SW1088人脑星形胶质瘤细胞的复苏与冻存操作说明！

                 SW1088人脑星形胶质瘤细胞的复苏与冻存操作说明！

一、背景

SW1088细胞系具有较高的增殖能力和自我更新能力，同时也容易进行基因突变和表达调控等实验操作。因此，它成为了神经胶质瘤研究领域中一种重要的细胞模型。

二、SW1088细胞系|人脑星形胶质瘤细胞的复苏操作步骤

1、准备培养基：使用DMEM/F12培养基(含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液和0.25%的非必需氨基酸),并添加1%的L-谷氨酰胺和1%的β-巯基乙醇。

2、准备细胞冻存液：将SW1088细胞悬液转移到离心管中，用离心机离心5分钟(4000rpm),然后用PBS洗涤两次。接着，将细胞沉淀加入含有50ml DMEM/F12培养基的冰上预冷的离心管中。在室温下缓慢加入5ml冷冻保存液(含DMSO),轻轻摇晃使细胞充分接触冷冻保存液。将该管放入冰箱中，等待冷冻保存液完全渗透到细胞中。最后，用新的DMEM/F12培养基替换掉原来的冷冻保存液。

3、解冻细胞：将含有SW1088细胞的离心管放在冰上，等待其完全解冻。注意不要让细胞沉淀重新悬浮在液体中。

4、SW1088细胞系|人脑星形胶质瘤细胞传代培养：当SW1088细胞达到约70%~80%的密度时，将其转移到新的培养皿或瓶子中进行传代培养。通常情况下，每隔2-3天进行一次传代。

需要注意的是，在进行SW1088细胞复苏操作时，一定要注意无菌操作，避免污染。此外，为了保证细胞的健康生长，还需根据具体的实验需求调整培养条件和药物处理方案。

三、SW1088细胞系|人脑星形胶质瘤细胞在进行细胞冻存之前，需要做好以下准备工作

1、细胞培养：将SW1088细胞培养到所需的密度，通常为80%-90%。确保细胞生长良好，没有明显的病变或死亡。

2、冻存试剂：选择合适的冻存试剂，如冷冻保护剂、DMSO等。这些试剂可以保护细胞免受冰晶损伤，并有助于细胞复苏。

3、冻存设备：准备适当的冻存设备，如液氮罐、冷冻机等。确保设备的温度稳定，并且符合冻存要求。

4、冻存操作：将SW1088细胞悬液转移到冻存管中，并加入适量的冻存试剂。然后将冻存管放入液氮罐中，等待细胞冻结。在冻存过程中，需要定期检查细胞的状态，以确保细胞没有受到冰晶损伤。

5、复苏操作：当需要使用SW1088细胞时，需要先将其从液氮罐中取出，然后将其转移到复苏培养基中进行复苏。在复苏过程中，需要控制好温度和时间，以避免细胞受到过度刺激或死亡。

四、应用

SW1088细胞系|人脑星形胶质瘤细胞可以用于胶质瘤细胞糖蛋白及糖鞘脂特异性糖链谱研究：

利用凝集素芯片技术分析多种胶质瘤细胞的总蛋白、膜蛋白及糖鞘脂糖链谱,并将之与正常胶质细胞糖链谱相比较,分析胶质瘤细胞中的异常表达糖链结构,最终为发现胶质瘤细胞的糖链结构标记物提供一个新的思路。

实验方法：本研究以两株胶质母细胞瘤细胞U87MG和A172,两株星形胶质细胞瘤细胞SW1088和CCF-STTG1,以及一株永生化正常胶质细胞SVGp12为研究对象。对上述细胞进行培养后,分别提取细胞的总蛋白、膜蛋白和糖鞘脂,之后对所获取样本进行荧光标记,并将之与凝集素芯片孵育,随后扫描获取芯片图像并利用GenePix7.0软件读取荧光信号值。接下来对实验所获取之原始数据进行中值归一化和Raito值分析,分别比较不同细胞间的糖蛋白糖链谱和糖鞘脂糖链谱的差异,筛选胶质瘤细胞中具有显著性差异表达的糖链结构。

