目前国内大多数实验室使用的最普遍的核酸染料包括EB (溴化乙啶)、SYBR Green和GoldView,而这几种染料在安全性、稳定性和灵敏性方面都存在着不可忽视的缺点。其中EB是目前使用最广泛的核酸染料,其灵敏度相对较高,但它是一种剧毒且具有高诱变性的化学物质,极大的危及实验人员的身体健康;而SYBR Green稳定性差,在微碱性的电泳缓冲液中极易降解;市面上的GoldView则灵敏度较差,会影响实验结果的真实性。为解决上述问题,海基研发的全新一代EB替代染料-Safe Dye,安全、灵敏度高、稳定性好,使用Safe Dye EB替代染料配制而成的Loading Buffer和DNA Marker具有安全、灵敏度高、稳定性好、使用方便等优点。
使用Safe Dye EB替代染料时,在制胶过程中无需加入EB 、SYBR Green和GoldView等核酸染料,只需将DNA(PCR产物、质粒或基因组DNA)与Loading Buffer充分混合即可进行凝胶电泳。由于Safe Dye EB替代染料的激发波长与EB激发光波长相同,故无需更换实验设备。海基推出的Safe Dye真正实现了安全、灵敏度高、稳定性好的保证,成为真正的EB替代染料,是广大实验室工作人员的最佳选择。
主要特征
安全保证:是EB、SYBR Green、GoldView染料新型的代替物,经细胞学试验证明Safe Dye EB替代物不能穿透细胞膜,具有极低的细胞毒性和诱变性。
高灵敏度:等于或稍高于EB,远远高于GoldView和SYBR Green。
使用方便:无需加入凝胶中,只需将DNA(PCR产物、质粒或基因组DNA)或RNA与Loading Buffer充分混合即可进行凝胶电泳,电泳后可直接进行观察。
简化制胶过程:1min即可制备琼脂糖凝胶。
由于该染料无需添加入凝胶中,使制备的凝胶可保存更长时间,从而节省凝胶的用量。
激发波长为300nm(或310nm),与EB激发光波长相同,无需更换实验室设备。
稳定性高于EB、SYBR Green、GoldView,可长期储存。
储存
室温避光长期保存,可保存两年。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
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应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
![](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1ab7e4d0-ee4e-4ac0-a331-5e5047ebd645.jpg)
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性
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