉或细沙拌3%呋喃丹铺撒窖底及上面覆土层，防治白蚁危害。  2、栽培料准备：每年12月至次年2月砍伐松木低矮分叉枝丫，选择3-10厘米的枝丫截制成木段，段长60-80厘米。然后削皮留筋，纵向间隔2-3厘米削去2-3厘米宽的树皮，皮要削尽，见到木质部。截好的木段按#字型堆放在向阳通风处，使之自然干燥，横断面及削皮处出现裂纹，敲击声响清脆即可。  3、菌种培养：菌种也叫引子，分菌丝引、肉引和木引三种。生产中多用菌丝引。菌丝引是经人工纯培养的茯苓菌丝，菌丝母种用组织分离法分得。但最好用茯苓孢子制种，方法是应用8-9千克的鲜菌核置盛水容器上，离水约2厘米，室温24-26℃，空气湿度85%以上，光线明亮，仅1天后菌核近水面就出现白色蜂窝状子实体。20天后子实体可大量弹射孢子。此时即可无菌操作，切取干实体1厘米，用S形铁丝钩吊挂在PHA培养基上，28℃培养。24小时后，孢子萌发为白菌丝，经纯化培养即得母种。母种可用pHA培养基斜面扩大为原种。将原种再接到栽培种培养基上，25-28℃条件下培养1个月后，菌丝充满培养基各部，即得供接木段用的栽培种。栽培种培养基的重量组成为：松木屑76%、麸夫22%、石膏粉1%、蔗糖1%，水适量，使含水量在65%左右。拌匀后装人广口瓶和聚丙烯塑料袋中，常规灭菌后接入原种。  4、接种时间：茯苓接种，一般以地温回升到10℃以上为宜，大约在3月中旬即可接种。  5、下料：将干燥好的段木排入窖内，每窖5-8根，分两层排列，排放时顺坡势方向。若料过于干燥，应用清水浸泡，然后沥干表面水分再用。  6、接种：采用菌丝引接种，将种木片或种木枝顺排放在两根料筒之间加紧。或者将种木片、木枝或木屑种集中放在料筒接触处的一端。也可以在料筒朝内一侧锯长10-12厘米的缺口，将种木片镶嵌其中，嵌紧不使脱落。在用木屑或小木片纯菌种时，应注意菌种不可捏碎。接好的菌种要盖一小片松树皮，以防雨水渗入菌种块中，使菌丝损伤或死亡。此外，料筒既要与菌种紧密接触，又不可将其挤碎。  7、封窖：菌种接好，在窖底施放杀虫剂或驱虫剂，盖一层薄土后，先放15千克左右的松针，用脚踩实，撒上一层土，再铺10千克左右的松针踩实，把料筒放在松针面上，一头靠在窖边便于吸收土壤中的水分。覆土6-15千克，拍紧成馒头状，四周开好排水沟。松针应选新鲜或半干，干松针会使菌种失水，不易成活。  8、栽培管理：下窑后应经常检查，及时整修排水沟，防止雨水浸泡，严防人畜践踏。  9、检查菌种成活和菌丝生长：正常情况下，接种7天左右，茯苓菌丝就生长并蔓延到木段上，俗称上引。，检查时，轻扒开接种处的表面泥沙，揭开盖在菌种上的木片或移开压在菌种的筒料，如菌丝洁白，并向筒木上延伸，说明菌种成活，生长良好，应及时原样盖好覆土。如发现没有上引或感染杂菌，菌种变色，应立即换种，重新接种。若虽有上引，但菌丝细弱，可仍按原样放好，扒去窑面泥土，让太阳照射，晒半天到一天，再覆好土。  10、接种：成活后20-30天后。茯苓菌丝可向下蔓延30厘米左右且生长旺盛，有部分菌丝已深入料筒内部木质部。40-50天左右，菌丝生长可到达料筒下端，木段间有网状菌丝相互联结，俗称捆窑。2个月后窑内就开始有菌核形成，俗称结苓，结苓后土壤表面有龟裂纹出现，这时应盖土掩裂，防止菌核露出土面，在结合环境条件下形成了实体。在20-30天后检查茯苓时，若发现还有个别苓窑菌种未上引者，要将料筒扒出，晒干，然后补种。  11、补种：补种有两法，一是在苓场上另选上引菌丝较好的苓窑，将其中一根上引菌丝较好料筒与不上引料筒桶一根互换，另一种办法是预先在茯苓接种时，选取直径5-10厘米的小料筒，同样用菌种接种，每窑20-30根。20-30天后，这些小料筒已长菌丝，可作引木补种。  12、水分管理：接种后，若遇雨水较多，可在窑顶覆盖树皮或塑料薄膜，保护种引免受雨水侵袭。雨后要及时修沟排水，以利土壤通气。春植茯苓在立秋后开始陆续结苓，对水分要求迫切，正符合安康秋淋的气候特点。  13、防止苓场土壤流失：茯苓栽培场地选择在具有一定坡度的地块上，且苓窑上覆土呈馒头状突起，由于雨水的冲刷和菌核不断膨大，常使泥土流散或胀裂，除及时培土外，应随时修整排水沟。苓场和窑的周围杂草、灌木要随时铲除，以防滋生害虫。  14、采收：茯苓下窑10-12个月后，陆续长大成熟即可收获。茯苓的收获期以苓窑四周及窑面土壤不再出现龟裂纹，苓皮颜色变深，没有新的裂纹出现，料筒养分耗尽，呈黄褐色或棕褐色，一捏即碎为标志，采收时，根据成熟情况，早熟早收、迟熟迟收。挖采要细心扒土，尽量避免挖破苓块。茯苓的结苓可延伸到窖外，要耐心寻找以免遗漏。对挖后未腐朽的料筒，重新埋回窖中，等待结二潮苓。  五、病虫防治 茯苓的主要病害是腐烂病，多发于菌核生长旺盛期。患病菌核流出黄色汁液，发生的原因是排水不良，窑内积水或采收太晚，克服的办法就是注意排水，及时收获。  茯苓的生育时间较长，而且料筒埋于地下，容易造成遭受白蚁危害，它们对茯苓的危害是毁灭性的，轻者减产，重者绝收。因此，管理中要抓好白蚁的防治工作，种植前以“防”为主。从备料、苓场整理到接种各个环节都要采取措施，驱除白蚁。下种时在窑内施放杀虫剂，接种头两个月，每周对苓窑检查，若发现白蚁，及时撬开苓窑，施放白蚁粉予以扑灭，然后重新开窑放置料筒。  六、主要价值 茯苓是中国传统中药。茯苓味甘、淡、性平无毒，入心、脾、肺，肾四经，具有渗湿利水，益脾胃保肾，安神生津等功效。久食茯苓可使人“除百病、润肌肤，益寿延年”。  七、保护级别 列入《中国生物多样性红色名录—大型真菌卷》（Redlist of China’s Biodiversity - Macrofungi），保护级别为无危（LC）。  欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！