实验结果：在总蛋白糖链谱的研究与比较中,在四株胶质瘤细胞中共筛选出15种具有整体显著性上调/下调(Ratio≥1.5 or Ratio≤0.67,p≤0.05)趋势的凝集素。其中ECA识别的Galβ1-3/4GlcNAc、WFA识别的GalNAcα/β1-3/6Gal、MAL-Ⅱ识别的Siaα2-3Gal/GalNAc、PHA-E识别的Bisecting GlcNAc、PTL-I识别的GalNAc,GalNAcα1-3Gal和GalNAcα1-3Galβ1-3/4Glc、PNA识别的Galβ1-3GalNAc-Ser/Ter(T)、EEL识别的Galα1-3(Fucα1-2)Gal、LTL识别的Fucαl-2Galβ1-4GlcNAc和Fucα1-3(Galβ1-4)GlcNAc、GSL-I识别的αGalNAc和αGal、VVA识别的GalNAc和GalNAcα1-3Gal-Ser/Ter(Tn)、MAL-I识别的Galβ1-3/4GlcNAc均有较显著上调趋势,而NPA识别的High-Mannose和Manαl-6Man、PWM识别的Branched(LacNAc)n、GNA识别的High-Mannose和Manα1-3Man、BPL识别的Galβ1-3GalNAc和Terminal GalNAc均有较显著下调趋势。在膜蛋白糖链谱的研究与比较中,在四株胶质瘤细胞中共筛选出了6种具有整体显著性上调/下调趋势的凝集素。

其中PNA识别的Galβ1-3GalNAc-Ser/Ter(T)以及VVA识别的GalNAc和GalNAcα1-3Gal-Ser/Ter(Tn)显著性上调,而LEL识别的(GlcNAc)n、SNA识别的Siaα2-6Gal/GalNAc、LTL识别的Fucα1-2Galβ1-4GlcNAc和Fucα1-3(Galβ1-4)GlcNAc以及PTL-I所识别的GalNAc,GalNAcα1-3Galβ1-3/4Glc和GalNAcα1-3Gal显著性下调。由于糖鞘脂糖链与糖蛋白糖链有一定差异,相同凝集素所识别糖链在两组样本中不一定完全相同,在糖鞘脂糖链谱的比较中,在四株胶质瘤细胞中共筛选出10种具有整体显著性上调/下调趋势的凝集素。

其中EEL识别的Galα1-3(Fucα1-2)Gal以及MAL-I识别的Galβ1-4GlcNAc均显著性上调,而NPA识别的Fucα1-4GlcNAc和poly-Man、GNA识别的α1-3Man和Galα1-3Galβ1-4GlcNAc、MPL识别的Galβ1-3GalNAc,Galβ1-3GlcNAc和GalNAc、HHL识别的α1-3/1-6Man和Galα1-3Galβ1-4GlcNAc、LCA识别的Fucα1-6GlcNAc、PSA识别的Fucα1-6GlcNAc和Fucα1-3GlcNAc均显著性下调。

由上述发现进一步整理筛选可得,胶质瘤细胞总蛋白中Galβ1-3/4GlcNAc、Siaα2-3Gal/GalNAc、Bisecting GlcNAc、Fucαl-3(Galβ1-4)GlcNAc、Galα1-3(Fucα1-2)Gal、GalNAcα1-3Galβ1-3/4Glc、GalNAc-Gal等结构糖链显著性上调,而High-Mannose、Branched(LacNAc)n糖链显著性下调。在胶质瘤细胞膜蛋白中Gal-GalNAc结构糖链上调,而Siaα2-6Gal/GalNAc、Fucαl-3(Galβ1-4)GlcNAc、GalNAcαl-3Galβ1-3/4Glc、(GlcNAc)n糖链显著性下调。在胶质瘤细胞糖鞘脂中Galα1-3(Fucα1-2)Gal、Galβ1-4GlcNAc显著性上调,而Galal-3Galβ1-4GlcNAc、Fuc-GlcNAc、Gal-GlcNac结构糖链显著性下调。其中值得注意的是,膜蛋白中Siaα2-6Gal/GalNAc具有下调趋势且差异极其显著(p≤0.01),但该糖链在总蛋白样本中虽有下调趋势但差异性不显著(p≥0.05)。

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