SP2/0(小鼠骨髓瘤细胞)的应用及培养操作步骤！

                    SP2/0(小鼠骨髓瘤细胞)的应用及培养操作步骤！

一、背景

SP20(小鼠骨髓瘤细胞)是一种小鼠骨髓瘤细胞系，它是由一名患有浆细胞瘤的小鼠中分离出来的。这种细胞系在肿瘤学研究中具有重要价值，因为它可以用于评估新的治疗方法和药物的有效性，以及研究浆细胞瘤的发生和发展机制。

SP20细胞系通常被用于体外实验模型，例如细胞培养、基因转染、蛋白质表达等技术。研究人员可以通过改变培养条件、添加生长因子或使用基因编辑技术来改变SP20细胞系的行为，以更好地模拟体内环境并提高治疗效果。此外，SP20细胞系还可以用于研究肿瘤微环境对肿瘤生长和转移的影响。

二、SP20(小鼠骨髓瘤细胞)培养操作

1)复苏SP20(小鼠骨髓瘤细胞)：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)SP20(小鼠骨髓瘤细胞)传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)SP20(小鼠骨髓瘤细胞)冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、应用

SP20(小鼠骨髓瘤细胞)可以用于大鼠有核红细胞（中幼、晚幼成红细胞）与小鼠浆细胞瘤（SP2/0）细胞杂交调控恶性表型及基因表达的研究：

本研究选用正常大鼠中幼、晚幼成红细胞与SP20(小鼠骨髓瘤细胞)细胞进行异种细胞杂交，研究哺乳动物红细胞胞质因子对肿瘤细胞恶性调控的效应及其机制。

1、通过哺乳动物成体骨髓及造血期胚肝的红系细胞终末分化过程的形态学观察，验证了正常情况下哺乳动物体内红系细胞发育到晚幼成红细胞阶段出现排核现象。用改良的Iscove甲基纤维素方法对动物骨髓红系祖细胞进行体外培养，对形成的红系集落细胞分化进行的形态学观察发现：(1)在低浓度红细胞生成素(Erythropoletin，简称EPO，下同)培养条件下，处于较晚发育期的红系祖细胞CFU-E可形成数十个细胞组成的集落；但集落之间，其细胞数量及发育的同步性有较大差异；

(2)在高浓度EPO培养条件下，处于较早发育期的红系祖细胞BFU-E可形成数千个甚至上万个细胞组成的大集落，而且生长同步性较高；(3)在CFU-E及BFU-E的培养集落中均可观察到自然出现的核固缩及排核现象。上述体内、体外晚幼成红细胞排核现象，为红细胞自然排核学说以及薛杜普等提出的红系终末细胞中存在不利于细胞核增殖生长的“胞质因子”工作假说提出了有利的佐证。

2、利用Harrison分离骨髓血细胞方法，用40％至70％不连续Percoll介质梯度，从15天Wistar大鼠胚肝中分离中幼、晚幼成红细胞。从70％Percoll梯度介面，比重为1.095g／ml可收集到纯度高达96％的中幼、晚幼成红细胞。经(Giemsa-Wright血细胞染色，联苯胺染色以及透射电镜检查鉴定，除极少量早幼成红细胞和网织红细胞外，几乎没有其他类型细胞杂混。台盼兰活体染色检查表明：分离后的中幼、晚幼成红细胞保持95％以上的活性率。本方法操作简便，需时间少，分离后的细胞纯度及活性率都较高，可直接用作细胞生物学、生化等研究。

3、利用细胞杂交的细胞工程手段，首次系统地研究了大鼠中幼、晚幼成红细胞与SP20(小鼠骨髓瘤细胞)融合后恶性表型的表达状态，分析自然去核前红细胞胞质对骨髓瘤细胞恶性增殖的调控作用，以及晚幼期固缩核重新被激活的可能性。

实验结果表明：杂交细胞出现瘤细胞与网织红细胞杂交同样的表型逆转及去恶性化特征，主要表现在细胞体积增大、核质比例减小；DNA合同速率降低、分裂指数下降，细胞生长显著减慢；在软琼脂中不形成集落，在裸鼠体内失去了长瘤能力。超微结构分析表明，杂交细胞表面膜微绒毛、指状突及皱褶突等均明显减少，核内异染色质比例增高，核仁数目减少或消失，细胞质中常可见有空泡或黑色致密颗粒出现；少数杂交细胞出现线粒体肿胀、核固缩甚至排核现象。

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